一、盐酸小檗碱及其与环孢素A合用对大鼠肝P450同工酶及其多药耐药基因的的影响（论文文献综述）
刘名义[1]（2020）在《基于核受体-CYP450/OATPs通路研究小檗碱对调血脂药代谢和转运的调控作用及分子学机制》文中指出背景:小檗碱（Berberine,BBR）是一种从天然药物中提取的异喹啉类生物碱,常用于胃肠道疾病的治疗。近年的研究证实其可通过增加LDL-C受体的表达,激活AMP激酶和阻断MAPK/ERK通路来降低低密度脂蛋白和甘油三脂的水平。他汀类药物主要通过抑制甲羟戊酸的合成,减少胆固醇在肝脏的合成而降低低密度脂蛋白水平,是临床常用的调血脂药。基于BBR与他汀类药物调血脂作用机制的不同,临床上常将BBR与他汀类药联合应用于高脂血症的治疗。但有报道他汀类药物引发的横纹肌溶解副作用,60%是因联合用药改变代谢或转运特性所致,故而BBR对药物代谢酶和转运体的影响备受学者关注。研究发现,BBR及其（40）相代谢产物小檗红碱（Berberrubine,BRB）、去亚甲基小檗碱（Demethylene berberine,DBB）在肝脏中浓度远高于血浆中浓度,且可影响药物的代谢酶和转运体功能,然BBR与他汀类药物联合应用后,是否因其对药物代谢酶和转运体的作用导致药物相互作用的发生尚属未知,确应系统探究。值得一提的是,诸多研究表明,核受体在调控药物代谢和转运相关的靶基因方面发挥着至关重要的作用,BBR亦通过激活肝X受体α（liver X receptor alpha,LXRα）,增加巨噬细胞中ABCA1转运体的表达,降低细胞中胆固醇的堆积并减少泡沫细胞的形成。然而,围绕核受体-代谢酶/转运体的通路,BBR对调血脂药的代谢和转运到底有何影响迄今亦无研究报告。因此,对BBR在核受体-CYP450/OATPs通路上的作用展开深入系统研究,可为BBR与他汀类药物合理联用提供科学依据。本课题旨在通过Hep G2细胞模型考察BBR及其代谢产物BRB、DBB对CYP450酶和OATP1B1转运体表达及代谢转运他汀类药物的影响;并在大鼠模型中研究长期给予BBR后对阿托伐他汀和瑞舒伐他汀药代动力学过程,分析药动学特征改变与代谢酶和转运体活性的关联;最后,在Hep G2细胞模型上,通过RT-q PCR、Western-blot和双荧光素素酶报告基因及RNA干扰等分子生物学技术,探究BBR在核受体-CYP450/OATPs通路上的调控作用及分子学机制。目的:1.系统研究在Hep G2细胞中BBR、BRB和DBB对CYP1A2、3A4、2B6m RNA、蛋白表达及酶代谢底物活性的影响。2.系统研究在Hep G2细胞中BBR、BRB和DBB对OATP1B1 m RNA、蛋白表达及转运阿托伐他汀和瑞舒伐他汀的影响。3.运用SD大鼠模型,研究长期给予BBR对调血脂药物阿托伐他汀和瑞舒伐他汀药代动力学特征的影响;探讨该影响与代谢酶、转运体之间的关联性。4.基于核受体Ah R、PXR和RXRα调控通路研究BBR及BRB调控代谢酶CYP1A2、3A4和转运体OATP1B1的作用,揭示BBR及BRB在Ah R、PXR和RXRα-CYP450/OATP1B1通路上作用的分子学机制。方法:1.运用RT-q PCR实验技术,研究BBR、BRB和DBB对Hep G2细胞中CYP1A2、3A4、2B6和OATP1B1 m RNA表达的影响。2.运用Western blot实验技术,研究BBR和BRB对Hep G2细胞中CYP1A2、3A4、2B6、OATP1B1和核受体Ah R、PXR、RXRα、FXR、LXRα蛋白表达的影响。3.建立LC-MS/MS方法,测定非那西汀、咪达唑仑和阿托伐他汀的浓度,分别评价BBR和BRB长期诱导对Hep G2细胞中CYP1A2、3A4酶活性的影响;测定细胞样品和血浆中阿托伐他汀、瑞舒伐他汀的浓度,分别考察BBR和BRB长期诱导对Hep G2细胞摄取阿托伐他汀和瑞舒伐他汀的影响及大鼠体内长期给予BBR对阿托伐他汀、瑞舒伐他汀药代动力学影响。4.构建p GL3-Ah R-CYP1A2-luc和p GL3-PXR-CYP3A4-luc双荧光素酶报告基因,研究Ah R和PXR在BBR/BRB调控CYP1A2和CYP3A4表达中的作用。构建p GL3-FXR-OATP1B1-luc和p GL3-LXRα-OATP1B1-luc双荧光素酶报告基因,研究RXRα、FXR和LXRα在BBR/BRB调控OATP1B1转运体的作用。5.运用RNA干扰技术构建沉默Ah R和PXR以及RXRα、FXR、LXRα的细胞模型,研究BBR及BRB在Ah R和PXR在调控CYP1A2和CYP3A4通路上的作用;研究BBR及BRB在RXRα、FXR和LXRα调控OATP1B1通路上的作用结果:1.BBR、BRB和DBB对CYP1A2、3A4、2B6的表达及酶代谢底物活性的影响1.1 BBR、BRB促进Hep G2细胞中CYP1A2、3A4 m RNA表达RT-q PCR结果表明,550μM BBR和560μM BRB均可以浓度依赖性促进CYP1A2 m RNA的表达,EC50分别为11.2μM和14.3μM;1580μM DBB也可以微弱的诱导CYP1A2 m RNA表达,但和对照组比较,差异无统计意义（P>0.05）。550μM BBR和560μM BRB均可以浓度依赖性促进CYP3A4m RNA的表达,EC50分别为8.2μM和9.6μM。1580μM DBB对CYP3A4 m RNA的表达无显着影响（P>0.05）。而550μM BBR、560μM BRB和1580μM DBB对CYP1B6 m RNA的表达没有显着诱导作用。1.2 BBR和BRB诱导Hep G2细胞中CYP1A2、3A4蛋白表达Western blot结果表明,阳性对照50μM奥美拉唑可以显着诱导CYP1A2蛋白的表达3.5倍,25、50μM BBR和30、60μM BRB可以诱导CYP1A2蛋白的表达,分别为1.6、2.7、1.4、1.9倍,和空白对照组相比,差异有统计意义（P<0.05）。阳性对照10μM利福平、50μM BBR和60μM BRB作用Hep G2细胞48h后,和空白对照组相比,CYP3A4蛋白表达的诱导倍数分别为3.1、2.5、2.7倍。1.3 BBR和BRB增加Hep G2细胞中CYP1A2、3A4酶活性LC-MS/MS检测结果显示,和空白对照组比较,阳性对照50μM奥美拉唑、50μM BBR和60μM BRB分别可以增加非那西汀的代谢175%、165%和157%。和空白对照组比较,550μM浓度的BBR可以增加CYP3A4代谢咪达唑仑和阿托伐他汀的能力,其EC50为分别为9.8μM和48.2μM。560μM浓度的BRB促进咪达唑仑和阿托伐他汀代谢的EC50为分别为26.7μM和56.3μM。2.BBR、BRB和DBB对Hep G2细胞中OATP1B1表达及转运功能的影响2.1 BBR、BRB和DBB对Hep G2细胞OATP1B1 m RNA、蛋白表达的影响RT-q PCR结果显示,550μM BBR和560μM BRB均可以浓度依赖性促进OATP1B1 m RNA的表达,EC50分别为21.4±2.6μM和12.5±1.9μM;而系列浓度的DBB对OATP1B1的m RNA表达差异均无统计意义（P>0.05）。Western blot结果表明,25、50μM BBR作用Hep G2细胞24h后,和空白对照组相比,OATP1B1蛋白表达分别上调1.5、2.3倍;其主要代谢产物BRB在3060μM均可以上调OATP1B1蛋白的表达,和空白对照组比较,差异有统计意义（P<0.05）,60μM BRB可上调OATP1B1蛋白表达3.4倍。而其另外一个主要代谢产物DBB在1580μM浓度范围内对OATP1B1表达差异均无统计意义（P>0.05）。2.2 BBR和BRB增加Hep G2细胞对阿托伐他汀和瑞舒伐他汀的摄取本研究建立的测定细胞样品中阿托伐他汀和瑞舒伐他汀浓度的LC-MS/MS方法分别在5640 nmol/L和2144 nmol/L标准曲线范围内线性关系良好,精密度和准确度均符合要求。摄取实验结果表明,550μM BBR可浓度依赖性增加RSV和ATV在Hep G2细胞中的摄取,其EC50值分别为19.01μM、24.16μM;560μM BRB同样可浓度依赖性增加RSV和ATV在Hep G2细胞中的摄取,其EC50值分别为13.95μM和27.59μM。3.在SD大鼠体内研究长期给予BBR对调血脂药物阿托伐他汀和瑞舒伐他汀药代动力学的影响及与代谢酶转运体的相关性长期给予高剂量BBR明显影响调血脂药阿托伐他汀和瑞舒伐他汀在大鼠体内的药代动力学过程。结果显示,300 mg/kg BBR连续给药后,阿托伐他汀在对照组和实验组的最大血药浓度（Cmax）分别为9.04±0.97 ng/m L和6.51±0.45 ng/m L,比对照组降低28%;药时曲线下面积（AUC0-t）分别为40.87±13.91 ng/m L·h和28.72±17.15 ng/m L·h,比对照组降低30%,这可能由于BBR提高OATP1B1对他汀类药的肝摄取量,降低体循环的药量所致。消除半衰期（T1/2）从8.2±2.32h降低至5.5±1.49 h,下降33%,而清除速率（CLz/F）增加140%,显然,这是因为BBR的诱导,加快了CYP3A4代谢阿托伐他汀并缩短其消除过程。与此相似,空白对照组和连续给予300 mg/kg BBR的实验组,瑞舒伐他汀在大鼠血浆中Cmax分别为5.83±0.95μg/m L和3.78±0.13μg/m L,下降35%,AUC0-t分别为36.80±11.91μg/L·h和28.88±11.79μg/L·h,降低21%,原由依然是BBR提高OATP1B1活性所致。但其CLz/F分别为2.86±0.83 L/h和3.08±0.74 L/h,T1/2分别为4.71±1.03 h和4.91±1.28 h,与对照组比较差异无统计意义（P>0.05）;提示CYP3A4活性的改变对瑞舒伐他汀代谢无影响,与瑞舒伐他汀几乎不经过CYP450代谢的文献报道相一致。4.