一、Expression of TIMP-1 and TIMP-2 in rats with hepatic fibrosis（论文文献综述）
陈旭楠[1]（2021）在《无乳链球菌对奶牛乳腺成纤维细胞金属蛋白酶和uPA系统表达的影响及信号通路的研究》文中提出奶牛乳腺纤维化是一种以细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）过度沉积和结缔组织过度增生为特征的疾病。无乳链球菌（Streptococcus agalactiae,S.agalactiae）是导致奶牛慢性乳腺炎的主要病原菌之一,其持续感染引起乳腺结构损伤,进而发展为纤维化,甚至乳腺硬化。本课题为了明确调控ECM降解代谢相关酶在乳腺纤维化的作用,通过研究S.agalactiae诱导乳腺纤维化过程中MMPs/TIMPs与uPA系统的表达及其相关通路,以探讨S.agalactiae诱导乳腺纤维化的分子机制。本试验筛选107cfu/m L浓度的热灭活S.agalactiae菌液作用于体外培养的BMFBs,筛选四个时间点（6h、12 h、24 h、48 h）提取细胞的总RNA和总蛋白,通过q PCR、蛋白印迹技术（Western blot）检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、uPA、PAI-1 m RNA和蛋白的表达水平,并通过明胶酶谱试验检测细胞上清液中MMP-2和MMP-9的活性;利用相同方法检测ERK1/2、P38、JNK及其磷酸化水平的表达,添加MAPKs通路抑制剂,通过明胶酶谱试验检测细胞上清液中MMP-2和MMP-9的活性,应用Western blot方法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-1-2及uPA、PAI-1的表达水平。结果表明:热灭活的S.agalactiae对MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、uPA、PAI-1 m RNA的表达均有不同程度的下降趋势,但可上调MMP-2、TIMP-1的m RNA水平;明胶酶谱法检测MMP-2的酶活性较MMP-9的活性明显,且其二者活性在作用48h被明显激活;MMP-2和MMP-9的蛋白水平表达与对照组相比,主要呈先升高后下降的折线型趋势,在作用后期MMP-2还出现了回升趋势;TIMP-1蛋白水平与对照组相比主要呈先下降后上升的趋势,与MMP-9的表达趋势相反,TIMP-2蛋白表达与对照组相比呈上升趋势;uPA和PAI-1的蛋白水平与对照组相比均呈先降低后升高再降低的趋势,均在24h达到峰值,随后呈下降趋势。热灭活S.agalactiae促进BMFBs ERK1/2、P38和JNK m RNA的表达及其磷酸化蛋白的表达,酶谱显示MAPKs（ERK1/2、P38、JNK）特异性抑制剂能够抑制MMP-2/9活性的分泌,且对MMP-9活性的抑制效果较为显着;MAPKs特异性抑制剂减弱S.agalactiae诱导的TIMP-1、-2和PAI-1的表达,且存在抑制剂联合作用的效应。研究表明,热灭活的S.agalactiae诱导BMFBs中MMP-2、MMP-9和TIMP-1、TIMP-2的表达,并激活uPA系统参与调控MMPs的表达及活性;MAPKs信号通路参与调控几种主要的MMPs/TIMPs及uPA/PAI-1的表达。
吕艳杭[2]（2021）在《基于PKCα/Nrf2/ROS通路探讨柔肝化纤颗粒抗肝纤维化大鼠的作用》文中研究说明目的:观察柔肝化纤颗粒对四氯化碳（CCl4）复合因素诱导的肝纤维化大鼠模型的干预作用,从PKCα/Nrf2/ROS信号通路方面探讨柔肝化纤颗粒抗肝纤维化的作用机制。方法:将48只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、病理模型组、秋水仙碱组、柔肝化纤颗组,每组12只。除正常组外,其余每组大鼠采用皮下注射40%CCl4（第一次使用5ml/kg体重,以后每隔3天以每3ml/kg体重,每周2次,共8周）皮下注射,联合高脂低蛋白食物（以玉米面为饲料,实验第一、二周加用0.5%胆固醇、20%猪油）,为了防止肝纤维化自然修复对实验结果造成的影响,除正常组外,其余各组仍每周腹腔注射一次40%CCl4油剂3ml/kg体重/每次;正常组正常饲养,同时采用同体积花生油皮下注射8周后灌胃给予同体积的生理盐水,肝纤维化模型组造模成功病理模型组于4mg/kg生理盐水灌胃,秋水仙碱组于每日0.11mg/kg体重给予秋水仙碱进行灌胃;柔肝化纤颗粒剂量组予柔肝化纤颗粒溶液4mg/kg灌胃,每周3次,共8周,连续8周取材。各组分别于用药8周后,禁食12h,经1%戊巴比妥麻醉,股静脉采血后处死,开腹剖取肝脏,通过HE染色、Masson染色观察肝脏情况,采用ELLSA检测活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）、超氧化歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量;采用PCR、Western Blot检测平滑肌肌动蛋白（α-Smooth Muscle Actin,α-SMA）、E-钙黏蛋白（E-Cadherin,E-Cad）、I型胶原蛋白酶（Collagen I,Col I）、III型胶原蛋白酶（Collagen III,Col III）、血红素氧合酶1（Heme Oxygenase-1,HO-1）、醌氧化还原酶1（NAD（P）H:Quinone dehydrogenase1,NQO1）、蛋白激酶C（Protein Kinase C,PKCα）、核因子E2相关因子（NF-E2-related factor 2,Nrf2）m RNA及蛋白表达。结果:1.柔肝化纤颗粒对肝组织的影响正常组大鼠肝组织的肝小叶结构完整,轮廓清晰,肝组织致密,无假小叶结节形成,汇管区及其周围未见小胆管及纤维组织增生,胞核位于中央。病理模型组肝小叶结构被破坏,甚至消失,结节形成,肝索排列紊乱,汇管区大量增生的纤维,呈条索状,肝细胞脂肪变性,胞浆出现许多大小不等的空泡。秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组均存在肝小叶结构不清晰,汇管区及其周围小胆管可见纤维组织增生,肝细胞脂肪变性,胞浆出现许多大小不等的空泡,但程度均较病理模型组有明显减轻。2.柔肝化纤颗粒对SOD、GSH-Px、MDA含量的影响1与正常组相比,病理模型组、秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的MDA含2量显着升高（P<0.05）;与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组MDA含量均有不同程度降低（P<0.05）。3与正常组相比,病理模型组、秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的SOD、GSH-Px显着降低（P<0.05）;与模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组明显升高（P<0.05）。3.柔肝化纤颗粒对血清ROS的影响与正常组相比,病理模型组、秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的ROS含量明显升高（P<0.05）;与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的ROS含量均降低（P<0.05）。4.柔肝化纤颗粒对α-SMA m RNA、E-Cadherin m RNA、PKCαm RNA、Nrf2mRNA、HO-1 m RNA、NQO1 m RNA、Collagen I m RNA、Collagen III m RNA表达的影响1与正常组相比,病理模型组的PKCαm RNA相对表达量下降（P<0.05）,柔肝化纤颗粒组的PKCαm RNA相对表达量升高（P<0.05）,秋水仙碱组无明显差异（P>0.05）;与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的PKCαm RNA相对表达量明显升高（P<0.05）。2与正常组相比,病理模型组、秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的Nrf2m RNA相对表达量下降（P<0.05）;与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的Nrf2 m RNA相对表达量明显升高（P<0.05）。3与正常组相比,病理模型组、秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的HO-1m RNA相对表达量下降（P<0.05）;与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的HO-1 m RNA相对表达量明显升高（P<0.05）。4与正常组相比,病理模型组的NQO1 m RNA相对表达量下降（P<0.05）;与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的NQO1 m RNA相对表达量明显升高（P<0.05）。5与正常组相比,病理模型组、秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的α-SMA m RNA相对表达量升高（P<0.05）;与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的α-SMA m RNA相对表达量明显下降（P<0.05）。6与正常组相比,病理模型组、秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的E-Cadherin m RNA相对表达量升高（P<0.05）;与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的E-Cadherin m RNA相对表达量明显下降（P<0.05）。?与正常组相比,病理模型组的Collagen I m RNA相对表达量升高（P<0.05）,柔肝化颗粒组Collagen I m RNA相对表达量显着下降（P<0.05）,秋水仙碱组无明显差异（P>0.05）;与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的Collagen I m RNA相对表达量明显下降（P<0.05）。7与正常组相比,病理模型组Collagen III m RNA相对表达量显着升高（P<0.05）,柔肝化颗粒组Collagen III m RNA相对表达量显着下降（P<0.05）,秋水仙碱组无明显差异（P>0.05）;与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的Collagen III m RNA相对表达量明显下降（P<0.05）。5.