基于Ah R/PXR-CYP1A2/3A4通路,研究BBR及BRB调控CYP1A2/CYP3A4的作用机制4.1 BBR及BRB激活Ah R/PXR增加CYP1A2/CYP3A4报告基因活性双荧光素酶报告基因结果显示,与对照组比较,10、25、50μM BBR对p GL3-Ah R-CYP1A2-luc的荧光素酶活性分别上调1.3、2.4和3.4倍;15、30、60μM BRB对p GL3-Ah R-CYP1A2-luc的荧光素酶活性分别上调1.1、1.9和2.4倍。10、25、50μM BBR对p GL3-PXR-CYP3A4-luc的荧光素酶活性分别上调1.2、1.4和2.3倍;15、30、60μM BRB对p GL3-PXR-CYP3A4-luc的荧光素酶活性分别上调1.1、1.3和1.8倍。可见BBR和BRB对p GL3-Ah R-CYP1A2-luc和p GL3-PXR-CYP3A4-luc报告基因活性的诱导倍数呈浓度依赖性。表明BBR、BRB是通过激活Ah R/PXR而增加CYP1A2/CYP3A4报告基因活性。4.2沉默Ah R/PXR降低BBR及BRB对CYP1A2/CYP3A4蛋白表达的诱导在正常Hep G2细胞中,与空白对照组相比,5 n M TCDD、50μM BBR和60μM BRB上调CYP1A2蛋白表达分别为3.5、2.4和1.9倍;运用sh RNA-h Ah R质粒转染沉默h Ah R后,5 n M TCDD、50μM BBR和60μM BRB上调CYP1A2蛋白表达仅为1.2、0.96、0.89倍。在正常Hep G2细胞中,与空白对照组相比,10μM RIF、50μM BBR和60μM BRB上调CYP3A4表达分别为2.7、1.8和2.3倍;运用sh RNA-h PXR质粒转染沉默h PXR后,10μM RIF、50μM BBR和60μM BRB上调CYP3A4表达的倍数仅为0.95、0.92和0.97。可见沉默Ah R/PXR显着降低BBR、BRB对CYP1A2/CYP3A4蛋白表达的诱导作用。结果进一步佐证BBR、BRB对CYP1A2/CYP3A4的诱导作用是通过Ah R/PXR介导。4.3 BBR及BRB诱导Ah R/PXR核易位Western blot分析检测核蛋白表达结果表明,50μM BBR和60μM BRB分别上调Ah R核蛋白2.6和2.5倍;50μM BBR和60μM BRB上调PXR核蛋白3.4和1.9倍,与空白组比较,差异有统计意义（P<0.05）。表明BBR及BRB可促进Ah R/PXR由胞浆向胞核的转移。5.基于RXRα、FXR、LXRα通路,研究BBR及BRB调控OATP1B1的作用机制5.1 BBR及BRB激活RXRα增加OATP1B1报告基因活性双荧光素酶报告基因结果表明,BBR与BRB均可浓度依赖性的诱导p GL3-FXR-OATP1B1-luc与p GL3-LXRα-OATP1B1-luc报告基因活性。通过给予经典抑制剂UVI3003,抑制RXRα活性后,BBR与BRB对报告基因活性显着降低,与不加RXRα抑制剂组比较,差异具有显着意义（P<0.05）。结果提示,RXRα在BBR和BRB对OATP1B1表达调控中发挥了关键作用。5.2沉默FXR、LXRα和RXRα降低BBR及BRB对OATP1B1蛋白表达的诱导Western blot结果显示,与空白对照组比较,50μM BBR可上调OATP1B1的表达量2.1倍,而沉默FXR或LXRα后,其诱导分别下降至1.5、1.4倍,沉默RXRα后,其诱导作用仅为空白对照组的0.94倍。与空白对照组比较,60μM BRB可上调OATP1B1的表达量1.9倍,沉默FXR或LXRα后,其诱导倍数分别下降至1.4、1.2倍,沉默RXRα后,BRB诱导作用仅为空白对照组的0.86倍,与不沉默核受体的实验组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。以上结果进一步提示RXRα是BBR和BRB是调控OATP1B1的上游关键核受体。5.3 BBR及BRB诱导FXR、LXRα和RXRα核易位Western blot分析检测核蛋白结果表明,25、50μM BBR增加FXR核蛋白分别为对照组的1.4、1.6倍,增加LXRα核蛋白分别为对照组的1.3、2.0倍,增加RXRα核蛋白分别为对照组的1.7、1.9倍;30、60μM BRB可增加FXR核蛋白分别为对照组的1.6、1.8倍,增加LXRα核蛋白为分别对照组的1.2、1.5倍,增加RXRα核蛋白分别为对照组的1.4、1.8倍。表明BBR及BRB促进FXR、LXRα和RXRα由胞浆向胞核的转移。结论:1.BBR和BRB呈浓度依赖性的诱导CYP1A2、3A4 m RNA和蛋白表达并增加酶的代谢活性。2.BBR和BRB呈浓度依赖性的增加OATP1B1 m RNA和蛋白的表达,并显着促进Hep G2细胞对阿托伐他汀和瑞舒伐他汀的摄取。3.连续给予300 mg/kg BBR明显降低调血脂药物阿托伐他汀和瑞舒伐他汀在大鼠血浆中的Cmax和AUC0-t,这与BBR诱导OATP1B1的表达,从而显着提高肝脏对阿托伐他汀或瑞舒伐他汀的摄取量密切相关。同时BBR亦诱导CYP3A4活性,从而加快阿托伐他汀在大鼠体内的代谢,使其T1/2明显缩短。故提示,BBR若与他汀类药联合使用,基于BBR对其分布和代谢的影响,可考虑酌情减少他汀类药的给药剂量,尽可能规避横纹肌溶解等不良反应的发生。4.双荧光素酶报告基因及基因沉默实验结果证明,BBR、BRB对CYP1A2/CYP3A4的诱导作用是通过Ah R/PXR介导;BBR、BRB对OATP1B1的诱导作用是通过RXRα、FXR、LXRα介导。Western blot分析结果表明,BBR及BRB可促进Ah R、PXR、FXR、LXRα和RXRα由胞浆向胞核的转移。5.综上,在Ah R、PXR-CYP450/RXRα-OATP1B1调控通路上,BBR和BRB能够促进Ah R、PXR、FXR、LXRα和RXRα的核易位并激活,显着提高他汀类药的代谢和转运能力,这为小檗碱与他汀类药物正确的联合应用于调血脂治疗提供更多的实验依据;亦为Ah R、PXR、RXRα-CYP450/OATP1B1的调控机制增添新的内容。
卢元媛[2]（2018）在《基于液相色谱质谱联用技术对复方中药艾可清化学成分及其调节细胞色素P450酶作用的研究》文中提出复方中药“艾可清”是广州中医药大学热带医学研究所研究人员研创的专利配方,由黑顺片、淫羊藿、虎杖、黄柏、黄芩、甘草等10味中药组成。该方用于国家艾滋病中医药关爱项目临床试治HIV/AIDS,多年来观察到口服给药有稳定CD4计数,改善临床症状和体征、提高生活质量等效果。虽然艾可清的临床疗效良好,但其药效物质基础尚未明确。为了进一步合理开发,使其符合成分明确、质量稳定可控、机制基本清楚、安全有效等现代中药的特点,该复方的药效物质基础研究是十分必要的。目的:本研究以复方中药艾可清为研究对象,基于液质联用技术,对复方中的化学物质进行体内体外系统的定性分析,旨在明确艾可清的化学物质组成和探索可能在体内发挥药效的成分。从药物代谢酶的角度研究艾可清及其活性成分对细胞色素P450酶的影响,以阐明艾可清对联合使用的抗病毒化药的相互作用的物质基础,为临床合理用药提供指导,也为艾可清进一步的药理作用和作用机制研究提供基础。方法:1.建立UPLC-ESI-QTOF-MS方法,对对照品、艾可清提取物和各味药材提取物进行测定。通过分析总结对照品裂解规律,对艾可清中化合物分析质谱碎片、精确分子质量结合参考文献对艾可清的化学成分进行系统的定性分析和来源归属。2.采用UPLC-ESI-QTOF-MS法,测定SD大鼠连续灌胃给药艾可清后的血浆、胆汁、尿液和粪便等生物样品。通过比较对照品、艾可清提取物、含药大鼠生物样品及空白大鼠生物样品质谱数据,分析鉴定艾可清在大鼠体内的原型成分和代谢产物。3.采用体外孵育人肝微粒体法,通过人肝微粒与混合探针、待测物共孵育,LC-MS法测定代谢产物含量,计算计算IC50值,初步评价艾可清复方提取物对人肝脏药物代谢酶 CYP450 中 8 个重要亚型（CYP2D6,CYP2C8,CYP2E1,CYP2C19,CYP1A2,CYP2B6,CYP2C9 和 CYP3A4）的抑制作用。利用 Western Blot 技术,检测连续灌胃给药7天后艾可清对大鼠肝脏的CYP2D6和CYP3A4蛋白表达的影响。4.利用分子对接计算技术,采用SYBYL-X 2.1.1软件及Discovery Studio 2016软件,以药物代谢酶两个重要的亚型CYP3A4和CYP2D6蛋白为靶蛋白,对已鉴定的艾可清中123个化学成分旳抑制活性进行预测,结合体内成分分析结果和文献研究,筛选出候选化合物进一步进行体外验证实验的候选化合物。通过体外孵育人肝微粒体法测定候选化合物对CYP3A4和CYP2D6的抑制作用。5.采用HPLC-MS/MS法建立同时测定大鼠血浆中洛匹那韦和利托那韦含量的分析方法。采用乙腈沉淀蛋白法进行样品前处理,分别以氘代洛匹那韦、氘代利托那韦为内标,色谱分析采用 Agilent 的 ZORAX Eclipse Plus C18（3.5 μm,50× 4.6mm）,柱温为室温,流动相为35%A（0.1%甲酸-水）-65%B（0.1%甲酸-乙腈）。质谱检测采用电喷雾离子源（ESI）,正离子模式,MRM检测。本研究进行了系统的方法学评价,并运用于评价艾可清对抗HV药物克力芝在大鼠体内的药代动力学的影响。结果:1.建立了 UPLC-ESI-QTOF-MS法,共鉴定了艾可清中123个化合物,包括生物碱类33个、黄酮类57个、皂苷类12个、蒽醌类5个、丹酚酸类3个,其他13个,并对化学成分植物来源进行了归属,且系统阐明了组方中的10种药材代表性化合物群的裂解规律。2.采用建立的UPLC-ESI-QTOF-MS法对艾可清在大鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中的原型成分及代谢物进行了分析。共分析鉴定了艾可清在大鼠体内吸收入血浆共52个原型成分和8个代谢产物;经胆汁排泄的原型成分共36个,代谢产物8个;经尿液排出的原型成分共45个;经粪便排泄的原型成分53个。3.体外孵育人肝微粒体法测定结果显示艾可清甲醇提取物在0-0.5 mg/mL浓度范围内,IC50值分别为 0.0077,0.0753,0.144,0.0995,0.0435,0.1045,0.0493,0.2049 mg/mL,表明艾可清可不同程度地抑制CYP2D6,CYP2C8,CYP2E1,CYP2C19,CYP1A2,CYP2B6,CYP2C9 和 CYP3A4,以对 CYP2D6 的抑制作用较为明显。Western blot法检测了大鼠肝脏CYP3A4和CYP2D6的蛋白表达,研究结果显示,与对照组相比,艾可清组大鼠肝脏的CYP3A4和CYP2D6的蛋白表达均显着降低。4.经分子对接计算,结合吸收入血的成分分析结果,从已鉴定的化合物中计算模拟出18个可能的活性化合物。18个化合物体外孵育人肝微粒体法测定,结果显示艾可清中的成分甘草次酸（IC50=3.36 μM）、丹酚酸A（IC50=6.05 μM）、宝蕾苷Ⅰ（IC50=9.470 μM）、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ（IC50=13.50 μM）对CYP3A4存在不同程度的抑制作用;丹酚酸A对于CYP2D6存在中等强度的抑制作用（IC50=8.49μM）,小檗碱对CYP2D6存在弱抑制作用（IC50=13.45 μM）。5.经方法学验证,本文建立的HPLC-MS/MS法准确、灵敏、简便、快速。洛匹那韦和利托那韦分别在30-10000 ng/mL和3-1000 ng/mL范围内的有较好的线性关系,最低定量限分别为30 ng/mL和3 ng/mL;日内、日间精密度均小于15%,洛匹那韦和利托那韦的准确度分别介于95.3%～107%和96.7%～104%之间;提取回收率均大于88.7%;基质效应基本可以忽略;经考察血浆样品室温放置6h、血浆样品提取后进样器放置72 h、血浆样品-80℃经历3次冷冻-解冻循环、-80℃放置37天的稳定性,两个检测成分稳定性较好。该定量分析方法应用于评价艾可清对抗HIV药物克力芝在大鼠体内的药代动力学的影响。结果显示,艾可清与克力芝联合用药组的洛匹那韦非房室模型参数 AUC（0-t）、AUC（0-∞）、MRT（0-t）、t1/2z、Tmax、Vz/F、CLz/F、Cmax与单用克力芝对照组比较,差异均无统计学意义,MRT（0-∞）与单用克力芝对照组比较,差异有统计学意义;而艾可清与克力芝联合用药组的利托那韦非房室模型参数 AUC（0-t）、AUC（0-∞）、MRT（0-t）、MRT（0-∞）、t1/2z、Tmax、Vz/F、CLz/F、Cmax与单用克力芝对照组比较,差异均无统计学意义。结果表明,艾可清与克力芝联合用药时,在大鼠体内对其组成成分洛匹那韦和利托那韦的药代动力学参数无明显的影响。结论:本论文首次对复方中药艾可清中化学成分进行系统分析识别,艾可清成分在体内的代谢变化过程分析,为提高艾可清的质量控制水平提供了化学成分组成的基础。体内体外药理实验提示艾可清对CYP3A4和CYP2D6有抑制作用,临床上联合HARRT药物使用,有可能通过抑制CYP3A4、CYP2D6的活性,影响药物的代谢特征。艾可清中的成分甘草次酸、丹酚酸A、宝藿苷Ⅰ、鼠李糖基淫羊芸次苷Ⅱ、以及小檗碱等成分对艾可清复方整体的CYP3A4和CYP2D6抑制作用有贡献。当艾可清与抗HIV药物克力芝联合用药时,对后者在大鼠体内的药动学参数无显着影响。
赵园园[3]（2016）在《黄连生物碱与UGT和OCTs相互作用及基于OCTs的交泰丸催眠作用机制初探》文中研究说明由代谢酶和转运体介导的体内药动学相互作用是导致药物药效和毒性发生改变的重要原因。尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGT）催化的葡萄糖醛酸结合反应是生物体内重要的Ⅱ相代谢途径,是多种内源性及外源性化合物清除与解毒的机制。UGT的过度表达或抑制可能导致血药浓度的偏低或偏高,引起治疗失败或中毒。其中UGT1A1是体内尤其是肝脏中广泛表达的重要UGT,参与肝脏胆红素和多种药物的体内代谢,与许多肝脏疾病和药物相互作用密切相关。有机阳离子转运体（OCTs）是转运许多重要内源性物质和阳离子药物的转运体,主要包括OCT1、OCT2和OCT3三个亚型。OCTs在体内分布广泛,参与多种内源性物质和药物的体内转运过程,是介导药物相互作用的重要因素之一。这种相互作用一方面可导致药物的药效减弱或毒性增加,另一方面亦可作为降低药物毒副反应的辅助手段。因此,在新药开发过程中,评估药物潜在的相互作用是非常重要的。以前国内外均偏重于研究由CYP450酶介导的药物相互作用,对UGT和OCTs的关注相对较少。近年来随着人们对UGT和OCTs的认识逐渐深入,药物对它们的影响吸引了越来越多研究人员的关注。黄连Coptis chinensis Franch.为着名传统中药,已有2000多年的应用历史,具有清热燥湿、泻火解毒之功效。现代药理学研究表明黄连具有抗菌抗病毒、降血糖、降血压、改善心脑血管疾病和抗肿瘤等作用。异喹啉类生物碱是黄连的主要成分,其中含量较高的为小檗碱（BER）、表小檗碱（EPI）、黄连碱（COP）、药根碱（JAT）和巴马汀（PAL）5种原小檗碱型生物碱,除此之外还有一种阿朴菲型的木兰花碱（MAG）。黄连临床常与其他药物配伍使用,近年来研究发现黄连与其他合用药物可发生显着的代谢性相互作用,现已证实此种相互作用可由CYP450酶介导发生,而UGT是否也参与其中,目前尚不明了。另外,文献报道黄连生物碱与OCTs亦存在相互作用,但现有研究主要局限于体外细胞模型实验上,体内实验数据尚不充分。交泰丸以黄连为君药,为中医治疗“心肾不交”型失眠的经典名方。近期有学者发现OCTs作为单胺类递质非经典转运体,也对其转运发挥重要的作用,并且是中枢相关疾病,如抑郁症等治疗中的重要靶点。而OCTs与“心肾不交”型失眠的相关性以及交泰丸对其存在的调控作用尚待阐明。鉴于此,本文探讨了黄连生物碱与UGT和OCTs的相互作用,以及交泰丸对OCTs的调控作用,对指导黄连临床合理用药、阐释黄连方剂配伍机制及交泰丸催眠作用机制具有重要的意义。第一部分 文献综述此部分对UGT和OCTs及其介导的药物相互作用、黄连与药物代谢酶和转运体相互作用研究进展及交泰丸药理作用及其作用机制研究进展进行了概述。第二部分实验研究1 6种黄连生物碱对鼠肝微粒体UGTs及UGT1A1活性影响的体内外研究为考察黄连生物碱对UGT活性的影响,探讨黄连与其它药物发生代谢性相互作用的可能性,本章实验采用大小鼠肝微粒体,以及生物碱小鼠体内诱导后的肝微粒体,构建微粒体体外代谢模型,以4-硝基酚（4-NP）为底物检测UGTs活性,β-雌二醇为底物检测UGT1A1活性,利用UV和HPLC测定底物（4-NP）或代谢物（β-雌二醇-3-葡糖醛酸苷（E-3-G））含量,以考察6种黄连生物碱对大鼠、小鼠肝微粒体UGTs及UGT1A1活性的体内外影响。结果在大鼠体外实验中,BER、EPI、COP和JAT均可显着抑制UGTs活性,其中EPI抑制作用最强;对UGT1A1,JAT呈弱抑制作用（IC50≈227 μmoh·L-1）,而COP和PAL则表现为显着的激活作用。在小鼠体外实验中,BER、COP、JAT和PAL对UGTs呈显着抑制作用,但对UGT1A1,6种生物碱均表现为显着的激活作用。小鼠体内诱导实验中,只有BER对UGTs,JAT对UGT1A1活性呈现显着的升高作用,其他生物碱无明显作用。结果表明6种黄连生物碱对UGT活性具有不同程度的抑制或激活作用,并显示出明显的种属和体内外的差异,这可能是黄连与其他药物发生代谢性相互作用的原因之一。2黄连生物碱与OCTs相互作用的体内实验研究在研究了黄连生物碱与UGT的相互作用后,本章实验继续考察其对OCTs体内活性的影响。选择二甲双胍为OCT1及OCT2的底物,采用HPLC-MS/MS测定空白和生物碱诱导后大鼠二甲双胍的血药浓度和药动学参数的变化,评价黄连生物碱对OCT1及OCT2活性的影响;并采用western blot测定大鼠各组织OCT的表达。结果表明,与空白组相比,生物碱连续腹腔注射大鼠后,除EPI（50 mg·kg-1）外,其他各组生物碱均显着增加二甲双胍的Cmax,AUC0～t和AUC0～∞,并降低其CL和Vz,作用强度为BER（100 mg·kg-1）>BER（50 mg·kg 1）>COP（100 mg·kg-1）≈COP（50 mg·kg-1）≈EPI（100 mg·kg-1）>cimetidine（100mg·kg-）>EPI（50mg·kg-1）,而各组对t1/2均无显着性影响。另外,western blot结果显示,各组生物碱均对肾脏OCT2表达存在一定程度的抑制作用,其中BER（100 mg·kg-1）及EPI（100 mg·kg-1）抑制作用最强,而各组对肝脏OCT1表达均无抑制作用,有的反而呈现诱导趋势,如COP（100 mg·kg-1）。另外,除EPI（100mg·kg-1）外,其余各组生物碱亦对心脏OCT3表达存在一定的抑制作用。结果表明黄连生物碱对大鼠体内OCTs活性及表达均存在抑制作用,提示黄连及其生物碱与其他药物存在由OCTs介导的相互作用的可能。3交泰丸催眠作用与OCTs相关性研究在确认了黄连生物碱对OCTs活性及表达存在抑制作用后,考虑到黄连为交泰丸中君药,及OCTs与中枢神经系统功能的相关性,本章实验进一步考察交泰丸催眠作用与OCTs的相关性。首先采用对氯苯丙氨酸（PCPA）建立“心肾不交”失眠大鼠模型,考察大鼠正常状态及失眠病理状态下OCTs活性的变化。通过测定探针底物二甲双胍在正常大鼠及失眠模型大鼠中药代动力学的变化,发现与大鼠正常状态相比,失眠病理状态下二甲双胍的Cmax,AUC0～t和AUC0～∞均显着减小,而CL和Vz均显着增加,t1/2无显着性变化,表明失眠病理状态可诱导肝脏OCT1或肾脏OCT2活性。随后,通过分别测定交泰丸对正常大鼠及失眠模型大鼠中二甲双胍药代动力学的变化,进一步考察了交泰丸对正常大鼠及失眠模型大鼠OCTs的调控作用。结果发现,交泰丸连续灌胃正常大鼠后,与正常空白组相比,二甲双胍的AUC0～t,AUC0～∞和t1/2显着升高,CL显着降低,Cmax呈现一定的升高趋势,Vz呈现一定的降低趋势。交泰丸连续灌胃失眠模型大鼠后,与模型空白组相比,二甲双胍的Cmax,AUC0～t,AUC0～∞和t1/2均显着升高,CL和Vz显着降低,表明交泰丸可能通过抑制失眠状态下肝脏OCT1或肾脏OCT2活性对失眠发挥作用。第三部分总结与讨论综合本课题各部分研究成果得出以下结论:（1）6种黄连生物碱对UGT活性具有显着的抑制或激活作用,并显示出明显的种属和体内外的差异,提示黄连生物碱对UGT活性的影响可能是黄连与其他药物发生代谢性相互作用的重要原因;（2）黄连生物碱对大鼠体内OCTs活性及表达均存在抑制作用,提示黄连及其生物碱与其他药物存在由OCTs介导的相互作用的可能;（3）“心肾不交”失眠病理状态可使OCTs活性发生激活样的改变,交泰丸对OCTs的抑制作用可能是其治疗失眠的重要机制,OCTs可能是交泰丸治疗失眠的重要靶点。药物与代谢酶和转运体相互作用的评价一方面有利于预防其可能带来的毒副作用,另一方面可以解释中药配伍减毒增效的机制,最终促进临床合理用药,提高药物使用的安全性和有效性。通过考察黄连生物碱对UGT及OCTs活性的抑制或诱导作用,能对黄连临床使用时潜在的药物相互作用进行早期的预测,指导合理用药;而从对OCTs抑制作用角度探讨交泰丸催眠作用机制,对揭示交泰丸作用靶标、作用机制、配伍机制及药效物质提供实验依据及指导意义。