柔肝化纤颗粒对α-SMA、E-Cadherin、HO-1、NQO1、PKCα、Nrf2、Collagen I、Collagen III蛋白表达的影响1与正常组相比,病理模型组、秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的PKCα蛋白表达下降（P<0.05）;与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的PKCα蛋白表达明显升高（P<0.05）。2与正常组相比,病理模型组、秋水仙碱组Nrf2蛋白表达下降（P<0.05）,柔肝化纤颗粒组Nrf2蛋白表达无明显差异（P>0.05）;与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的Nrf2蛋白表达明显升高（P<0.05）。3与正常组相比,病理模型组、柔肝化纤颗粒组的HO-1蛋白相对表达量下降（P<0.05）,秋水仙碱组HO-1蛋白相对表达量无明显差异（P>0.05）;与病理模型组相比,秋水仙碱组的HO-1蛋白相对表达量明显升高（P<0.05）,柔肝化纤颗粒升高不明显（P>0.05）。3与正常组相比,病理模型组、秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的NQO1蛋白相对表达量下降（P<0.05）;与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的NQO1蛋白相对表达量明显升高（P<0.05）。4与正常组相比,病理模型组的α-SMA蛋白相对表达量升高（P<0.05）,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的α-SMA蛋白相对表达量无明显差异（P>0.05）;与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的α-SMA蛋白相对表达量明显下降（P<0.05）。5与正常组相比,病理模型组的E-Cadherin蛋白相对表达量升高（P<0.05）,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的E-Cadherin蛋白相对表达量无明显差异（P>0.05）;与病理模型组相比,柔肝化纤颗粒组的E-Cadherin蛋白相对表达量明显下降（P<0.05）。6与正常组相比,病理模型组的Collagen I蛋白相对表达量升高（P<0.05）,柔肝化纤颗粒组的Collagen I蛋白相对表达量下降（P<0.05）,秋水仙碱组的Collagen I蛋白相对表达量无明显差异（P>0.05）;与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的Collagen I蛋白相对表达量明显下降（P<0.05）。7与正常组相比,病理模型组的Collagen III蛋白相对表达量升高（P<0.05）,柔肝化纤颗粒组的Collagen I蛋白相对表达量下降（P<0.05）,秋水仙碱组的Collagen I蛋白相对表达量无明显差异（P>0.05）;与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的Collagen III蛋白相对表达量明显下降（P<0.05）。结论:柔肝化纤颗粒可改善CCl4诱导的大鼠的肝纤维化程度,显着降低血清中ROS、MDA含量,升高血清中SOD、GSH-Px的含量,提示柔肝化纤颗粒对肝纤维化大鼠具有一定的抗氧化应激作用。柔肝化纤颗粒通过对PKCα的激活,促进Nrf2发生核转移,抑制ROS信号通路的表达以抗氧化应激反应,下调α-SMA、E-cadherin的表达以抑制HSCs活化,减少Collagen I、Collagen III分泌,减少ECM在肝脏中的沉积,从而实现逆转肝纤维化进程。
陈旭楠,丁玉林,张媛媛,李慧娟,王凤龙[3]（2021）在《无乳链球菌对奶牛乳腺成纤维细胞金属蛋白酶及uPA系统表达的影响》文中进行了进一步梳理为研究无乳链球菌（Streptococcus agalactiae,S. agalactiae）作用奶牛乳腺成纤维细胞（BMFBs）后对MMPs/TIMPs与uPA系统（uPA/PAI-1）表达的影响,以进一步阐明MMPs/TIMPs与uPA系统在调控细胞外基质（ECM）代谢的作用,将107 cfu/mL热灭活S. agalactiae菌液作用于BMFBs,在作用后不同时间点（6、12、24、48 h）通过RT-qPCR和Western Blot检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、uPA、PAI-1 mRNA转录水平和相应蛋白表达水平,并用明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的酶活性。结果显示:热灭活S. agalactiae作用后,MMP-9、TIMP-2、uPA、PAI-1 mRNA转录水平均有不同程度下降趋势,但MMP-2 mRNA水平上调,TIMP-1mRNA水平呈先上升后下降趋势;明胶酶谱法检测MMP-2的酶活性较MMP-9明显,二者均在作用6 h、48 h活性最强;MMP-2和MMP-9蛋白表达水平与对照组相比主要呈先升高后下降趋势,但在作用后期MMP-2蛋白表达又出现了回升趋势;TIMP-1蛋白水平与对照组相比主要呈先下降后上升趋势,在作用前期与MMP-9蛋白表达相反,TIMP-2蛋白表达与对照组相比呈上升趋势;uPA和PAI-1蛋白水平与对照组相比均呈先降低后升高再降低趋势,均在24h达到峰值,随后呈下降趋势。研究表明,热灭活S. agalactiae菌液可诱导BMFBs中MMPs/TIMPs表达,影响uPA系统参与调控MMPs的表达及活性。
张嘉鑫[4]（2021）在《基于弹性蛋白合成及降解探讨益肝消积方干预早期肝硬化的机制研究》文中研究指明背景:肝硬化（Hepatic cirrhosis,HC）为肝脏受各种损伤因素侵袭,出现以肝纤维化、假小叶为特点的疾病,由乙肝病毒、丙肝病毒、酒精等一种或多种病因引起。5年生存率为14-35%,已成为全球成人死亡率第14高的病因。目前的治疗主要集中在病因与并发症防治方面,肝硬化本身能否被逆转一直存在争议。国内外学者认为,肝硬化实现逆转必然涉及以下三方面环节:细胞外基质（extracellular matrix,ECM）降解,肝细胞再生及肝小叶结构重建。其中,ECM降解为重要前提。近年研究提示,弹性蛋白合成、降解及其交联阻碍了 ECM降解,进而影响逆转过程。弹性蛋白是由肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）分泌的,为ECM重要组分。其在正常肝脏中也存在,但含量极低,在肝硬化阶段,沉积迅速。目前,中药单体、复方研究多集中于抗纤维化领域,对早期肝硬化关注较少,需要更多基础研究及高质量的临床试验进一步证实中药疗效优势,并对其相关机制进行深入挖掘。中药复方具有多层次、多靶点的先天优势,但现有研究多聚焦于抑制HSCs活化、促进胶原降解或抗肝窦毛细血管化等方向,尚未对中医药潜在的调控弹性蛋白合成及降解的相关机制进行探索。目的:基于益肝消积方对弹性蛋白合成及降解的调控作用,探索在四氯化碳（CCl4）诱导的肝脏发生损伤形成早期肝硬化病变后,该复方干预早期肝硬化的效果及其可能的机制,以期为益肝消积方进一步成果转化提供理论支撑,同时亦为其它防治早期肝硬化药物的研发提供方向。方法:通过给予SPF级雄性Sprague Dawley大鼠（200±10g）1ml/kg腹腔内注射50%CCl4和橄榄油混合液,2次/周,共6周,构建早期肝硬化模型。7周始,予益肝消积方、阳性对照药（安络化纤丸）,1ml/100g剂量灌胃。空白对照、模型对照组予等剂量蒸馏水灌胃,日1次,持续6周。用生化法检测ALT、AST评估肝功能;行组织病理学染色（HE染色、天狼猩红染色及Masson染色）评估早期肝硬化病变进展、检测肝脏胶原沉积;用弹性纤维染色评估肝脏的弹性蛋白沉积;免疫组织化学染色、免疫荧光染色观察肝组织中TGF-β1、CD68、CD80、CD163和α-SMA表达情况;用蛋白免疫印迹（Western blot,WB）分析以及实时定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测 Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CCL2、CCR2、TGF-β1、TGF-βR-Ⅱ、Smad2/3、P-Smad2/3、Smad4、Smad7、Sp1、TNF-α、Ras、MEK1/2、ERK1/2、MMP-2、MMP-9、MMP-12、TIMP-1的蛋白水平及bFGF、弹性蛋白（Elastin）的mRNA水平变化,进而对益肝消积方干预早期肝硬化的作用及其相关机制进行初步探索。结果:1.模型制备:予50%CCl4/橄榄油混合液,腹腔注射,1ml/kg,2次/周。造模6周后,组织病理染色发现,模型组大鼠肝脏出现大量纤维增生,汇管区增宽,形成假小叶,说明模型制备成功。2.一般情况:益肝消积方治疗组及阳性对照安络化纤丸组大鼠毛色、精神状态、进食量等方面均优于模型组。体重上,治疗组大鼠体重均明显高于模型组（P<0.01）;体重增长趋势上,益肝消积方组优于安络化纤丸组。3.肝功能:与正常组相比,模型组大鼠血清中ALT、AST含量升高显着（P<0.01）。益肝消积方和阳性对照组（安络化纤丸）较模型组显着下降（P<0.05或P<0.01）。与安络化纤丸相比,益肝消积方在改善ALT方面疗效较优。4.肝组织病理学表现:从肝脏外观看,模型组大鼠颜色变暗,体积缩小,表面粗糙,边缘较钝,质地较硬韧,部分肝脏在剥离时与胸膜腔其他组织相粘连,难以剥离。益肝消积方和安络化纤丸治疗后的大鼠肝体积缩小不明显,表面粗糙不明显,质地较柔韧,未发现与胸腔其他组织粘连,较易剥离。此外,通过组织学染色（HE染色、Masson染色、天狼猩红染色）发现,与模型组大鼠相比,益肝消积方和安络化纤丸治疗后的大鼠肝脏炎性细胞浸润程度减轻,病变范围减小,汇管区及周围纤维增生程度减轻,假小叶数量明显减少,且胶原纤维等细胞外基质成分沉积减少（P<0.01）。对比安络化纤丸,益肝消积方抑制胶原沉积的效果较好。说明益肝消积方能够有效抑制炎细胞浸润,减少胶原纤维过度沉积,从而发挥干预早期肝硬化的作用。5.弹性纤维染色结果:为观测弹性纤维变化,我们对其进行了特殊染色。实验发现,在早期肝硬化阶段,模型组弹性纤维含量增多迅速,显着高于空白对照组（P<0.01）。益肝消积方、安络化纤丸治疗组与模型组相比,弹性纤维含量显着减少（P<0.01）,且益肝消积方效果较明显。6.免疫组化、免疫荧光染色结果:与空白对照组相比,模型组TGF-β1、α-SMA、CD68、CD80、CD163阳性表达区域明显增多。与模型组相比,益肝消积方、安络化纤丸组阳性区域明显减少。7.qRT-PCR结果:模型组与空白对照组相比,ElastinmRNA表达量显着升高（P<0.01）。与模型组相比,益肝消积方治疗组ElastinmRNA表达量显着下降（P<0.01）。对比安络化纤丸,益肝消积方减少ElastinmRNA表达更显着;模型组bFGF mRNA较正常组升高显着（P<0.01）。对比模型组,益肝消积方治疗组bFGF mRNA表达量显着下降（P<0.01）。对比安络化纤丸,益肝消积方下调bFGF mRNA表达更显着。8.Western blot 结果:与空白对照组相比,模型组 Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CCL2、CCR2、TGF-β1、TGF-β RⅡ、P-Smad2/3、Smad4、Ras、Sp1、MMP-2、MMP-9、MMP-12、TIMP-1 蛋白表达含量明显升高（P<0.05 或 P<0.01）,Smad7、TNF-α、MEK1/2 蛋白表达含量明显下降（P<0.05或P<0.01）;与模型组相比,益肝消积方治疗组Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CCL2、CCR2、TGF-β1、TGF-β RⅡ、P-Smad2/3、Smad4、Ras、Sp1、MMP-2、MMP-9、MMP-12、TIMP-1 蛋白表达含量明显降低（P<0.05 或 P<0.01）,Smad7、TNF-α、MEK1/2蛋白表达含量明显上升（P<0.05或P<0.01）。结论:1.予50%CCl4/橄榄油混合液,腹腔注射,1ml/kg,2次/周,共6周,可成功制备早期肝硬化大鼠模型。予益肝消积方干预后,可改善早期肝硬化大鼠体重、肝功能;有效抑制早期肝硬化大鼠肝脏炎性细胞浸润,肝细胞变性、坏死,胶原纤维（Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ）、弹性纤维等ECM沉积,改善病变程度。2.益肝消积方可抑制α-SMA表达,下调CD68、CD80、CD163表达量,抑制CCL2-CCR2通路,进而具有抑制HSCs激活,抑制单核/巨噬细胞浸润,及向M2型巨噬细胞极化,阻止单核/巨噬细胞向损伤肝组织部位迁移,减少Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ和Elastin含量,发挥干预早期肝硬化的作用。3.益肝消积方能通过 TGF-β1/Smads、TGF-β1/Ras/ERK 和 bFGF、TNF-α/MEK/ERK信号转导通路抑制胶原纤维、弹性纤维等ECM合成,发挥干预早期肝硬化的作用。4.益肝消积方可通过调节MMPs/TIMPs酶系,促进胶原纤维、弹性纤维等ECM降解,达到干预早期肝硬化的作用。
缪增强[5]（2020）在《金黄色葡萄球菌诱导奶牛乳腺纤维化MMPs/TIMPS和uPA系统的表达及其信号通路的研究》文中认为奶牛乳腺纤维化是一种以细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）过度沉积和肌成纤维细胞过度增殖为特征的疾病。金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）是导致奶牛慢性乳腺炎的主要病原菌之一,其持续感染引起乳腺结构损伤,进而发展为纤维化,甚至乳腺硬化。本课题组前期的研究均未涉及到调控ECM降解代谢的内容,也未见国内外的相关研究报道。因此,本文通过体内和体外研究S.aureus诱导乳腺纤维化过程中MMPs/TIMPs与uPA系统的表达以及其相关通路,以探讨S.aureus诱导乳腺纤维化的分子机制。本试验采用0、105、106、108 CFU/mL热灭活的S.aureus菌液作用于体外培养的BMFBs和BMECs,于6 h、12 h、24 h、48 h提取细胞的总RNA和总蛋白,通过qPCR、Western blot 方法检测 MMP-1、-2、-3、-9、-13、TIMP-1、-2、uPA、uPAR、PAI-1和COL I mRNA和蛋白的表达水平,并通过胶原酶谱试验检测细胞液上清液中MMP-2和-9的活性;筛选106 CFU/mL热灭活的S.aureus作用BMFBs 6 h,进行转录组测序,利用生物信息学分析差异表达基因及信号通路,采用qPCR、Western blot方法检测ERK1/2、P38、JNK及其磷酸化水平的表达,添加MAPKs特异性抑制剂,通过胶原酶谱试验检测细胞液上清液中MMP-2的活性,应用Western blot方法检测MMP-2/TIMP-1、-2及uPA/PAI-1的表达水平;利用S.aureus感染的小鼠乳腺纤维化模型,Masson染色观察各组小鼠在不同感染时期纤维化的情况,采用qPCR从基因水平检测MMP-1、-3、-13、TIMP-1、uPA和PAI-1的表达情况,采用免疫组化法检测MMP-1、-3、-13、TIMP-1、uPA和PAI-1的表达及分布情况。结果显示:（1）不同浓度热灭活的S.aureus1对BMFBs MM-P、-2、-3、-9、-13、TIMP-1、-2、uPA、uPAR、PAI-1和COL I mRNA的表达均有不同程度的上升趋势,但在后期升高趋势平缓,蛋白的表达随时间的延长其表达量也呈上升趋势。MMP-2较MMP-9的活性较明显,但其二者活性在24 h和48 h均显着增高。BMECs MMP-1、-2、-3、-9、-13、TIMP-1、-2、uPAR和COLI mRNA的表达均有不同程度的上升趋势,但显着变化趋势集中在6h和48h,而uPA、PAI-1 mRNA的表达随作用时间的延长呈现下降趋势,但 MMP-1、-2、-3、-9、-13、TIMP-1、-2、uPA、uPAR、PAI-1和COL I蛋白的表达随作用时间的延长呈现上升趋势。MMP-2和MMP-9的活性相当,其二者活性在24 h和48 h均显着增高。BMFBs和BMECs MMP-1、-2、-3、-9、-13、TIMP-1、-2、uPA、uPAR、PAI-1和COL I的表达随时间的变化趋势显示:BMFBs MMP-1、-2、-9、-13和uPA均有一定的下降趋势,且与COL I的表达趋势相反,MMP-3与COLI的表达趋势一致,呈上升趋势,TIMP-1、-2及PAI-1表现出一定上升趋势,表现出抑制作用。BMECs MMP-2、-3、-9、uPA及TIMP-1、-2均与COL I表达趋势一致,且在12 h达到上升峰值,随后逐渐趋缓,MMP-1、-13及PAI-1均与COLI表达趋势相反,出现较明显的下降趋势。（2）转录组学分析表明S.aureus诱导BMFBs MMPs、TIMPs、大量的胶原蛋白和uPA系统的表达,涉及PI3K-Akt、Toll样受体、MAPKs、TNF和IL-17信号通路。（3）热灭活S.aureus促进BMFBs P38、JNK和ERK1/2 mRNA的表达及其磷酸化蛋白的表达,MAPKs（ERK1/2、P38、JNK）特异性抑制剂均能抑制MMP-2的分泌活性,且在24 h抑制效果较为显着。MAPKs特异性抑制剂减弱S.aureus诱导的MMP-2、TIMP-1、-2、uPA和PAI-1的表达,在24 h抑制效果较为显着,且存在抑制剂联合作用的效应。（4）S.aureus诱导小鼠乳腺纤维化,促进乳腺组织中MMP-1、-3、-13、TIMP-1和uPA/PAI-1的表达,且MMP-1、-3、-1 3/TIMP-1和uPA/PAI-1主要在巨噬细胞、乳腺上皮细胞、增生的成纤维细胞中表达。结论:本研究表明不同浓度的热灭活S.aureus诱导BMFBs和BMECs中MMP-1、-2、-3、-9、-13和TIMP-1、-2的表达,并激活uPA系统参与调控MMPs的表达及活性;MAPKs信号通路参与调控几种主要的MMPs/TIMPs及uPA/PAI-1的表达;S.aureus诱导的小鼠乳腺纤维化模型,乳腺组织中MMP-1、-3、-13、TIMP-1和uPA/PAI-1的表达升高,并且其主要在巨噬细胞、乳腺上皮细胞、增生的成纤维细胞中表达。
刘亚[6]（2020）在《H2S在运动干预糖尿病大鼠心肌纤维化中的作用及机制研究》文中进行了进一步梳理研究目的:本实验通过对6周龄的SD雄性大鼠喂养高脂膳食饲养,再腹腔注射小剂量STZ建立2型糖尿病大鼠模型,成功建模后,进行有氧运动干预。一方面,通过对大鼠心肌组织的HE、Masson染色观察和Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的免疫组化结果分析,了解心肌组织纤维化的病理变化程度,探究有氧运动对心肌纤维化的干预作用;另一方面,通过检测心肌组织中H2S、AngⅡ/TGF-β1/Smad2通路的变化,从MMPs/TIMPs系统,探讨有氧运动、H2S、AngⅡ/TGF-β1/S mad2通路的关系,为运动介导糖尿病及并发症的机制研究提供实验依据。研究方法:本研究将雄性SD大鼠,随机分成两组,对照组（NC组,n=10）普通饲料,糖尿病模型组（DM组,n=30）高脂饲料。高脂膳食喂养5周后,DM组按40mg/kg剂量注射1%STZ,一周后测大鼠尾静脉取血,若空腹血糖测得超过7.8mmol/L,则表明建模成功。建模成功后,恢复正常饮食。并将大鼠分为两组,糖尿病对照组（DM组,n=7）,糖尿病运动组（DME组,n=7）。DME组每天无负重游泳训练,每周6天,每次60min,共训练8周。在大鼠末次训练后,禁食12h,次日以2.5ml/kg的剂量,腹腔注射10%的水合氯醛麻醉,随后胸主动脉取血后保存于-20℃,以备待测,取左心室心肌组织,一部分置于4%的甲醛溶液中,另一部分投入液氮,-80℃冰箱保存。研究结果:1)与NC组相比,DM组大鼠血清FBG、HOMA-IR非常显着性增加（P<0.01）,而大鼠血清INS含量减少,且无显着性差异（P>0.05）;与DM组相比,DME组大鼠血清FBG、HOMA-IR显着性减少（P<0.05）,而大鼠血清INS含量减少,且无显着性差异（P>0.05）;2)HE染色结果显示:在光镜下观察NC组大鼠心肌细胞排列整齐,细胞形态、大小、间隙正常,细胞核均匀分布;DM组大鼠心肌细胞分布不整齐,细胞形态、大小、间隙增加,有炎性细胞的出现;DME组大鼠心肌细胞分布较平整,细胞形态、大小、间隙尚为正常;MASSON染色结果显示:NC组间质蓝染面积小,未见明显纤维化,DM组间质蓝染面积明显增加,有明显的纤维化（P<0.01）;DME组间质蓝染面积减少,有少许纤维化改变（P<0.01）;3)半定量结果显示:与NC组相比,DM组大鼠心肌组织Ⅰ型胶原纤维显着性增加（P<0.05）;而Ⅲ型胶原纤维增加,但无显着差异（P>0.05）;与DM组相比,DME组大鼠心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维减少,但无显着性差异（P>0.05）;4)与NC组相比,DM组大鼠心肌组织H2S含量非常显着性减少（P<0.01）;与DM组相比,DME组大鼠心肌组织H2S含量非常显着性增加（P<0.01）;5)与NC组相比,DM组大鼠心肌组织TGF-β1、Smad2、TIMP2蛋白表达量增加,但无显着性差异（P>0.05）,而大鼠心肌组织MMP2蛋白表达量减少,也无显着性差异（P>0.05）;与DM组相比,DME组大鼠心肌组织TGF-β1、Smad2、MMP2、TIMP2蛋白表达量减少,且无显着性差异（P>0.05）;6)与NC组相比,DM组大鼠心肌组织TGF-β1、Ⅲ型胶原纤维mRNA表达量显着性升高（P<0.05）,心肌组织AngⅡ、Smad2、Ⅰ、型胶原纤维、TIMP2mRNA表达量升高,但无显着性差异H2S在运动干预下对糖尿病心肌纤维化作用机制的研究（P>0.05）,而MMP2mRNA表达量降低,也无显着性差异（P>0.05）;与DM组相比,DME组大鼠心肌组织TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维mRNA表达量显着性降低（P<0.01）,而AngⅡ、Smad2、MMP2、TIMP2mRNA表达量均降低,但无显着性差异（P>0.05）。结论:（1）本实验成功构建了糖尿病模型,糖尿病大鼠心肌组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白增加明显,说明出现了一定程度的纤维化。（2）有氧运动可以有效阻止糖尿病心肌纤维化的发生发展,其机制可能与H2S抑制AngⅡ/TGF-β1/Smad2信号通路有关。