米家琦[4]（2016）在《人源化乳腺癌耐药蛋白高表达BCRP-MDCKⅡ细胞模型的建立IMMH002（H002）临床前药代动力学研究》文中进行了进一步梳理Ⅰ人源化乳腺癌耐药蛋白高表达BCRP-MDCKⅡ细胞模型的建立乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein, BCRP）的分子量约为72 kDa,属于ABC转运蛋白超家族。BCRP除了在肿瘤细胞中高表达介导多药耐药,也广泛存在于正常组织如肝脏、小肠、肾脏及某些特殊生理屏障如血脑屏障、胎盘屏障的毛细血管内皮细胞上。BCRP通过利用ATP水解释放的能量,将细胞内的有毒物质或者药物通过胃肠道、胆汁和尿液排出体外,发挥其抵抗外来毒性物质侵袭的作用。由于BCRP的外排作用能够影响药物的生物利用度、肝肾排泄率和组织分布,因此诱导或抑制BCRP的表达增加了体内药物-药物相互作用发生的潜在可能。这对于一些治疗指数小的药物如米托蒽醌、拓扑替康等尤其重要。对于治疗窗狭窄的药物而言,体内药物暴露量的微小波动可能引发临床疗效和毒性作用的显着变化,进而导致不良反应的发生。人源化BCRP高表达BCRP-MDCKⅡ细胞模型由于培养周期短,代与代之间均一性良好,常作为体外筛选BCRP底物和抑制剂的细胞模型,并可用于研究BCRP介导药物-药物相互作用（DDI）发生的可能性。本研究应用慢病毒感染MDCKⅡ细胞的方法建立人源化BCRP高表达BCRP-MDCKⅡ细胞模型。结果表明：1.酶切实验和DNA测序结果表明,携带目的基因ABCG2表达质粒pSIN4-EF2-ABCG2-IRES-Neo的菌种可在Soc培养基中正确扩增和富集。2.脂质体转染法介导pSIN4-EF2-ABCG2-IRES-Neo质粒进入病毒包装细胞HEK-293T,经G418筛选后,可得到含有目的基因BCRP的慢病毒。病毒滴度经测定为5×104 pfu/mL。3.慢病毒感染MDCKⅡ细胞,经G418筛选后,可得到人源化高表达BCRP-MDCKⅡ细胞模型。RT-PCR和western blot结果表明,BCRP-MDCKⅡ细胞株可稳定高表达外源基因ABCG2。Hoechest 33342外排实验和米托蒽醌双向转运实验结果表明两个底物在转染细胞中的外排率均较未转染细胞提高2倍以上,说明转染的BCRP功能良好,可作为体外筛选BCRP底物和抑制剂的细胞模型。综上所述,本研究应用慢病毒感染MDCKⅡ细胞的方法构建了人源化BCRP高表达BCRP-MDCKⅡ细胞模型,转染10代后仍可稳定高表达目的蛋白BCRP,为体外筛选BCRP底物和抑制剂及研究化合物和BCRP相互作用提供了可靠、实用的细胞模型。Ⅱ H002临床前药代动力学研究H002是一种新型鞘氨醇-1-磷酸受体1（Sphingosine 1-phosphate receptor subtype 1, S1PR1）激动剂。与传统免疫抑制剂（如糖皮质激素、环孢素A、他克莫司等）的作用机制不同,H002在体内可逆地生成其活性形式—磷酸化产物H002-P,通过与S1PR1结合使其发生内陷,诱导淋巴细胞“归巢”,抑制淋巴细胞自外周淋巴结及次级淋巴器官的外流,从而发挥免疫调控作用。前期药理研究表明,H002对类风湿性关节炎、实验性银屑病等免疫性疾病动物模型均有较好的药效。此外,H002诱导的外周血淋巴细胞数降低可在停药后短时间内恢复至正常水平,对机体正常免疫功能的影响较小。与已上市的S1PR1受体调节剂FTY720相比,H002作用于S1PR3的EC50 S1PR1的150倍[1],显着高于文献报道的FTY720对两个受体亚型的相对激活比值（3倍）[2],具有受体选择性高,引起心动过缓等不良反应的可能性较小的特点。本研究根据临床前药代动力学指导原则,建立了生物样品中H002及其代谢产物的LC-MS/MS分析方法,该方法简便、可靠、灵敏度高、特异性强,可满足H002的临床前药代动力学研究的需要。应用已建立的LC-MS/MS方法研究了大鼠和Beagle犬口服和静脉注射H002后的全血药代动力学、分布（大鼠）和排泄特征；鉴定了H002生物转化的主要场所和参与代谢的主要药酶类型；研究了H002与大鼠、犬、猴、人的血浆蛋白结合及其对CYP450s和UDPGT活性的影响,为揭示药物在体内的动态变化规律及种属差异,阐明药效作用的物质基础,了解药物在体内代谢、排泄特点以及预测潜在的药物相互作用提供试验依据。研究结果表明：1.生物样品中H002及其代谢产物测定方法（LC-MS/MS）的建立大鼠全血基质中,H002及其磷酸化产物H002-P、羟化产物H002-M分别在0.2-100 ng/mL、0.25-100 ng/mL和0.2-100 ng/mL浓度范围内线性关系良好,未见明显基质和杂质干扰。H002、H002-P和H002-M质控样品（浓度分别为0.5、 25、80 ng/mL,1.5、25、80 ng/mL,0.5、25、80 ng/mL,）的日内和日间精密度相对标准差均小于11.76%,准确度为±9.84%。低、中、高质控样品回收率为92.02-108.18%,基质效应为95.01-104.08%。质控样品在冰上放置6 h、处理后样品室温放置24 h、进样舱放置48 h、长期放置（-80℃放置7天、30天、3个月）和反复冻融3次等条件下均稳定。H002、H002-P和H002-M高浓度样品用大鼠空白全血稀释2、5、10、20倍后均不影响测定的准确性。Beagle犬全血基质中,H002及H002-P、H002-M分别在0.5-500 ng/mL、 0.25-100 ng/mL和0.5-100 ng/mL浓度范围内线性关系良好,全血中未见明显基质和杂质干扰。H002、H002-P和H002-M质控样品（1.5、75、400 ng/mL,0.6、 25、80 ng/mL,1.5、25、80 ng/mL,）的日内和日间精密度相对标准差均小于9.30%,低浓度的准确度在±18.00%范围内,中、高浓度的准确度在±14.80%范围内。低、中、高质控样品的回收率为106.78-112.49%,基质效应为97.45-104.42%。质控样品在冰上放置6 h、处理后样品室温放置24 h、进样舱放置48 h、长期放置（-80℃放置7天、30天、6个月）和反复冻融3次等条件下均稳定。H002、H002-P和H002-M高浓度样品用犬空白全血稀释5、10、20倍后均不影响测定的准确性。2.H002在大鼠体内的药代动力学研究（1）大鼠口服H002后的全血药代动力学雌雄大鼠口服H002（1、3、10、30 mg/kg）后5 min血中可检测到H002、H002-P和H002-M,给药后72-144h各组动物血药浓度低于或接近检测限。雄鼠口服H002 1、3、10、30 mg/kg后全血中原型药的Tmax分别为5.6、1.2、4.0、2.0h,Cmax分别为5.87、22.20、55.30、267.60 ng/mL, AUC（0-t）分别为93.16、125.79、630.27和3782.58 ng/mL×h, t1/2分别为9.12、13.42、10.41和18.37 h,MRT（0-t）分别为12.05、10.42、11.37和14.38 h；H002-P的Tmax分别为7.2、6.8、6.0、5.6 h,Cmax分别为24.02、45.76、161.22、567.20 ng/mL, AUC（0-t）分别为384.09、464.82、2348.96和10802.89 ng/mL×h, t1/2分别为8.14、12.43、12.65和16.00 h,MRT（0-t）分别为14.75、12.34、13.72和16.33 h；H002-M的Tmax分别为7.2、4.8、6.8、6.0h,Cmax分别为5.40、13.06、33.50、114.46 ng/mL,AUC（0-t）分别为82.35、127.40、427.18和2213.58 ng/mL×h, t1/2分别为8.74、5.95、7.07和16.62 h,MRT（0-t）分别为11.80、9.94、11.26和15.98 h。