赵楠[7]（2020）在《大肠杆菌诱导奶牛乳腺成纤维细胞的MMPs/TIMPs和uPA系统表达的研究》文中提出奶牛乳腺炎是我国奶牛养殖业的一种常见疾病,其中受到大肠杆菌（E.coli）感染而引起的奶牛乳腺炎占很大比例。大肠杆菌性奶牛乳腺炎的主要致病原理是奶牛乳腺受到损伤后,被E.coli感染入侵,导致奶牛乳腺细胞分泌过量的细胞外基质（ECM）,继而造成乳腺的持续性纤维化,病情发展到后期,奶牛乳腺还会发生硬化。本文的实验主要通过深入研究E.coli对奶牛乳腺成纤维细胞（BMFBs）的MMPs、TIMPs以及uPA系统表达的影响,进一步阐明MMPs、TIMPs以及uPA系统在调控ECM代谢中所起的作用。本实验取已患有乳腺炎的奶牛乳腺,从中分离出致病的病原菌E.coli,并制成不同浓度的热灭活菌液,设计菌液浓度分别为105 cfu/mL、106 cfu/mL、108 cfu/mL,让不同浓度的热灭活E.coli作用BMFB,在作用6 h、12 h、24 h、48 h时分别对BMFB中分泌的MMPs（包括MMP-1/MMP-2/MMP-3/MMP-9/MMP-13）、TIMPs（包括TIMP-1/TIMP-2）以及uPA系统（包括uPA/uPAR/PAI-1）进行检测,应用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）来检测其mRNA的转录水平的表达,Western-blot技术来检测其蛋白水平的表达。结果显示:（1）不同浓度的热灭活E.coli作用BMFB后,BMFB在各时间点分泌的几种MMPs（MMP-1/MMP-2/MMP-3/MMP-9/MMP-13）的 mRNA 转录水平与对照组相比主要呈升高趋势;其蛋白水平表达不相一致,其中MMP-1的蛋白水平与对照组相比表达除105 cfu/mL处理组在作用6 h显着上升,其余组表达主要呈下降趋势,MMP-2的蛋白水平与对照组相比表达主要呈先下降后升高的趋势,MMP-3/MMP-9/MMP-13的蛋白水平与对照组相比表达主要呈先下降后升高的趋势。（2）不同浓度的热灭活E.coli作用BMFB后,BMFB在各时间点分泌的TIMP-1/TIMP-2的mRNA转录水平与对照组相比主要呈升高趋势;其蛋白水平表达不相一致,其中TIMP-1的蛋白水平与对照组相比105 cfu/mL处理组表达多为下调,其余浓度处理组在作用6 h、24 h表达下调,在作用12 h和48 h表达上调,TIMP-2的蛋白表达水平与对照组相比除108cfu/mL处理组在作用24 h表达上调,其余均为下调。（3）不同浓度的热灭活E.coli作用BMFB后,BMFB在各时间点分泌的uPA/uPAR/PAI-1的mRNA转录水平主要呈升高趋势;其蛋白水平表达不相一致,其中uPA的蛋白表达主要呈先降低后增高的趋势,uPAR的蛋白表达主要呈先升高后降低的趋势,PAI-1的蛋白水平在作用24 h与对照组相比表达显着上调,在作用其余时间点均表达下调。研究表明,热灭活的E.coli菌液诱导BMFB的MMP-1/MMP-2/MMP-3/MMP-9/MMP-13、TIMP-1/TIMP-2和uPA/uPAR/PAI-1的表达,并具有一定的时效和量效关系,提示了 MMPs、TIMPs和uPA系统参与奶牛乳腺的纤维化,uPA系统被激活调控了 MMPs/TIMPs的表达,进而参与降解ECM来影响奶牛乳腺纤维化过程,并可能对E.coli作用BMFB后分泌的ECM进行了调控,为MMPs、TIMPs和uPA系统成为治疗奶牛乳腺纤维化的靶点提供了一定依据。
许琪华[8]（2020）在《注射用丹参多酚酸盐对肝纤维化大鼠的保护作用及机制研究》文中指出目的:肝纤维化是多种慢性肝病所致的一种可逆的纤维性瘢痕,主要表现为肝组织内细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的过度增生与沉积,导致肝脏组织结构的异常改变。注射用丹参多酚酸盐（Salvianolatelyophilized injection,SLI）是以三级指纹图谱从单味中药丹参中提取的以丹参乙酸镁（magnesium lithospermate B,MLB）为主要成分的盐类化合物,具有抗炎、抗氧化、保肝护肝的药理作用。目前SLI在肝纤维化的保护作用及机制研究尚少见。本实验研究旨在探索SLI对肝纤维化大鼠的保护作用并在人肝星状细胞LX-2上探讨相关分子机制。方法:1.模型构建及药物干预将72只SD大鼠按体重以随机区间分组法分为正常组、模型组、秋水仙碱组（0.12 mg/kg）、SLI 高剂量组（50 mg/kg）、SLI 中剂量组（25 mg/kg）、SLI 低剂量组（12.5 mg/kg）,每组12只,雌雄各半。造模第一天除正常组外其余各组均按照5 ml/kg的比例皮下注射20%CCl4（V/V）花生油混合溶液,其后间隔3天以3 ml/kg体重比例进行皮下注射。造模开始第2天按照3 ml/kg比例对大鼠进行腹腔注射猪血清,此后间隔3天以1 ml/kg比例进行腹腔注射。造模第3周开始,每周注射20%CCl4花生油混合溶液及猪血清各一次直到第十二周。实验过程中正常组给予普通饮食喂养,其余各组均饮用10%乙醇,饲用高脂玉米粉（795 g/kg玉米粉+200 g/kg猪油+5 g/kg胆固醇）。从第5周开始对各实验组进行药物干预,正常组与模型组以同等容积蒸馏水灌胃,秋水仙碱组每日0.12 mg/kg灌胃一次、SLI高中低剂量组以50 mg/kg、25 mg/kg及12.5 mg/kg剂量每日腹腔注射一次,持续8周。2.检测指标实验第13周,经腹主动脉采集血清及提取肝脏。通过HE染色观察肝脏病理改变,Masson染色观察胶原蛋白沉积情况,采用Image Pro Plus 6.0分析各组纤维化产物的光密度值（OD值）;免疫组化染色法测定各组肝组织内α-SMA含量;Elisa法测定血清中ALT、AST、肝纤四项、TGF-β1、MMP-2、TIMP-2水平,Elisa法检测肝组织内细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6及IFN-γ含量;qRT-PCR法检测肝组织内Col-Ⅰ、Ⅲ mRNA相对表达量。3.体外实验初步探索SLI的作用机制CCK-8法测定SLI对人肝星状细胞LX-2增殖的影响,qRT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9 mRNA的变化和采用Western Blot法检测相应蛋白变化来探索体外实验中SLI对LX-2细胞的部分生物学机制。结果:1.肝脏病理形态学显示,肝纤维化模型成功建立。SLI可减轻CC14联合猪血清所致肝纤维化的程度。2.SLI可降低CC14所致的ALT、AST的升高（P<0.05）,降低肝组织炎症浸润和坏死程度,有良好的肝功能恢复和肝损伤保护作用;可以降低肝纤四项水平（P<0.01、P<0.05）,改善纤维化程度;可以升高MMP-2的表达（P>0.05）,降低TIMP-2和TGF-β1的表达（P<0.01、P<0.05）,通过调节MMP-2/TIMP-2的平衡调控基质降解的过程;可降低促炎因子TNF-α、IL-6、IL-1β的表达（P<0.01、P<0.05）,升高抗炎因子IFN-γ的表达（P<0.05）;可降低肝组织Col-Ⅰ、Col-Ⅲ mRNA表达量,有降低胶原蛋白沉积的作用。3.SLI对LX-2具有增殖抑制作用,且呈剂量和作用时间依赖性。SLI可通过促进Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA 的表达,而抑制 Bcl-2 mRNA 的表达从而促进LX-2细胞的凋亡,WB结果亦体现同样趋势。结论:SLI可通过抑制肝脏炎症因子的产生,调节MMP-2/TIMP-2平衡,降低胶原蛋白的合成缓解CC14联合猪血清诱导的大鼠肝纤维化程度。另外,SLI在体外可抑制LX-2细胞的增殖活性,其机制可能是通过抑制Bcl-2,提高Bax、Caspase-9、Caspase-3的活性有关
张石蕾[9]（2020）在《肉苁蓉苯乙醇总苷脂质体抗肝纤维化的作用及机制研究》文中提出目的:构建CPhGs脂质体,并表征其特性;考察CPhGs和CPhGs脂质体体外释放行为及体内药代动力学特征;采用体内实验,探讨CPhGs脂质体对BSA诱导的大鼠免疫性肝纤维化模型的防治作用及作用机制;采用体外实验,观察CPhGs脂质体对HSCs增殖、细胞凋亡、细胞周期及胶原分泌的影响,并进一步通过观察CPhGs脂质体对rrPDGF-BB刺激HSCs增殖的影响,从细胞和分子水平上探讨CPhGs脂质体对MAPK和FAK/PI3K/Akt信号传导通路的影响,揭示其抗肝纤维化的作用靶点,并阐明其发挥作用的分子机制。方法:（1）采用薄膜分散一次包封法、薄膜分散二次包封法、逆向蒸发法、真空冷冻干燥薄膜分散二次包封法制备CPhGs脂质体,使用透射电镜观察其形态,Malvern激光粒度分析仪测量其粒径,Zeta电位、HPLC法测量药物包封率、载药率,评价并确定其最佳制备方法。（2）以原料药为对照组,采用HPLC检测并阐明CPhGs脂质体的体外释药规律,LC-MS法测定CPhGs脂质体中松果菊苷在大鼠血浆中的血药浓度,分析药代动力学特征。（3）使用BSA建立免疫性肝纤维化大鼠模型,体内观察CPhGs脂质体及CPhGs原料药对BSA诱导的大鼠免疫性肝纤维化的影响,分析血清学指标、肝组织病理、免疫组化指标以及ECM蛋白、MAPK通路、炎症蛋白表达水平的变化,评价CPhGs脂质体抗肝纤维化的作用及可能的分子机制。（4）体外观察CPhGs脂质体对HSCs的增殖和细胞凋亡、细胞周期及对细胞活力、细胞毒性的影响,从细胞学水平阐述CPhGs脂质体抗肝纤维化的作用,研究CPhGs脂质体对rrPDGF-BB/FAK/PI3K/Akt信号通路的影响,探讨其抗肝纤维化的作用靶点,从分子水平阐明其作用机制。结果:（1）采用薄膜分散一次包封法制备的3个不同批次CPhGs脂质体包封率平均值为28.55%,载药率为2.73%;采用薄膜分散二次包封法制备的3个不同批次CPhGs脂质体包封率平均值为38.46%,载药率为3.71%;采用逆向蒸发法制备的3个不同批次CPhGs脂质体包封率平均值为33.88%,载药率为3.28%,薄膜分散二次包封法制备的CPhGs脂质体包封率和载药率均是最高;在以薄膜分散二次包封法制备的CPhGs脂质体基础上,利用真空冷冻干燥法制备了CPhGs脂质体冻干粉,复溶后CPhGs脂质体冻干粉外观形态良好,冻干前后纳米粒的粒径和包封率变化均不大,说明其稳定性良好,为后续实验提供足够的样品量。（2）体外释药结果显示,最适合CPhGs和CPhGs脂质体的模型分别是一级动力学和Higuchi方程,CPhGs脂质体没有显示任何突释效应;大鼠体内的药物代谢动力学相关参数表明,CPhGs原料药和CPhGs脂质体组在相同剂量灌胃给药的情况下,CPhGs脂质体给药后Cmax明显提高（P<0.05）,CPhGs脂质体组给药0.75h之后的血药浓度均远远大于原料药组（CPhGs脂质体组35.95±3.95 ng/ml vs CPhGs原料药组27.14±0.93 ng/ml）,给予CPhGs原料药后大鼠血浆中松果菊苷的浓度较低,CL为2.07±0.39 ml/h/kg,t1/2显着延长（CPhGs脂质体组5.33±0.43h vs CPhGs原料药组2.07±0.61h,P<0.05）,MRT显着延长（CPhGs脂质体组5.87±0.32h vs CPhGs原料药组2.80±0.47h,P<0.05）,Tmax显着增加（CPhGs脂质体组1.60±0.55h vs CPhGs原料药组0.60±0.22h,P<0.05）;CPhGs脂质体组大鼠血浆中24h内药时曲线下面积较CPhGs原料药组显着提高,为原料药组的273.30%。