雌鼠口服H0021、3、10、30 mg/kg后全血中原型药的Tmax分别为4.0、2.5、4.8、1.3 h,Cmax分别为7.74、21.38、69.50、435.4 ng/mL, AUC（0-t）分别为104.63、192.08、987.84和5526.58 ng/mL×h, t1/2分别为5.04、16.21、11.57和15.02 h,MRT（0-t）分别为10.72、11.42、11.39和20.58 h；H002-P的Tmax分别为8.8、6.4、6.4、4.0 h,Cmax分别为28.68、56.08、235.00,770.60 ng/mL, AUC（0-t）分别为461.73、705.88、3723.55和16612.94 ng/mL×h, t1/2分别为9.74、12.31、13.42和17.13 h,MRT（0-t）分别为13.26、13.19、13.53和22.43 h：H002-M的Tmax分别为7.2、5.2、5.6、10.4 h,Cmax分别为4.62、12.28、31.82、79.60 ng/mL, AUC（0-t）分别为65.90、130.42、472.68和2059.02 ng/mL×h, t1/2分别为8.75、7.22、7.91和15.43 h,MRT（0-t）分别为11.46、10.73、11.40和24.26 h。雌雄大鼠口服H002后,H002、H002-P和H002-M的Cmax和AUC（0-t）随剂量增加而递增,在1-30 mg/kg剂量范围内原型药、H002-P和H002-M在体内基本呈线性动力学过程,高剂量组t1/2和MRT（0-t）随剂量增加略有延长。各剂量组H002-P的Cmax和AUC（0-t）均大于原型药和H002-M。雌鼠口服H002后原型药和H002-P的AUC（0-t）略高于雄鼠,H002-M无明显性别差异。（2）大鼠静脉注射H002后的全血药代动力学雌雄大鼠静脉注射H002后2 min血中可检测到原型药及代谢物H002-P和H002-M,给药后48h各组动物血药浓度低于或接近检测限。雌、雄大鼠给药后2min原型药的平均血药浓度分别为348.6和304 ng/mL, AUC（0-t）分别为187.85和141.3 ng/mL×h,t1/2分别为7.73和7.43 h,MRT（0-t）分别为6.71和5.83 h；代谢物H002-P的Tmax分别为0.93和0.41 h,Cmax分别为41.72和47.12 ng/mL,AUC（0-t）分别为399.49和299.88 ng/mL×h, t1/2分别为7.47和6.95h,MRT（0-t）分别为9.56和8.37 h；代谢物H002-M的Tmax分别为0.69和0.10h, Cmax分别为6.71和7.69 ng/mL, AUC（0-t）分别为57.29和43.56 ng/mL×h, t1/2分别为9.7和10.33 h,MRT（0-t）分别为11.54和11.37h。雌、雄大鼠口服H002（3 mg/kg）后原型药的生物利用度分别为9.62%和8.90%（H002-P相当于等剂量静脉给药的17.91%和15.66%）。（3）大鼠口服11002后在体内主要组织的分布大鼠口服H002（1 mg/kg）后原型药和代谢物在体内分布广泛。雄鼠给药后0.5 h组织和器官中原型药浓度排序为：胃>小肠>淋巴结>肾上腺>肺>肝脏>肾>骨髓>脂肪>脾>肌肉>附睾>心脏>胸腺>睾丸>全血,脑中药物浓度低于最低定量限。雌鼠给药后0.5 h组织和器官中原型药浓度排序为：淋巴结>胃>小肠>肾上腺>肺>子宫>心脏>卵巢>肝脏>肾>骨髓>脂肪>脾>肌肉>胸腺>脑>全血。雌雄给药后4 h、18 h的分布趋势与0.5 h相似。H002-P和H002-M在各组织中的分布趋势和原型药相似。大鼠口服H002后在胃肠道及血流量丰富组织的分布较多。多数组织中的药物浓度高于同时间点血药浓度。雌雄大鼠的组织分布趋势基本相似,无明显性别差异。（4）大鼠口服H002后自粪、尿、胆汁中的排泄雌雄大鼠口服H002后在粪、尿、胆汁中均可检测到原型药、H002-P、H002-M和羟化产物的硫酸结合物（H002-OSO3）。雄雌大鼠口服H002（1 mg/kg）后胆汁中原型药、H002-M、H002-OSO3（校正定量）、H002-P的累积排泄量分别为给药量的0.007%、0.375%、4.826%、0.008%和0.011%、0.642%、5.796%、0.060%。雄雌大鼠给药后72 h胆汁中原型药和代谢物的累积排泄量分别约为给药量的5.216%和6.509%。雄雌大鼠口服H002 （1 mg/kg）后粪便中原型药、H002-M、H002-OSO3（校正定量）、H002-P的累积排泄量分别为给药量的2.353%、15.233%、33.114%、0.047%和1.627%、12.825%、20.569%、0.052%,雄雌大鼠给药后6 d粪便中原型药和代谢物的累积排泄量分别约为给药量的50.747%和35.073%。雄雌大鼠口服H002（1 mg/kg）后尿液中原型药、H002-M、H002-OSO3（校正定量）、H002-P的累积排泄量分别为给药量的0.049%、5.576%、0.630%、0.010%和0.012%、7.197%、0.666%、0.005%,雄雌大鼠给药后6 d尿液中原型药和代谢物的累积排泄量分别约为给药量的6.265%和7.880%。雄雌大鼠口服H002（1 mg/kg）后原型药和代谢物粪、尿总排泄量分别为给药量的57.01%和42.95%,主要经粪便途径。（5）H002与大鼠、犬、猴和人的血浆蛋白的结合H002（30、300和1500 ng/mL）与大鼠、犬、猴和人的血浆蛋白结合率为98.13-99.17%,提示H002与血浆蛋白高度结合,各种属间无明显差异,也未见明显浓度依赖性。3.H002在Beagle犬体内的药代动力学研究（1） Beagle犬口服H002后的全血药代动力学Beagle犬口服H002 0.3、1.8、10 mg/kg后5-30 min血中可检测到原型药、H002-P和H002-M（0.3mg/kg剂量组多数时间点H002-M的浓度均低于最低定量限）,血药浓度呈多峰现象,给药后384-1248 h各组动物血药浓度低于或接近检测限。雌犬口服0.3、1.8、10 mg/kg H002后全血中原型药的Tmax分别为19.75、6.50、5.50 h,Cmax分别为28.45、276.25、1562.5 ng/mL, AUC（0-t）分别为2951.13、28030.93和291344.91 ng/mL×h, t1/2为82.95、97.63和160.88 h,MRT（0-t）分别为111.24、119.75和233.38 h；H002-P的Tmax分别为19.50、21.00、34.50 h,Cmax分别为2.48、11.67、90.88 ng/mL, AUC（0-t）分别为401.53、1460.88和19964.51 ng/mL×h,t1/2分别为136.23、89.91和143.52 h,MRT（0-t）分别为146.70、112.51和237.31 h；中高剂量组H002-M的Tmax分别为16.00和19.00 h,Cmax分别为5.74和44.35 ng/mL, AUC（0-t）分别为471.12和4877.23 ng/mL×h, t1/2分别为148.63和125.44 h,MRT（0-t）分别为81.55和158.08 h。雄犬口服0.3、1.8、10 mg/kg H002后全血中原型药的Tmax分别为11.00、4.25、5.00 h,Cmax分别为27.38、283.5、1685.00 ng/mL, AUC（0-t）分别为1347.83、22169.09和108385.97 ng/mL×h,t1/2分别为46.71、89.83和168.56 h,MRT（0-t）分别为72.80、98.46和170.17 h；H002-P的Tmax分别为15.00、18.00、19.50 h,Cmax分别为1.72、10.09、93.20 ng/mL, AUC（0-t）分别为202.87、1092.17和10254.62 ng/mL×h, t1/2分别为106.53、68.50和111.27 h,MRT（0-t）分别为91.57、90.62和142.82 h；中高剂量组H002-M的Tmax分别为18.00和20.00 h,Cmax分别为9.74和55.48 ng/mL AUC（0-t）分别为518.04和4799.64 ng/mL×h, t1/2分别为82.66和93.08 h,MRT（0-t）分别为120.57和117.51 h。雌雄Beagle犬口服H002后,原型药和代谢物的Cmax和AUC（0-t）随给药剂量增加而递增,在0.3～10 mg/kg剂量范围内原型药及代谢物在体内基本呈线性动力学过程,高剂量组t1/2和MRT0-t¨随剂量增加略有延长。各剂量组原型药的Cmax和AUC（0-t）均高于H002-P和H002-M。血中原型药和H002-P的Cmax未见明显性别差异,但雌犬的AUC（0-t）略高于雄犬,t1/2和MRT（0-t）也有所延长,但无统计学差异；H002-M的的药代动力学参数未见明显性别差异。（2） Beagle犬静脉注射H002后的全血药代动力学雌雄Beagle犬静脉注射H002 （0.1 mg/kg）后2 min血中可检测到原型药和代谢物H002-P,多数时间点血样中代谢物H002-M的含量低于最低定量限（0.5 ng/ml）。原型药和H002-P的血药浓度于给药后22 d和16 d低于或接近检测限。雌、雄犬给药2 min后全血中原型药平均浓度分别为152.50和155.00 ng/mL, AUC（0-t）分别为3352.71和2238.90 ng/mL×h, t1/2分别为111.91和62.92 h,MRT（0-t）分别为85.04和63.29 h；代谢物H002-P的Cmax分别为1.13和1.23 ng/mL,AUC（0-t）分别为159.02和103.02 ng/mL×h,t1/2分别为102.99和73.45 h,MRT（0-t）分别为110.67和61.80 h。雌雄Beagle犬口服H002 1.8 mg/kg后原型药的生物利用度分别为46.4%和55.0%（H002-P分别相当于等剂量静脉给药的51.05%和58.90%）。（3） Beagle犬多次口服H002后的全血药代动力学Beagle犬连续口服H002 （1.8 mg/kg）12天后血药浓度达到稳态,末次给药后雌雄犬血中原型药、H002-P和H002-M的药代动力学参数未见明显性别差异。与单次给药相比,末次给药后（24 h）原型药和代谢物的Cmax和AUC（0-t）均明显增加。