（3）体内药效学实验结果表明,CPhGs脂质体和CPhGs原料药干预均可使肝纤维化模型大鼠肝脏、脾脏指数降低,其中CPhGs脂质体组大鼠肝脏、脾脏指数与CPhGs原料药组相比显着降低;并且,相同剂量的CPhGs脂质体组大鼠血清ALT、AST、ALP、TBIL、TBA、γ-GT、TGF-β、肝纤维化四项LN、HA、PCⅢ、IV-C以及肝组织HYP含量总体上较CPhGs原料药组有明显的下降,大鼠肝脏病理损伤情况也有所改善;免疫组化和WB实验结果均显示CPhGs脂质体组ECM标志性分子α-SMA和CollagenⅠ蛋白表达水平显着降低;与模型组、CPhGs原料药组以及空白脂质体组大鼠相比,CPhGs脂质体给药组大鼠肝组织MAPK信号通路相关蛋白p-ERK 1/2、p-JNK 1/3和p-P38以及炎症相关蛋白NF-κB、AP-1、Cox-2、HMGB1有所下调,IκBα有所上调。（4）体外药效学实验结果表明,CPhGs脂质体对HSCs的增殖抑制率随着药物浓度的升高逐渐升高,24h的IC50值为42.535μg/ml;CPhGs脂质体（29.45、14.72、7.36μg/ml）对HSCs没有明显的毒性作用（P>0.05）。流式细胞仪检测结果显示,浓度为29.45μg/ml的CPhGs脂质体可诱导HSCs晚期凋亡,晚期凋亡细胞比例高于早期凋亡细胞比例;在浓度为14.72μg/ml和7.36μg/ml的CPhGs脂质体组中,早期凋亡细胞比例要明显高于晚期凋亡细胞;细胞周期结果显示,与正常对照组相比,不同浓度的CPhGs脂质体处理HSCs后,G0/G1期细胞比例明显升高（P<0.05）,S期细胞比例明显降低（P<0.05）,G2/M期细胞比例明显降低（P<0.05）。与rrPDGF-BB组比较,不同浓度CPhGs脂质体组均可抑制rrPDGF-BB诱导的HSCs的增殖;荧光定量PCR结果显示,与rrPDGF-BB组相比,29.45、14.72、7.36μg/ml CPhGs脂质体组CollagenⅠ、α-SMA、TIMP-1的mRNA表达水平均降低,MMP-1 mRNA表达水平均增多（P<0.05）。在rrPDGF-BB刺激活化的HSCs中,CollagenⅠ和α-SMA mRNA表达水平显着提升,经三个剂量组的CPhGs脂质体干预均可以减少CollagenⅠ、α-SMA、TIMP-1的mRNA表达水平,尤其是29.45μg/ml高剂量CPhGs脂质体组效果最为明显。WB分析结果显示,与正常对照组比较,模型组CollagenⅠ、α-SMA蛋白表达水平显着升高（P<0.05）;与模型组比较,CPhGs脂质体7.36μg/ml、14.72μg/ml和29.45μg/ml三个剂量组中CollagenⅠ、α-SMA蛋白表达水平显着降低（P<0.05）;三个剂量组的CPhGs脂质体处理HSCs 24小时后,HSCs中p-PI3K和p-Akt水平持续下降;和rrPDGF-BB刺激组相比,rrPDGF-BB刺激+FAK基因过表达组中FAK蛋白表达水平显着升高（P<0.05）,而rrPDGF-BB刺激+FAK基因过表达对照组中FAK蛋白表达水平无显着变化;和rrPDGF-BB刺激+FAK基因过表达组相比,rrPDGF-BB刺激+FAK基因过表达对照组和rrPDGF-BB刺激+FAK基因过表达+CPhGs脂质体给药组磷酸化PI3K和磷酸化Akt蛋白表达水平显着下降（P<0.01）。结论:采用薄膜分散二次包封法制备得到CPhGs脂质体纳米粒,形态圆整、包封率较高、粒径分布小、稳定性好;体外释药实验结果表明,本研究所制备的CPhGs脂质体纳米粒在一定程度上有缓释作用,并且明显改变了CPhGs的药物动力学行为,减缓了药物的消除时间,提高了药物的生物利用度;CPhGs脂质体能不同程度降低肝纤维化大鼠的肝、脾指数,改善血清肝功能酶指标,降低血清肝纤维化标志物含量,减轻肝细胞变性及炎性细胞浸润,抑制胶原纤维的合成与沉积,通过MAPK通路及炎症因子蛋白表达抑制肝纤维化的发展变化;CPhGs脂质体给药组能在无细胞毒性的基础上明显减少HSCs的活化,剂量依赖性地抑制rrPDGF-BB刺激的HSCs的细胞增殖,能通过PDGF/FAK/PI3K/Akt通路对rrPDGF-BB刺激的HSCs中ECM蛋白表达产生调控。研究结果为CPhGs脂质体纳米粒在抗肝纤维化方面的应用提供了科学依据。
李从青[10]（2020）在《CXCL5和MMP-9在宫腔粘连子宫内膜纤维化中的研究》文中指出研究背景子宫是女性内生殖系统中的重要器官,尤其是育龄期女性,子宫内膜是一类独特的组织,分为功能层和基底层,任何与子宫内膜基底层相关的损伤会导致上皮再生障碍、瘢痕形成、纤维化[1],严重地影响着女性的月经生理及生殖功能。随着我国计划生育政策的调整,鼓励生育,稳步提高人口数量的国情背景下,因宫腔粘连引发的生育问题日益成为临床研究的重点。研究表明,大面积的子宫内膜的基底层,遭到破坏以后,该局部的子宫内膜几乎不再具有再生功能[2]。但是在临床工作中,我们观察到,一些患者多次诊刮或流产等宫腔操作后也没有发生宫腔粘连,一部分患者仅仅因一次流产手术或宫腔操作就出现了宫腔粘连,从这些现象可以初步判断宫腔粘连的发生是一个复杂的、多因素、多步骤的过程,不单纯是我们看到的表面现象,应该涉及到更深层次的原因,结合以往研究结果,宫腔粘连的发生涉及到炎症因子的释放,基底膜的降解,纤维化的形成等诸多环节,错综复杂。在炎症因子的基础研究中,中性粒细胞浸润主要是由趋化因子介导的,在人类中,由7个ELR chemokine配体与C-X-C结合引发。在CXC家族中,CXCL5是大家关注的一个焦点,以前有研究表明CXCL5是上皮细胞中产生的一种重要的中性粒细胞趋化因子,是粒细胞的强大引诱剂和炎症介质[3-5]。关于组织纤维化的研究中,细胞基质的降解是重要一个环节,目前研究较多的是基质金属蛋白酶家族（MMPs）,它在人体多个脏器疾病（如肺、肝脏、肾脏、心脏等）纤维化中的研究,以及恶性肿瘤的基础研究中尤为热门,MMP9是研究者较为青睐的MMPs家族成员之一,它是溶解细胞外基质的主要酶类,可以降解形成基质及基底膜的各种胶原蛋白、蛋白多糖、层连蛋白等成份。在妇产科疾病的基础研究之中,人们研究的重点放在MMP-9/TIMP-1以及MMP其他家族成员/抑制剂在妇科恶性疾病、子宫内膜异位性疾病等的研究[6-8],因为他们都有一些共同的特点,细胞基底膜的突破。目前CXCL5以及MMP-9在宫腔粘连子宫内膜中表达方面的研究很少。目的本课题基于CXCL5炎症因子趋化作用,MMP-9能降解基底膜的多种胶原蛋白,在宫腔粘连的过程中涉及到炎症因子的表达以及纤维化的形成,而且这两个因子位于pi3k通路上的上下游。通过建立实验动物模型,观察CXCL5及MMP-9在动物模型子宫内膜中的表达,以及两者表达情况是否有一定关联。后期收集人宫腔粘连患者子宫内膜标本,对比CXCL5以及MMP-9在人子宫内膜表达的差异情况,并初步探索CXCL5与MMP-9是否存在一定关联,为后续基础实验的继续开展以及宫腔粘连的临床治疗研究提供依据及平台。方法第一部分:通过预实验,确定选取建模动物模型为8周龄成年雌性SD大鼠为研究对象。采用经腹手术方式,子宫腔注入苯酚胶浆法建立大鼠宫腔粘连模型,40只大鼠随机分为三组:IUA组、假手术组及正常组。术后14天,处死大鼠并将组织包埋在标准石蜡中以制备5μm系列切片,动物实验研究材料均采用HE染色,通过Masson染色评价建模效果,免疫组化（IHC）进行检测分析,WB测定CXCL5、MMP-9蛋白水平,qRT-PCR检测CXCL5、MMP-9 mRNA水平。第二部分:收集经临床确诊的宫腔粘连患者12例子宫内膜组织,以及同期的正常对照组12例子宫内膜组织,分析宫腔粘连患者一般资料,通过免疫组化、WB测定CXCL5、MMP-9蛋白水平,qRT-PCR检测CXCL5、MMP-9 mRNA水平。结果第一部分:利用苯酚胶浆法建立大鼠宫腔粘连模型是可行的;通过大体观察,在宫腔粘连大鼠模型中,宫腔粘连组与正常组和假手术组相比,宫腔粘连组大鼠的子宫腔明显狭窄,粘连程度加深;HE染色结果:宫腔粘连模型组子宫内膜腺体数量比正常组和假手术组相显着减少,腺体碎裂并发生溶解,周围充斥着大量蓝染的中性粒细胞,同时还发现胶原纤维替代了巨噬细胞和浆细胞。Masson染色结果显示:正常组粘膜下组织轻度蓝染,假手术组粘膜下组织蓝染程度与正常组相似。IUA组与正常组和假手术组相比,子宫内膜粘膜下组织蓝染面积显着增大,蓝染程度显着加深。免疫组化结果显示大鼠宫腔粘连模型子宫内膜组织的CXCL5阳性表达率明显低于假手术组和对照组,正常组和假手术组大鼠子宫内膜中CXCL5的染色为强阳性表达,MMP-9的阳性表达率明显低于假手术组和对照组;通过WB方法测定CXCL5、MMP-9蛋白表达,宫腔粘连组为低表达,正常组和假手术组为高表达,差异有统计学意义（P<0.01）;实时定量PCR检测CXCL5、MMP-9 mRNA表达结果提示:IUA组较对照组mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义（P<0.01）。第二部分:12例宫腔粘连患者中,就诊年龄:24-40岁,中位年龄:29.5岁。按照ESGE分度:Ⅳ度2例,Ⅴa度7例,Ⅴb 3例。就诊前人工流产次数最少的1次,最多的4次,其中1例为足月死产。就诊前总流产次数为24人/次（包含一例足月死产）,因稽留流产,后续行人工流产/药物流产+清宫的次数为9人/次。末次妊娠距离就诊时间最长的为10年。按照2015年中华医学会宫腔粘连专家共识标准评分,12例患者评分为18分-28分,中位数:23.2分;人体子宫内膜组织免疫组化结果显示:宫腔粘连患者子宫内膜中CXCL5、MMP-9与对照组相比,为弱阳性表现,差异有统计学意义（P<0.01）;Western blot检测结果发现,宫腔粘连组较对照组CXCL5蛋白及MMP-9蛋白表达显着减低,差异有统计学意义（p<0.05）;通过实时PCR检测发现,宫腔粘连组较对照组CXCL5、MMP-9的mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义（P<0.01）。结论1.通过苯酚胶浆法建立大鼠宫腔粘连模型简单可行;2.CXCL5、MMP-9在大鼠宫腔粘连子宫内膜中呈低表达状态,CXCL5、MMP-9可能在大鼠宫腔粘连的发展过程有一定的作用,而且两者在大鼠子宫内膜中的表达程度可能存在着一定关联,有待后续扩大样本继续研究,并行可行性分析;3.CXCL5、MMP-9在人宫腔粘连子宫内膜中呈低表达,CXCL5、MMP-9可能参与了宫腔粘连的发展过程,有待后续扩大样本继续研究,并行可行性分析;4.CXCL5和MMP-9在人子宫内膜中的表达存在着某种关联,CXCL5也许会通过Pi3k通路影响着MMP-9,调节MMP-9的表达,参与了宫腔粘连子宫内膜纤维化过程,有待后续继续研究。
二、Expression of TIMP-1 and TIMP-2 in rats with hepatic fibrosis（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Expression of TIMP-1 and TIMP-2 in rats with hepatic fibrosis（论文提纲范文）
（1）无乳链球菌对奶牛乳腺成纤维细胞金属蛋白酶和uPA系统表达的影响及信号通路的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 奶牛乳腺炎及奶牛乳腺纤维化 |
| 1.2 无乳链球菌和奶牛乳腺炎 |
| 1.3 MMPs在组织器官纤维化中的作用 |
| 1.4 TIMPs在组织器官纤维化中的作用 |
| 1.5 uPA系统(uPA/PAI-1)在组织器官纤维化中的作用 |
| 1.6 MAPK信号通路与纤维化 |
| 1.7 研究的目的及意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 菌种及细胞 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 热灭活菌液的配制 |
| 2.2.2 MAPK抑制剂的配制 |
| 2.2.3 BMFBs的复苏及培养 |
| 2.2.4 总RNA的提取 |
| 2.2.5 BMFBs总蛋白的提取 |
| 2.2.6 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 热灭活S.agalactiae作用BMFBs后对基因的引物特异性检测 |
| 3.2 热灭活S.agalactiae作用BMFBs后 MMP-2、MMP-9 m RNA转录水平和蛋白表达及明胶酶谱分析 |
| 3.2.1 热灭活S.agalactiae作用BMFBs后 MMP-2m RNA转录水平和蛋白表达的影响 |
| 3.2.2 热灭活S.agalactiae作用BMFBs后 MMP-9m RNA转录水平和蛋白表达的影响 |
| 3.2.3 热灭活S.agalactiae作用BMFBs后 MMP-2、MMP-9 的明胶酶谱分析 |
| 3.3 热灭活S.agalactiae作用BMFBs后 TIMP-1、TIMP-2的m RNA转录水平和蛋白表达的影响 |
| 3.3.1 热灭活S.agalactiae作用BMFBs后 TIMP-1m RNA转录水平和蛋白表达的影响 |
| 3.3.2 热灭活S.agalactiae作用BMFBs后 TIMP-2m RNA相对表达和蛋白表达的影响 |
| 3.4 热灭活S.agalactiae作用BMFBs后 uPA、PAI-1的m RNA转录水平和蛋白表达的影响 |
| 3.4.1 热灭活S.agalactiae作用BMFBs后 uPA m RNA转录水平和蛋白表达的影响 |
| 3.4.2 热灭活S.agalactiae作用BMFBs后 PAI-1 m RNA转录水平和蛋白表达的影响 |
| 3.5 热灭活S.agalactiae作用BMFBs后 MAPKs的 m RNA转录水平和蛋白表达的影响 |
| 3.5.1 热灭活S.agalactiae作用BMFBs后 MAPKs m RNA转录水平的影响 |
| 3.5.2 热灭活S.agalactiae作用BMFBs后 MAPKs蛋白表达的影响 |
| 3.6 添加MAPKs特异性抑制剂对明胶酶MMP-2、MMP-9 活性的影响 |
| 3.6.1 MAPKs通路抑制剂对MMP-2、TIMP-1/2和uPA/PAI-1 的蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 S.agalactiae对 BMFBs MMPs表达的影响 |
| 4.2 S.agalactiae对 BMFBs TIMPs表达的影响 |
| 4.3 S.agalactiae对 BMFBs uPA系统表达的影响 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（2）基于PKCα/Nrf2/ROS通路探讨柔肝化纤颗粒抗肝纤维化大鼠的作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 现代医学对肝纤维化的认识与研究 |
| 1.1 现代医学对肝纤维化流行病学的认识 |
| 1.2 现代医学对肝纤维化发病机制的研究 |
| 1.2.1 肝星状细胞与肝纤维化 |
| 1.2.2 肝细胞与肝纤维化 |
| 1.2.3 枯否细胞与肝纤维化 |
| 1.3 西医治疗 |
| 1.3.1 药物治疗 |
| 1.3.2 肝脏移植 |
| 2 中医药对肝纤维化的认识与研究 |
| 2.1 中医学对肝纤维化病名的沿革 |
| 2.2 中医学中肝纤维化的病因病机 |
| 2.3 中医学对肝纤维化的辨证论治 |
| 2.4 中药对肝纤维化的认识与研究 |
| 2.4.1 单味中药 |
| 2.4.2 中药复方 |
| 2.4.3 针灸治疗及其他 |
| 第二部分 实验内容 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 主要实验试剂配制 |
| 1.4.1 药物 |
| 1.4.2 50%的CCl4 溶液配制 |
| 1.4.3 制备秋水仙碱 |
| 1.4.4 制备10%的水合氯醛 |
| 1.4.5 制备4%多聚甲醛固定液 |
| 1.4.6 封闭液 |
| 1.4.7 2XSDS蛋白上样缓冲液 |
| 1.4.8 电泳液 |
| 1.4.9 1X转膜液 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 肝纤维化大鼠模型的制备及给药方法 |
| 2.1.1 分组方法 |
| 2.1.2 造模方法 |
| 2.1.3 给药方法 |
| 2.2 标本采集 |
| 2.2.1 血清标本的采集 |
| 2.2.2 肝脏病理切片制备 |
| 2.3 HE染色制备 |
| 2.4 Masson染色制备 |
| 2.5 血清中ROS、MDA、SOD、GSH-Px含量的测定 |
| 2.6 肝组织中PKCα、Nrf2、HO-1、NQO1、α-SMA、E-Cadherin、Collagen I、Collagen III m RNA表达 |
| 2.6.1 肝组织样本的采集 |
| 2.6.2 肝组织内总RNA的提取 |
| 2.6.3 RNA浓度的测定 |
| 2.6.4 反转录反应 |
| 2.6.5 Real-time q PCR扩增 |
| 2.7 肝组织中PKCα、Nrf2、HO-1、NQO1、α-SMA、E-Cadherin、CollagenI、Collagen III蛋白的表达 |
| 2.7.1 组织样本的采集 |
| 2.7.2 肝组织内总蛋白的提取 |
| 2.7.3 总蛋白的保存 |
| 2.7.4 SDS-PAGE凝胶电泳 |
| 2.7.5 转膜 |
| 2.7.6 封闭 |
| 2.7.7 孵育抗体 |
| 2.7.8 发光显影 |
| 2.8 统计学处理 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 柔肝化纤颗粒对肝纤维化大鼠肝脏病理学形态的影响 |
| 3.1.1 大鼠一般情况 |
| 3.1.2 肝脏组织肉眼变化 |
| 3.1.3 肝组织病理学观察 |
| 3.2 柔肝化纤颗粒对肝纤维化大鼠血清中ROS、MDA、SOD、GSH-Px的影响 |
| 3.2.1 柔肝化纤颗粒对血清中ROS表达的影响 |
| 3.2.2 柔肝化纤颗粒对血清中MDA含量的影响 |
| 3.2.3 柔肝化纤颗粒对血清中SOD含量的影响 |
| 3.2.4 柔肝化纤颗粒对血清中GSH-Px含量的影响 |
| 3.3 柔肝化纤颗粒对肝纤维化大鼠PKCα/Nrf2 通路中PKCα、Nrf2、HO-1、NQO1、α-SMA、E-Cadherin、Collagen I、Collagen III m RNA表达的影响 |
| 3.3.1 柔肝化纤颗粒对PKCαmRNA表达的影响 |
| 3.3.2 柔肝化纤颗粒对Nrf2 mRNA表达的影响 |
| 3.3.3 柔肝化纤颗粒对HO-1 mRNA表达的影响 |
| 3.3.4 柔肝化纤颗粒对NQO1 mRNA表达的影响 |
| 3.3.5 柔肝化纤颗粒对α-SMA mRNA表达的影响 |
| 3.3.6 柔肝化纤颗粒对E-Cadherin mRNA表达的影响 |
| 3.3.7 柔肝化纤颗粒对Collagen I mRNA表达的影响 |
| 3.3.8 柔肝化纤颗粒对Collagen III mRNA表达的影响 |
| 3.4 柔肝化纤颗粒对肝纤维化大鼠PKCα/Nrf2 通路中PKCα、Nrf2、HO-1、NQO1、α-SMA、E-Cadherin、Collagen I、Collagen III蛋白表达的影响 |
| 3.4.1 柔肝化纤颗粒对PKCα蛋白表达的影响 |
| 3.4.2 柔肝化纤颗粒对Nrf2 蛋白表达的影响 |
| 3.4.3 柔肝化纤颗粒对HO-1 蛋白表达的影响 |
| 3.4.4 柔肝化纤颗粒对NQO1 蛋白表达的影响 |
| 3.4.5 柔肝化纤颗粒对α-SMA蛋白表达的影响 |
| 3.4.6 柔肝化纤颗粒对E-Cadherin蛋白表达的影响 |
| 3.4.7 柔肝化纤颗粒对Collagen I蛋白表达的影响 |
| 3.4.8 柔肝化纤颗粒对Collagen III蛋白表达的影响 |
| 4.讨论 |
| 4.1 柔肝化纤颗粒抗肝纤维化的理论基础 |
| 4.1.1 柔肝化纤颗粒抗肝纤维化的疗效研究 |
| 4.1.2 柔肝化纤颗粒抗肝纤维化的机制研究 |
| 4.2 氧化应激反应与肝纤维化 |
| 4.3 PKCα/Nrf2/ROS信号通路与肝纤维化 |
| 4.4 α-SMA、E-cadherin与肝纤维化 |
| 4.5 Collagen I、Collagen III表达与肝纤维化 |
| 4.6 展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 氧化应激在肝脏疾病中的作用及相关治疗策略 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及发表论文和参加科研情况说明 |
（3）无乳链球菌对奶牛乳腺成纤维细胞金属蛋白酶及uPA系统表达的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 菌种及细胞 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 热灭活菌液配置 |
| 1.4 BMFBs的复苏及培养 |
| 1.5 试验方法 |
| 1.5.1 实时荧光定量PCR检测 |
| 1.5.2 Western Blot检测 |
| 1.6 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 MMP-2、MMP-9 m RNA转录、相应蛋白表达水平及明胶酶谱分析 |
| 2.1.1 MMP-2、MMP-9 m RNA转录水平 |
| 2.1.2 MMP-2、MMP-9蛋白表达情况 |
| 2.1.3 MMP-2、MMP-9蛋白明胶酶谱分析 |
| 2.2 TIMP-1、TIMP-2 m RNA转录水平和相关蛋白表达情况 |
| 2.2.1 TIMP-1、TIMP-2 m RNA转录水平 |
| 2.2.2 TIMP-1、TIMP-2蛋白表达情况 |
| 2.3 u PA、PAI-1 m RNA转录水平和相应蛋白表达情况 |