雌犬原型药、H002-P、H002-M的Cmax增加倍数分别为3.06、3.14和4.24倍,AUC（0-t）增加倍数分别为3.31、3.78和4.93倍；雄犬原型药、H002-P、H002-M的Cmax增加倍数分别为2.91、3.23和3.42倍,AUC（0-t）增加倍数分别为3.03、3.30和3.68倍,提示Beagele犬多次口服H002后原型药和代谢物在体内有蓄积倾向。（4） Beagle犬口服H002后自粪、尿中的排泄Beagle犬口服H002后粪、尿中均可检测到原型药、H002-P、H002-M及H002-OS03。雌雄Beagle犬口服H002（1.8mg/kg）后原型药、H002-M、H002-OSO3（校正定量）和H002-P经粪的累积排泄量分别为给药量的15.622%、5.945%、74.912%、0.269%和16.797%、5.733%、73.872%、0.250%,雌雄Beagle犬粪中原型药和代谢物的累积排泄量分别约为给药量的96.748%和96.652%。雌雄Beagle犬口服H002 （1.8 mg/kg）后原型药、H002-M、H002-OSO3（校正定量）和H002-P经尿的累积排泄量分别为给药量的0.549%、2.494%、1.499%、0.005%和0.476%、2.671%、2.140%、0.005%,原型药和代谢物在雌雄Beagle犬尿中的累积排泄量分别约为给药量的4.547%和5.292%。雌雄Beagle犬口服H002 （1.8 mg/kg）后30天内原型药和代谢物粪、尿总排泄量分别为给药量的101.30%和101.94%,主要经粪排泄。4.H002的生物转化研究大鼠、Beagle犬口服H002后在血、粪、尿、胆汁中可检测到多个代谢产物,包括磷酸化产物（H002-P）、羟化产物（H002-M）、羟化产物的硫酸结合物（H002-OSO3）。H002与大鼠/人/犬/猴肝微粒体体外温孵后也可检测到代谢物H002-P和H002-M,体内外代谢产物具有一定的相关性,而H002-OSO3主要在体内生成。体外代谢稳定性研究结果表明,H002 （10μM）与人工胃液、人工肠液、肠道菌群及大鼠血浆温孵6 h后未见明显减少。与大鼠、犬、猴、人全血温孵6 h后H002-P的生成量随温孵时间延长逐渐增加,提示全血可能是H002-P生成的主要场所。H002与大鼠不同组织匀浆温孵后,H002-P的生成量依次排序为血>肝脏>脾脏>脑>胃>淋巴结>心脏>肾>肺>小肠>胸腺,H002-M生成量的排序为肝脏>小肠>肺>脾>淋巴结>肾>脑>胸腺>心脏>胃,进一步提示H002-P生成的主要场所为全血,H002-M生成的主要场所为肝脏和小肠。H002与大鼠、犬、猴、人红细胞温孵结果表明,红细胞是H002-P生成的重要场所,生成速率依次为大鼠>猴>人>犬,SPHK1的选择性抑制剂CB5468139、SPHK1和SPHK2的双重抑制剂DMS、SPHK2的竞争性抑制剂FTY720可不同程度地抑制H002-P的生成,提示SPHK1及SPHK2均可能参与H002-P在红细胞中的生成。体外肝微粒体温孵实验结果表明,H002在大鼠、犬和人肝微粒中的氧化代谢物除H002-M外,还可检测到另一个羟化产物H002-M1,而猴肝微粒体中H002的氧化代谢物主要为H002-M1。应用CYP450同工酶的选择性抑制剂、抗体和14个人源化重组酶的研究结果表明,CYP1A1、CYP2J2、CYP3A4、CYP4F2主要参与H002-M的生成,CYP1A2、CYP2D6、CYP4F12等也有少量参与。参与H002-M1生成的同工酶主要为CYP2J2、CYP4F2、CYP4F3B,以上结果提示H002的氧化代谢是多酶参与的转化过程。5.H002及其代谢产物对药物代谢酶的抑制/诱导作用H002体外（1-10 μM）对大鼠/人/犬/猴肝微粒体中的CYP1A2、CYP2C19、 CYP4F2、CYP2C9、CYP2D6、CYP2J2、CYP2E1的抑制作用为20.16%-40.33%,H002-P （1-10 μM）对以上4个种属肝微粒体CYP1A2、CYP2C19、CYP2E1、 CYP2J2、CYP2C9、CYP4F2的抑制作用为26.10%-43.17%,H002-M对以上4个种属肝微粒体CYP1A2、CYP2C19、CYP2E1、CYP2J2、CYP4F2、CYP2C9的抑制作用为21.07%-56.69%,上述抑制作用明显弱于阳性抑制剂,且浓度高于本研究中大鼠、犬所用最高剂量的Cmax。H002对肝微粒体CYP2D6、CYP3A4无明显影响。雄鼠多次口服H002 （3 mg/kg/d×7d）后肝微粒体CYP2E1、CYP2J3/4活性轻度降低（21.1%-33.3%）；雌鼠CYP1A2、CYP2C11、CYP2C6酶活性轻度升高（20.1%-44.1%）,CYP4F1略有降低（21.2%）。H002对雄鼠的GST有轻度诱导作用,对UDPGT有轻度抑制作用,但对雌鼠GST和UDPGT均无明显影响。6.H002在Caco-2和MDR1-MDCKII细胞中的转运H002在Caco-2和MDR1-MDCKII细胞中的转运具有明显的方向性,当加入P-糖蛋白抑制剂PSC833后方向性消失,提示H002可能是P-gp的底物。MDR1-MDCKII细胞中H002对P-gp介导的地高辛转运活性具有一定的抑制作用,IC50为0.29 μM。
唐霞,辛华雯,李维亮,欧阳萌[5]（2015）在《黄连素对HepG2细胞CYP3A4和P-gp的影响和作用机制研究》文中提出目的:阐明黄连素即盐酸小檗碱（berberine hydrochloride,BBR）对人肝癌细胞HepG2中细胞色素P450 3A4（CYP3A4）、多药耐药基因（MDR1）在mRNA和蛋白水平表达的影响,初步探讨黄连素对CYP3A4和P-糖蛋白（P-gp）的影响及其作用机制。方法:采用MTT法检测不同浓度的BBR（1100μg/mL）对HepG2细胞活力的影响;并在BBR对HepG2细胞毒性较小的浓度范围进行实验,实验分为空白对照组、不同浓度BBR组、诱导剂利福平（Rif）组以及不同浓度BBR和Rif共同给药组,与对数期HepG2细胞孵育48h后,提取细胞RNA和总蛋白,分别采用荧光定量PCR法（QRT-PCR）、Western blot法检测HepG2细胞中CYP3A4、MDR1、孕烷X受体（pregnane X receptor,PXR）、视黄醛X受体（retinoid X receptor,RXR）在mRNA水平的表达和CYP3A4、P-gp在蛋白水平的表达。结果:BBR在140μg/mL浓度范围内对HepG2细胞毒性小,细胞活力大于80%,超过40μg/mL时对细胞毒性大,细胞存活率低。Western blot结果表明,与空白对照组比较,0.1、0.5和2μg/mL BBR对HepG2细胞CYP3A4和P-gp蛋白的表达有诱导作用（P<0.05）,但10、40μg/mL BBR对HepG2细胞CYP3A4和P-gp蛋白的表达有显着性抑制作用（P<0.01）。QRT-PCR结果表明,与空白对照组比较,10、20和40μg/mL BBR均对HepG2细胞PXR、CYP3A4、MDR1mRNA的表达有显着抑制作用（P<0.05）;但10μg/mL BBR对RXR mRNA无显着性影响（P>0.05）,20、40μg/mL BBR对RXR mRNA有显着的抑制作用（P<0.05）。结论:黄连素对CYP3A4和P-gp有双向作用,低剂量时诱导,高剂量时抑制,并且其作用很有可能通过PXR信号通路实现。
叶静[6]（2014）在《表小檗碱体内外生物代谢反应研究》文中进行了进一步梳理表小檗碱是黄连中的一种重要的异喹啉类生物碱,研究表明表小檗碱具有较强的抗氧化活性,并且能够抑制醛糖还原酶,从而降低血糖,其作用强于小檗碱。与其它生物碱类似,有关表小檗碱的药理作用受到了广泛的关注,具有良好的开发应用前景。近年来有关表小檗碱的药代动力学研究也逐渐受到重视,研究发现表小檗碱在体内外均可发生广泛的代谢,大鼠灌胃表小檗碱后的尿液、粪便和血液,以及表小檗碱的肝微粒体温孵和肠菌孵育样品中均可检出其代谢产物;此外,在体外人肝微粒体温孵体系中表小檗碱对人CYP2D6酶显示较强的抑制作用。但有关表小檗碱体内代谢的部位、代谢途径以及参与其代谢的药代酶等信息目前尚不十分清楚。为进一步阐明表小檗碱的体内药代动力学规律,为表小檗碱的开发利用提供依据,也为黄连配伍机理研究提供实验依据,本课题在已有研究的基础上,结合最近中药药代动力学研究中涌现的新技术和新方法,对表小檗碱开展了以下几方面的药代动力学探索研究:1.建立LC-MS/MS方法,比较灌胃和静注给药表小檗碱后大鼠体内代谢产物的差异,鉴定表小檗碱在肝微粒体中的I相和II相代谢产物,及体外肠菌培养模型中的代谢产物,以确定表小檗碱在体内的代谢部位和代谢途径;2.采用化学抑制剂试验和重组人源CYP450酶筛选实验相结合的方法鉴定人肝微粒体（HLM）和大鼠肝微粒体（RLM）中参与表小檗碱代谢的CYP450酶的亚型;3.采用大鼠体内灌胃诱导,cocktail探针底物肝微粒体体外温孵法考察表小檗碱对主要肝药酶亚型活性的影响;并研究体外不同浓度表小檗碱对CYP2D6酶的抑制作用。现将整篇论文完成过程简述如下:第一部分文献综述此部分对黄连以及黄连中的重要生物碱表小檗碱的研究进展,药物代谢研究方法,代谢酶介导的药物相互作用进行分析、概括和总结。第二部分实验研究1 LC-MS/MS鉴定表小檗碱体内体外主要代谢产物1.1灌胃和静注给药表小檗碱后大鼠体内代谢产物的比较本部分实验采用LC-MS/MS,比较灌胃和静注给药表小檗碱后大鼠体内代谢产物的差异。首先收集空白大鼠尿液、粪便、胆汁及血液,然后灌胃给药表小檗碱50mg·kg-1后将大鼠放入代谢笼中收集尿液、粪便,胆管插管收集胆汁及颈动脉插管收集血液。在正离子检测模式下,将给药后样品与空白样品一级全扫描质谱对比分析,寻找原药可能的I、II相代谢产物,然后对这些代谢产物的分子离子进行多级质谱分析,并结合药物在生物体内的代谢规律,阐述各代谢产物的结构。在灌胃给药大鼠尿液中鉴定出原药及12个代谢产物,粪便中鉴定出原药及4个代谢产物,胆汁中鉴定出原药及3个代谢产物,血液中鉴定出原药及3个代谢产物。在静注给药大鼠尿液中鉴定出原药及12个代谢产物,粪便中鉴定出原药及4个代谢产物,胆汁中鉴定出原药及3个代谢产物,血液中仅鉴定出原型。表小檗碱进入体内后部分以原药直接从大鼠尿液和粪便中排出,在大鼠体内的发生的I相生物转化主要是去甲基（代谢产物III、IV）、二去甲基（代谢产物II）,还原反应（代谢产物V）和氧化反应（代谢产物VI）,II相生物转化主要是葡萄糖轭合反应（代谢产物VIIXIII）。灌胃和静注表小檗碱后大鼠体内代谢产物基本相同,推测表小檗碱在胃肠道可能较少代谢,代谢转化主要发生在吸收入血后环节,肝脏是其重要的代谢器官。1.2表小檗碱在肝脏中I相代谢产物的鉴定为了研究表小檗碱在肝脏中的I相代谢产物,我们设计了肝微粒体体外温孵实验。大鼠灌胃50mg·kg-1的表小檗碱后,主要有5个I相代谢产物,分别是代谢产物ⅡⅥ。对于表小檗碱经人体肝药酶的代谢,我们从HLM进行了考察,仅得到2个代谢产物Ⅲ和IV。从大鼠的肝脏组织制备的微粒体,在体外与表小檗碱共孵育,所得结果与HLM温孵结果相似。因此我们认为,在肝微粒体体外代谢模型中,我们能够检测到的表小檗碱的主要I相代谢产物为Ⅲ和Ⅳ。1.3表小檗碱在肝脏中Ⅱ相代谢产物的鉴定在表小檗碱体外HLM温孵体系中,我们共鉴定出3个Ⅱ相代谢产物,其分别为代谢产物Ⅹ、Ⅺ和Ⅻ。自大鼠的肝脏组织制备的微粒体温孵体系中的代谢产物,与HLM温孵结果相似。1.4表小檗碱在体外肠菌培养模型中代谢产物的鉴定通过体外肠菌培养模型,我们研究了表小檗碱经肠道菌群代谢后的代谢产物,仅鉴定出1个代谢产物,其为代谢产物Ⅲ。灌胃和静注表小檗碱产生基本相同的代谢产物,由此我们推测表小檗碱在胃肠道发生代谢的可能性较小,代谢转化主要发生在吸收入血后环节。经体外肝微粒体温孵模型和肠菌培养模型中的代谢产物研究,我们进一步证实了上述推测。肝脏是表小檗碱的重要代谢器官,主要发生Ⅰ相脱甲基及Ⅱ相葡萄糖结合反应,而胃肠道和肝外代谢也是表小檗碱的代谢途径。这为进一步研究表小檗碱的生物代谢转化过程提供了科学依据。2表小檗碱CYP450代谢酶亚型的鉴定为了进一步考察负责代谢表小檗碱的肝脏CYP450酶的亚型,我们采用将表小檗碱与8种特异性化学抑制剂分别共孵育的方法,分别鉴定了 HLM和RLM中参与表小檗碱代谢的CYP450亚酶,并结合重组人源CYP450酶筛选实验对化学抑制剂试验的鉴定结果进行验证。化学抑制剂试验是通过比较加入化学抑制剂前后表小檗碱代谢产物生成量的变化,筛选负责代谢表小檗碱的CYP450酶亚型。实验结果表明:在RLM中,CYP3A的抑制剂酮康唑和CYP2D的抑制剂奎尼丁均可较大程度的影响表小檗碱的代谢产物Ⅲ和Ⅳ的生成,说明CYP3A和CYP2D是表小檗碱的代谢酶。在HLM中,奎尼丁、酮康唑抑制代谢产物Ⅲ的生成,而奎尼丁、酮康唑、氯美噻唑均抑制代谢产物IV的生成,说明CYP2D6,3A4,2E1为表小檗碱的代谢酶。重组人源P450酶筛选实验是将人重组酶CYP3A4,2D6,2E1,2A6分别与表小檗碱共温孵,以代谢产物Ⅲ和Ⅳ的生成率为考察指标,在重组酶系统中筛选代谢表小檗碱的阳性代谢酶。实验结果表明:代谢产物Ⅲ的生成主要由CYP2D6,3A4催化,代谢产物Ⅳ的生成主要由CYP2D6,3A4,2E1催化,说明CYP2D6,3A4,2E1为表小檗碱的代谢酶,其贡献值大小为CYP2D6>3A4>2E1。3表小檗碱对大鼠P450酶活性影响的体内外研究本部分实验首先采用大鼠体内灌胃诱导,cocktail CYP450亚酶探针底物肝微粒体体外温孵法,通过HPLC同时检测肝微粒体中5种探针底物的浓度,以探针底物的代谢消除百分率来评价表小檗碱对大鼠肝微粒体CYP450亚酶活性的影响。实验结果显示:与空白对照组比较,给药组可明显抑制CYP2D6的活性（P<0.01）,对CYP3A4也有一定的抑制作用（P<0.05）,但是对CYP2E1,CYPIA2及CYP2C9未有明显作用,这为明确表小檗碱体内相互作用信息提供了实验依据。体外实验部分采用cocktail探针药物法同时测定5种探针底物的含量,评价体外不同浓度表小檗碱对大鼠肝微粒体CYP450不同亚酶活性的影响。实验结果显示:表小檗碱在体外对大鼠肝微粒体中的CYP2D6酶具有较强的抑制作用,其IC50为35.22μmol·L-1。第三部分讨论和结论本部分对实验研究中各部分结果进行分析、总结和讨论,综合本课题各部分研究成果得出结论:表小檗碱在体内发生了广泛的生物代谢反应,代谢转化主要发生在吸收入血后的环节。肝脏是其重要的代谢器官,主要发生Ⅰ相脱甲基及Ⅱ相葡萄糖结合反应。而胃肠道和肝外代谢也是表小檗碱的代谢途径。介导表小檗碱代谢反应的主要I相肝药酶为CYP2D6和CYP3A4。表小檗碱在体内主要是通过抑制CYP2D6和CYP3A4的活性而与其他药物产生相互作用,而在体外主要抑制CYP2D6的活性。
唐霞[7]（2014）在《黄连素在体内外对CYP 3A和P-糖蛋白的影响及其作用机制研究》文中指出背景：肾移植已成为终末期肾衰竭有效的临床治疗手段，为移植患者制定有效合理的抗排异免疫抑制方案，对其长期存活率和存活质量有着至关重要的作用。环孢素A（Cyclosporine A, CsA）是器官移植受者普遍应用的免疫抑制剂之一，在临床实践中，我们发现盐酸小檗碱即盐酸黄连素（Berberine chloride, BBR）可显着增加肾移植受者CsA的全血浓度，较大幅度的减少CsA剂量，有望成为节省CsA昂贵费用的手段。围绕这一全新的发现，本课题组已进行了人体内药代动力学实验：即在肾移植受者和健康受试者中进行CsA药代动力学的研究，验证了BBR对CsA的增效作用，且不增加CsA的肝肾毒性；动物实验：BBR及其与CsA合用对大鼠（小鼠）的肝脏（小肠）微粒体酶活性以及CYP3A1、CYP3A2、CYP2E1、CYP1A1及MDR1a和MDR1b基因影响的研究，结果均提示BBR可能通过抑制大鼠（小鼠）肝脏或/和小肠的CYP3A和P-gp的活性或/和表达而增加CsA的生物利用度，间接证明了BBR对CYP3A和P-gp的影响。但BBR对CYP3A和P-gp调控的分子机制仍不清楚，如能通过本研究初步阐明，将有利于最终证实黄连素对CsA的免疫抑制增效作用的确切机制，为黄连素作为免疫抑制增效剂在临床的广泛应用提供实验依据。目的：本课题旨在通过大鼠体内试验，进一步确证黄连素对CYP3A和P-gp的影响；以人肝癌细胞株HepG2细胞为对象研究BBR对CYP3A4和P-gp mRNA水平和蛋白表达的影响；以HepG2细胞为对象研究BBR对CYP3A4和P-gp的上游调控基因PXR和RXR mRNA水平表达的影响，初步探讨BBR对CYP3A4或P-gp的调控是否通过PXR信号通路；为BBR作为CsA的免疫抑制增效剂在临床的广泛应用提供实验依据。方法：1、BBR对大鼠体内咪达唑仑及其代谢物1ˊ-羟基咪达唑仑的药代动力学影响实验。以咪达唑仑作为CYP3A的探针药物，建立大鼠血浆中咪达唑仑和1ˊ-羟基咪达唑仑的HPLC分析检测方法，HPLC法测定各不同给药组大鼠血浆药物浓度，分析比较各给药组BBR对大鼠体内咪达唑仑及其代谢物的药代动力学参数的影响。2、BBR对大鼠体内罗丹明123药代动力学影响实验。以罗丹明123作为P-gp的探针药物，建立大鼠血浆中罗丹明123HPLC分析检测方法，HPLC法测定各不同给药组大鼠血浆药物浓度，分析比较各给药组BBR对大鼠体内罗丹明123代谢的药代动力学参数的影响。3、BBR对HepG2细胞的毒性实验。采用MTT法检测不同浓度的BBR（1-100μg/mL）对HepG2细胞活力的影响，并在BBR对HepG2细胞毒性较小的浓度范围进行实验。4、BBR对HepG2细胞CYP3A4和P-gp蛋白表达影响实验。实验分为空白对照组、不同浓度BBR组、诱导剂利福平（Rif）组以及各不同浓度BBR和Rif共同给药组，与对数期HepG2细胞孵育48h后，提取细胞总蛋白，Westernblotting法检测CYP3A4、P-gp在蛋白水平的表达。考察不同浓度的BBR对HepG2细胞CYP3A4和P-gp蛋白表达水平影响。5、BBR对HepG2细胞CYP3A4、MDR1mRNA以及上游调控基因PXR、RXR mRNA表达的影响实验。根据BBR对HepG2细胞CYP3A4和P-gp蛋白表达影响的实验结果，选取BBR对CYP3A4和P-gp蛋白表达有抑制作用的BBR浓度范围进行实验。实验分为空白对照组、BBR低、中、高剂量组、诱导剂利福平（Rif）组以及各浓度BBR和Rif共同给药组，与对数期HepG2细胞孵育48h后，提取RNA，采用实时荧光定量PCR法（Real-time quantitativePCR，RTQ-PCR）检测CYP3A4、MDR1、PXR、RXR mRNA的表达水平，分析考察CYP3A4、MDR1mRNA的表达与上游调控基因PXR、RXR mRNA表达水平的关联性。6、数据处理与统计分析。所有数据均以平均数±标准差（x±s）表示，采用DAS2.0药代动力学软件分析各组大鼠血药浓度随时间的变化，计算其药代动力学参数，采用SPSS19.0软件进行统计分析，组间差异采用t检验，统计结果以P>0.05表示差异无统计学意义，P<0.05表示差异有统计学意义，P<0.01表示显着性差异。结果：1、建立的大鼠血浆中咪达唑仑及其代谢产物1ˊ-羟基咪达唑仑测定的HPLC检测方法，完全符合咪达唑仑及其代谢产物分析测试的要求；另外建立的大鼠血浆中罗丹明123的HPLC检测方法也完全能够符合罗丹明123大鼠血浆样本分析测试的要求，两种检测方法均具有较高的灵敏度和特异性；适用于本课题评价药物间相互作用的研究，为本课题实施奠定了可靠基础。2、口服不同药物后咪达唑仑的主要药动学参数为：AUC（0-t）（μg/mL·h）分别为：（1.25±0.29）（阴性对照组）、（1.69±0.31）（BBR50mg/kg）、（2.03±0.44）（BBR100mg/kg）、（2.12±0.66）（BBR200mg/kg）、（2.47±0.49）（酮康唑75mg/kg）；Cmax（μg/mL）分别为（1.13±0.25）（阴性对照组）、（1.69±0.23）（BBR50mg/kg）、（1.84±0.29）（BBR100mg/kg）、（2.12±0.53）（BBR200mg/kg）、（2.21±0.29）（酮康唑75mg/kg）。