| 2.3.1 u PA、PAI-1 m RNA转录水平 |
| 2.3.2 u PA、PAI-1蛋白表达情况 |
| 3 讨论 |
（4）基于弹性蛋白合成及降解探讨益肝消积方干预早期肝硬化的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中医药防治肝硬化的研究现状 |
| 1 肝硬化病名渊源 |
| 2 中医对肝硬化病因病机的认识 |
| 3 中医治疗肝硬化思路 |
| 4 导师论治肝硬化的经验 |
| 5 中医药防治肝硬化的机制探讨 |
| 6 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 弹性蛋白及其调控因子在早期肝硬化中的作用 |
| 1 流行病学 |
| 2 肝硬化现代研究进展 |
| 3 弹性蛋白在肝硬化发生中的作用 |
| 4 调控弹性蛋白合成的细胞因子 |
| 5 调控弹性蛋白降解的细胞因子 |
| 6 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 研究一 益肝消积方对早期肝硬化的干预作用 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 研究二 益肝消积方调控弹性蛋白合成干预早期肝硬化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 研究三 益肝消积方调控弹性蛋白降解干预早期肝硬化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（5）金黄色葡萄球菌诱导奶牛乳腺纤维化MMPs/TIMPS和uPA系统的表达及其信号通路的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 1 引言 |
| 1.1 组织器官纤维化的机制 |
| 1.2 S.aureus与奶牛乳腺纤维化 |
| 1.3 MMPs/TIMPs的简介 |
| 1.3.1 MMPs的结构和分类 |
| 1.3.2 MMPs的调控 |
| 1.3.3 MMPs在纤维化中的生物学作用 |
| 1.4 uPA系统简介 |
| 1.4.1 uPA的结构特点 |
| 1.4.2 uPAR的结构特点 |
| 1.4.3 PAI的结构特点 |
| 1.4.4 uPA系统的生物学功能 |
| 1.5 转录组学在乳腺纤维化研究中的应用 |
| 1.6 MAPK信号通路 |
| 1.6.1 MAPK信号通路概述 |
| 1.6.2 MAPKs的组成 |
| 1.7 本研究的目的及意义 |
| 1.7.1 本研究的目的 |
| 1.7.2 本研究的意义 |
| 2 研究一 S.aureus对BMFBs MMPs/TIMPs和uPA系统表达及其信号通路的影响 |
| 2.1 S.aureus对BMFBs MMPs/TIMPs和uPA系统表达的影响 |
| 2.1.1 试验材料与仪器 |
| 2.1.2 试验方法 |
| 2.1.3 试验结果 |
| 2.1.4 分析与小结 |
| 2.2 热灭活S.aureus作用BMFBs的转录组测序 |
| 2.2.1 试验材料与仪器 |
| 2.2.2 试验方法 |
| 2.2.3 试验结果 |
| 2.2.4 分析与小结 |
| 2.3 MAPK通路在S.aureus诱导BMFBs MMP-2、TIMP-1/2和uPA/PAI-1的表达的影响 |
| 2.3.1 试验材料与仪器 |
| 2.3.2 试验方法 |
| 2.3.3 试验结果 |
| 2.3.4 分析与小结 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 S.aureus对BMFBs MMPs/TIMPs表达的影响 |
| 2.4.2 S.aureus对BMFBs uPA系统表达的影响 |
| 2.4.3 转录组学分析S.aureus诱导BMFBs纤维化相关基因的表达 |
| 2.4.4 MAPKs信号通路S. aureus诱导MMPs/TIMPs和uPA系统的作用 |
| 3 研究二 S. aureus诱导BMECs MMPs/TIMPs和uPA系统表达的影响 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 主要试剂和试剂盒 |
| 3.1.3 主要仪器与设备 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 热灭活S.aureus菌液的制备 |
| 3.2.2 BMECs的复苏与培养 |
| 3.2.3 不同浓度热灭活的菌液处理细胞 |
| 3.2.4 荧光定量PCR检测MMPs/TIMPs、uPA系统和COL Ⅰ mRNA表达情况 |
| 3.2.5 Western blot检测MMPs/TIMPs,uPA系统和COL Ⅰ蛋白表达情况 |
| 3.2.6 数据分析与处理 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 qPCR扩增产物基因特异性检测结果 |
| 3.3.2 S.aureus对BMECs MMPs表达的影响 |
| 3.3.3 S.aureus对BMECs TIMPs表达的影响 |
| 3.3.4 S.aureus对BMECs uPA系统表达的影响 |
| 3.3.5 S.aureus对BMECs COL Ⅰ mRNA和蛋白表达的影响 |
| 3.3.6 S.aureus对BMECs MMP-2/MMP-9活性的影响 |
| 3.3.7 BMECs中MMPs/TIMPs、uPA系统与COL Ⅰ之间相关趋势分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 S.aureus对BMECs MMPs/TIMPs表达的影响 |
| 3.4.2 S.aureus对BMECs uPA系统表达的影响 |
| 3.5 分析与小结 |
| 4 研究三 S.aureus诱导小鼠乳腺纤维化MMPs/TIMPs和uPA系统表达的影响 |
| 4.1 试验材料与仪器 |
| 4.1.1 S.aureus菌株 |
| 4.1.2 实验动物 |
| 4.1.3 主要试剂 |
| 4.1.4 主要仪器 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 菌液的制备 |
| 4.2.2 感染小鼠试验 |
| 4.2.3 Masson三色染色 |
| 4.2.4 S.aureus感染小鼠乳腺组织中MMPs/TIMPs和uPA/PAI-1的表达及定位 |
| 4.2.5 荧光定量PCR检测小鼠乳腺组织中MMPs/TIMPs,uPA系统mRNA表达情况 |
| 4.2.6 试验结果处理 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 小鼠乳腺组织Masson三色染色结果 |
| 4.3.2 S.aureus对小鼠乳腺组织中MMPs/TIMP-1和uPA/PAI-1 mRNA的表达结果 |
| 4.3.3 S.aureus诱导小鼠乳腺MMPs/TIMP-1和uPA/PAI-1的表达分布结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 S.aureus对小鼠乳腺组织中MMP-1、-3、-13/TIMP-1表达的影响 |
| 4.4.2 S.aureus对小鼠乳腺组织中uPA/PAI-1表达的影响 |
| 4.5 分析与小结 |
| 5 全文讨论 |
| 5.1 S.aureus对MMPs/TIMPs及uPA系统表达的影响 |
| 5.2 S.aureus对uPA系统表达的影响 |
| 5.3 MAPKs信号通路在段aureus促进BMFBs MMP-2/TIMP-1、-2及uPA/PAI-1表达的作用 |
| 6 全文结论 |
| 7 创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（6）H2S在运动干预糖尿病大鼠心肌纤维化中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 前言 |
| 2 研究对象与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 实验对象及分组 |
| 2.4.2 实验技术路线图(图2-1) |
| 2.4.3 运动方案 |
| 2.4.4 实验取材 |
| 2.5 指标的测定 |
| 2.5.1 实验大鼠空腹血糖(FBG)含量测定 |
| 2.5.2 实验大鼠血清INS含量测定 |
| 2.5.3 HOMA-IR的计算 |
| 2.5.4 实验大鼠心肌组织HE、MASSON染色的形态学观察 |
| 2.5.5 实验大鼠心肌组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的免疫组织化学观察. |
| 2.5.6 实验大鼠心肌组织H_2S含量测定 |
| 2.5.7 实验大鼠心肌组织TGF-β1、Smad2、MMP2、TIMP2含量测定 |
| 2.5.8 实验大鼠心肌组织AngⅡ、TGF-β1、Smad2、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、MMP2、TIMP2mRNA表达量测定 |
| 2.6 质量控制 |
| 2.7 数据统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 糖尿病心肌纤维化大鼠模型的一般情况 |
| 3.2 实验大鼠血清FBG、INS、HOMA-IR含量 |
| 3.3 实验大鼠心肌组织HE、MASSON染色结果 |
| 3.4 实验大鼠心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维免疫组织化学结果 |
| 3.5 实验大鼠心肌组织H_2S含量 |
| 3.6 实验大鼠心肌组织TGF-β1、Smad2、MMP2、TIMP2表达 |
| 3.7 实验大鼠心肌组织AngⅡ、TGF-β1、Smad2、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、MMP2、TIMP2mRNA表达量 |
| 4 分析与讨论 |
| 4.1 糖尿病心肌纤维化模型的建立及有氧运动的干预作用 |
| 4.2 AngⅡ/TGF-β1/Smad2信号通路在糖尿病心肌纤维化中的作用 |
| 4.3 H_2S在有氧运动干预下对糖尿病心肌纤维化的作用机制 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（7）大肠杆菌诱导奶牛乳腺成纤维细胞的MMPs/TIMPs和uPA系统表达的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 1 引言 |
| 1.1 奶牛乳腺炎 |
| 1.2 E.coil与奶牛乳腺炎 |
| 1.3 MMPs在组织器官纤维化中的作用 |
| 1.4 TIMPs在组织器官纤维化中的作用 |
| 1.5 uPA系统(uPA/uPAR/PAI-1)在组织器官纤维化中的作用 |
| 1.6 研究的目的及意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 E.coli菌株 |
| 2.1.2 BMFBs |
| 2.1.3 试剂药品 |
| 2.1.4 仪器设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 热灭活E.coli菌液的配置 |
| 2.2.2 细胞的准备及菌液的作用 |
| 2.2.3 qPCR法检测热灭活E.coli作用BMFBs后几种MMPs/TIMPs和uPA系统mRNA的转录水平 |
| 2.2.4 Western-blot法检测热灭活E.coli作用BMFBs后几种MMPs/TIMPs和uPA系统蛋白的表达水平 |
| 2.3 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 热灭活E.coli对BMFBs的几种MMPs/TIMPs和uPA系统的引物熔解曲线 |
| 3.2 热灭活E.coli对BMFBs MMPs的表达的影响 |
| 3.2.1 热灭活E.coli作用BMFBs后MMP-1 mRNA转录水平和蛋白表达的影响 |
| 3.2.2 热灭活E.coli作用BMFBs后MMP-2 mRNA转录水平和蛋白表达的影响 |
| 3.2.3 热灭活E.coli作用BMFBs后MMP-3 mRNA转录水平和蛋白表达的影响 |
| 3.2.4 热灭活E.coli作用BMFBs后MMP-9 mRNA转录水平和蛋白表达的影响 |
| 3.2.5 热灭活E.coli作用BMFBs后MMP-13 mRNA转录水平和蛋白表达的影响 |
| 3.3 热灭活E.coli对BMFBs TIMPs的表达的影响 |
| 3.3.1 热灭活E.coli作用BMFBs后TIMP-1 mRNA转录水平和蛋白表达的影响 |
| 3.3.2 热灭活E.coli作用BMFBs后TIMP-2 mRNA转录水平和蛋白表达的影响 |
| 3.4 热灭活E.coli对BMFBs uPA系统表达的影响 |
| 3.4.1 热灭活E.coli作用BMFBs后uPA mRNA转录水平和蛋白表达的影响 |
| 3.4.2 热灭活E.coli作用BMFBs后uPAR mRNA相对表达和蛋白表达的影响 |
| 3.4.3 热灭活E.coli作用BMFBs后PAI-1 mRNA转录水平和蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 E.coli对BMFBs MMPs表达的影响 |
| 4.2 E.coli对BMFBs TIMPs表达的影响 |
| 4.3 E.coli对BMFBs uPA系统表达的影响 |
| 4.4 E.coli对BMFBs MMPs/ TIMPs/ uPA系统之间的相互作用 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（8）注射用丹参多酚酸盐对肝纤维化大鼠的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 肝纤维化的发生机制及治疗 |
| 1.1.1 肝纤维化发生的机制 |
| 1.1.2 肝星状细胞活化的机制 |
| 1.1.3 肝纤维化的治疗 |
| 1.2 细胞因子在肝纤维化中的作用研究进展 |
| 1.2.1 TGF-β |
| 1.2.2 IFN-γ |
| 1.2.3 IL |
| 1.2.4 TNF-α |
| 1.3 细胞凋亡与肝纤维化 |
| 1.4 中医药治疗肝纤维化的研究进展 |
| 1.4.1 单味中药 |
| 1.4.2 中药提取单体 |
| 1.4.3 复方中药 |
| 1.4.4 中成药 |
| 1.5 SLI的研究进展 |
| 1.5.1 丹参概述 |
| 1.5.2 SLI的概述 |
| 1.5.3 SLI在肝纤维化中的研究进展 |
| 第二章 实验研究 |
| 实验一 SL对肝纤维化大鼠体重、肝脏病理形态学的影响 |
| 1.1 材料 |
| 1.2. 方法 |
| 1.3. 检测指标 |
| 1.4 统计学分析 |
| 1.5. 结果 |
| 1.6 讨论 |
| 实验二 SLI对肝纤维化大鼠血清AST、ALT、肝纤四项、MMP-2、TIMP-2及TGF-β1水平的影响 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 统计学分析 |
| 2.4 结果 |
| 2.5 讨论 |
| 实验三 SLI对肝纤维化大鼠肝脏TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ、肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白COl-Ⅰ、Ⅲ mRNA水平的影响 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 统计学分析 |
| 3.4 结果 |
| 3.5 讨论 |
| 实验四 SLI对LX-2细胞增殖、凋亡的影响 |
| 4.1 材料 |
| 4.2 细胞的复苏、培养、传代与冻存 |
| 4.3 CCK-8实验 |
| 4.4 qRT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9 mRNA的表达 |
| 4.5 WB检测Bax、Bcl-2、Caspase-3 Caspase-9蛋白的表达 |
| 4.6 统计学分析 |
| 4.7 结果 |
| 4.8 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（9）肉苁蓉苯乙醇总苷脂质体抗肝纤维化的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 肉苁蓉苯乙醇总苷脂质体的制备及评价研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 仪器与材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 肉苁蓉苯乙醇总苷脂质体对BSA致大鼠肝纤维化的保护作用研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 仪器与材料 |
| 1.2 CPhGs脂质体的制备方法 |
| 1.3 空白脂质体的制备 |
| 1.4 肝纤维化大鼠模型的建立与分组 |
| 1.5 血清肝功能指标的检测 |
| 1.6 血清TGF-β、肝纤四项及肝组织HYP检测 |
| 1.7 肝组织标本大体观 |
| 1.8 肝组织病理学检测 |
| 1.9 免疫组化 |
| 1.10 聚合酶链式反应 |
| 1.11 蛋白免疫印迹 |
| 1.12 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 肉苁蓉苯乙醇总苷脂质体对HSCs增殖、凋亡、周期的影响及分子机制研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 仪器与材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（10）CXCL5和MMP-9在宫腔粘连子宫内膜纤维化中的研究（论文提纲范文）
| 中英文缩写词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 CXCL5、MMP-9 在宫腔粘连模型大鼠子宫内膜中的表达及意义 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要仪器 |
| 2.3 主要试剂 |
| 2.4 制备大鼠宫腔粘连模型及实验分组 |
| 2.5 HE染色和Masson染色 |
| 2.6 免疫组化及其评分标准 |
| 2.7 Western blot法检测蛋白表达 |
| 2.8 qRT-PCR法检测mRNA水平 |
| 2.9 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠模型子宫大体形态学变化 |
| 3.2 大鼠模型子宫内膜的形态学变化 |
| 3.3 大鼠子宫粘膜间质纤维化程度变化情况 |
| 3.4 免疫组化观察IUA大鼠子宫中CXCL5及MMP-9 的表达水平 |
| 3.5 大鼠模型子宫内膜中CXCL5及MMP-9 蛋白表达水平 |
| 3.6 大鼠子宫内膜中CXCL5及MMP-9 mRNA表达水平 |
| 4 讨论 |
| 4.1 宫腔粘连动物模型的建立 |
| 4.2 宫腔粘连形成的分子机制 |
| 4.3 组织纤维化的形成机制 |
| 5 结论 |
| 第二部分 CXCL5和MMP-9 在人宫腔粘连子宫内膜组织中的表达,初步探讨宫腔粘连子宫内膜纤维化机制 |
| 1 前言 |
| 2 资料与方法 |
| 2.1 一般资料 |
| 2.2 宫腔粘连的评分及评级标准 |
| 2.3 病理标本的收集 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.5 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 实验组及对照组一般资料结果 |
| 3.2 免疫组化结果 |
| 3.3 Western blot法检测蛋白表达 |
| 3.4 qRT-PCR法检测mRNA水平 |
| 4 讨论 |
| 4.1 组织损伤后的修复和纤维化 |
| 4.2 初步探讨宫腔粘连的致病机理 |
| 4.3 浅谈目前宫腔粘连治疗方法和现状 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 基质金属蛋白酶与组织纤维化 |
| 参考文献 |
四、Expression of TIMP-1 and TIMP-2 in rats with hepatic fibrosis（论文参考文献）
- [1]无乳链球菌对奶牛乳腺成纤维细胞金属蛋白酶和uPA系统表达的影响及信号通路的研究[D]. 陈旭楠. 内蒙古农业大学, 2021(02)
- [2]基于PKCα/Nrf2/ROS通路探讨柔肝化纤颗粒抗肝纤维化大鼠的作用[D]. 吕艳杭. 广西中医药大学, 2021
- [3]无乳链球菌对奶牛乳腺成纤维细胞金属蛋白酶及uPA系统表达的影响[J]. 陈旭楠,丁玉林,张媛媛,李慧娟,王凤龙. 中国动物检疫, 2021(05)
- [4]基于弹性蛋白合成及降解探讨益肝消积方干预早期肝硬化的机制研究[D]. 张嘉鑫. 北京中医药大学, 2021(01)
- [5]金黄色葡萄球菌诱导奶牛乳腺纤维化MMPs/TIMPS和uPA系统的表达及其信号通路的研究[D]. 缪增强. 内蒙古农业大学, 2020(01)
- [6]H2S在运动干预糖尿病大鼠心肌纤维化中的作用及机制研究[D]. 刘亚. 湖南师范大学, 2020(01)
- [7]大肠杆菌诱导奶牛乳腺成纤维细胞的MMPs/TIMPs和uPA系统表达的研究[D]. 赵楠. 内蒙古农业大学, 2020(02)
- [8]注射用丹参多酚酸盐对肝纤维化大鼠的保护作用及机制研究[D]. 许琪华. 广州中医药大学, 2020(06)
- [9]肉苁蓉苯乙醇总苷脂质体抗肝纤维化的作用及机制研究[D]. 张石蕾. 新疆医科大学, 2020(07)
- [10]CXCL5和MMP-9在宫腔粘连子宫内膜纤维化中的研究[D]. 李从青. 安徽医科大学, 2020(01)