1ˊ-羟基咪达唑仑的主要药动学参数如下：AUC（0-t）（μg/mL·h）分别为：（0.66±0.28）（阴性对照组）、（0.46±0.19）（BBR50mg/kg）、（0.42±0.11）（BBR100mg/kg）、（0.36±0.09）（BBR200mg/kg）、（0.37±0.10）（酮康唑75mg/kg）； Cmax（μg/mL）分别为（0.51±0.16）（阴性对照组）、（0.44±0.13）（BBR50mg/kg）、（0.40±0.08）（BBR100mg/kg）、（0.32±0.07）（BBR200mg/kg）、（0.33±0.09）（酮康唑75mg/kg）。用SPSS19.0进行统计分析，（BBR50、100、200mg/kg）和（酮康唑75mg/kg）均能够显着升高MDZ的AUC（0-t）、AUMC（0-t）、Cmax（P＜0.05），且呈剂量依赖性。（BBR100、200mg/kg）和（酮康唑75mg/kg）能够显着降低1ˊ-OH-MDZ的AUC（0-t）、AUMC（0-t）、Cmax（P＜0.05）且呈剂量依赖性，但（BBR50mg/kg）对1ˊ-羟基咪达唑仑的药动学参数的影响无统计学意义（P>0.05）。3、口服不同药物后罗丹明123的主要药动学参数为：AUC（0-t）（μg/L·h）分别为：（48.36±6.4）（阴性对照组）、（59.58±13.37）（BBR50mg/kg）、（77.51±6.84）（BBR100mg/kg）、（95.49±15.99）（BBR200mg/kg）、（93.01±13.07）（维拉帕米4mg/kg）；Cmax（μg/L）分别为（4.41±0.45）（阴性对照组）、（10.18±5.59）（BBR50mg/kg）、（11.78±3.19）（BBR100mg/kg）、（16.25±8.65）（BBR200mg/kg）、（11.39±2.76）（维拉帕米4mg/kg）。统计分析：（BBR100、200mg/kg）和（维拉帕米4mg/kg）均能够显着升高罗丹明123的AUC（0-t）（P＜0.01）；（BBR50、100、200mg/kg）和（维拉帕米4mg/kg）均能够显着升高罗丹明123的Cmax（P＜0.05）且呈剂量依赖性。4、BBR在1-40μg/mL浓度范围内对HepG2细胞毒性小，细胞活力大于80%，超过40μg/mL时对细胞毒性大，细胞存活率低，以此浓度范围作为本实验的给药浓度更为合理。5、Western blotting结果表明：与空白对照组比较，0.1、0.5和2μg/mLBBR组可使CYP3A4和P-gp蛋白表达增加（P<0.05），且呈剂量依赖性，但10、40μg/mL BBR组却使CYP3A4和P-gp蛋白表达显着降低（P<0.01）；与空白对照组比较，Rif诱导了CYP3A4和P-gp蛋白表达（P<0.05），同样与Rif组比较10μg/mL BBR+10μM Rif、40μg/mL BBR+10μM Rif组明显的逆转了Rif对CYP3A4和P-gp蛋白表达的诱导作用，显着降低了CYP3A4和P-gp蛋白的表达（P<0.01）。6、RTQ-PCR结果表明：与空白对照组比较10μg/mL BBR抑制了CYP3A4mRNA的表达（P<0.05），随着BBR浓度的增加20、40μg/mL则更强地抑制CYP3A4mRNA的表达（P<0.01），与空白对照组比较10、20、40μg/mL BBR均能显着降低MDR1mRNA的表达（P<0.01），并且这种抑制作用呈现剂量依赖性；同时与空白对照组比较Rif诱导了CYP3A4、MDR1、PXR、RXR mRNA的表达（P<0.01）；与Rif组比较10μg/mL BBR+10μM Rif、20μg/mL BBR+10μMRif、40μg/mL BBR+10μM Rif组中BBR显着抑制了Rif对CYP3A4、MDR1、PXR、RXR mRNA的诱导作用（P<0.05），随着BBR浓度的增加抑制作用也越强。结论：本文首先从动物体内水平探明BBR对CYP3A和P-gp的影响，其后从细胞分子生物学水平探索BBR通过PXR信号通路对CYP3A4和P-gp的调控机制。1、结果提示，BBR可以显着抑制咪达唑仑的代谢，该抑制作用可能是BBR抑制了咪达唑仑的代谢酶CYP3A的活性所致。同时BBR也可以显着抑制罗丹明123的代谢，该抑制作用也可能是BBR抑制了罗丹明123的转运体P-gp的活性所致。因此临床上可以把BBR作为提高CsA血药浓度的增效剂使用，减少CsA的给药剂量。2、结果提示，BBR对HepG2细胞CYP3A4和P-gp的蛋白表达有双向调节作用，低剂量时呈诱导作用，高剂量时表现出抑制作用，并且在抑制作用的浓度范围BBR也显着抑制了CYP3A4、MDR1、PXR、RXR mRNA的表达，因此BBR对CYP3A4和P-gp的调控作用很有可能通过PXR信号通路实现。
叶林虎[8]（2014）在《荷叶代谢性药物相互作用及体内成分研究》文中研究指明细胞色素P450（cytochromeP450,CYP450）酶系统是机体重要的代谢酶,它参与了许多内源性和外源性物质的代谢。在药物的代谢过程中,CYP2C19、CYP2D6. CYP3A4、CYP2E1和CYP2C9是最主要的亚型,其参与了市场上90%左右药物的代谢。当两种药物合并使用时,一种药物对另一种药物的代谢酶产生抑制或诱导作用都可能产生药物相互作用,导致产生毒性或治疗失败,增加临床治疗的风险。在临床过程中,抑制作用的危害要远大于诱导作用的危害。抑制P450酶的活性可能会引起血药浓度升高而导致毒性作用,有时甚至会危及生命。很多药物因发生严重的代谢性药物相互作用而被撤出市场。中药是来自大自然的天然产物,其常被认为是“安全的,无毒副作用”的药物,从而受到人们的青睐,被广泛使用。然而,近年来的研究发现多种中（草）药及其制剂也会对P450酶产生抑制或诱导作用,从而引起代谢性药物相互作用。这种药物间的相互作用已经引起人们的关注。因此,对一些常用中药进行潜在药物相互作用研究,以预测其可能发生的药物相互作用,是保证临床用药安全有效的重要途径,具有极其重要的意义。荷叶（Nelumbinis Folium）为睡莲科植物Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥叶,为药食两用的中药。其具有清暑化湿、升发清阳,凉血止血的功效,常用于暑热烦渴、暑湿泄泻、脾虚泄泻、血热吐衄、便血崩漏等症。现代药理研究表明,荷叶黄酮和／或生物碱成分具有降血脂,减肥,抗氧化,抗HIV,抗菌和降糖等多种生物活性。作为传统中药,荷叶是多种降脂复方制剂的重要组成部分；作为天然食用资源,目前已被开发成多种减肥茶或其他保健饮品。因此,荷叶及其制剂与其他药物,特别是降脂减肥类药物共同使用的几率较大。然而,到目前为止,有关荷叶及其制剂在使用过程中是否会对P450酶的活性产生影响,是否会导致药物相互作用发生的研究报道仍然缺乏。因此,本文将从P450酶方面来探讨荷叶潜在的药物相互作用。本研究采用液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）技术,建立体外、体内酶活性的评价方法。首先经过体外模型预测荷叶潜在的药物相互作用,然后再通过体内实验进行验证,最后再通过分析荷叶在大鼠体内的药物成分及其在组织中的分布,进一步的从物质基础方面来阐释荷叶潜在药物相互作用的发生原因。此外,还初步探讨了荷叶提取物对转运体P-糖蛋白（P-gp）功能的影响。本论文完成的研究工作主要有以下几个方面：1.以奥美拉唑、右美沙芬、睾丸酮、氯唑沙宗和甲苯磺丁脲分别作为CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4、CYP2E1、CYP2C9的探针底物,将这5个探针底物与人肝微粒体共同孵育,并利用LC-MS/MS分析技术检测代谢产物的生成量,建立同时测定人肝微粒体P450酶5种亚型活性的cocktail探针底物体外评价方法；并运用所建立的方法研究12味常用中药（荷叶、酸枣仁、决明子、五味子、山楂、枸杞子、莲子心、人参、菊花、黄精、茯苓和金银花）对人肝微粒体P450同工酶活性的影响。研究结果显示,所建立的方法具有灵敏度高、特异性强、重现性好和准确度高的优点,能满足体外代谢性药物相互作用研究的要求。12味中药的水提取物对P450同工酶的抑制作用较弱或没有抑制作用；而乙醇提取物则有不同程度的抑制作用（除枸杞子外）,而且这种抑制作用存在浓度依赖性。其中荷叶乙醇提取物对CYP2C19、CYP2D6、 CYP3A4、CYP2E1和CYP2C9半数抑制浓度IC50值分别为77.38、12.05、98.01、61.43和83.46μg/mL；菊花乙醇提取物对CYP2C9活性抑制的IC50值为45.25μg/mL;五味子乙醇提取物对CYP3A4和CYP2C19活性抑制的IC50值分别为47.24和64.42μg/mL。上述研究结果提示,日常服用这些中药时,尤其是在长期服用这些中药经乙醇提取后制备所得的制剂时,应注意其潜在的药物相互作用。2.采用cocktail探针底物法分别研究荷叶总黄酮和总生物碱及其主要化学成分对人肝微粒体P450酶各亚型活性的影响。结果表明荷叶总黄酮对肝微粒体P450酶活性的抑制作用相对较弱,其IC50值均在100μg/mL左右；总生物碱对P450酶活性的抑制作用则较强,其对CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4、CYP2E1（?）CYP2C9的半数抑制浓度IC50值分别为40.79、0.96、44.87、63.84和52.58μg/mL,其中对CYP2D6同工酶的抑制作用最强。总生物碱中的主要成分荷叶碱、N-去甲荷叶碱和2-羟基-1-甲氧基阿朴啡通过竞争性抑制方式抑制CYP2D6酶的活性,其抑制常数Ki值分别为1.88、2.34和1.56μM。但这三者对CYP2D6酶活性的抑制不存在时间依赖性和NADPH依赖性的不可逆抑制作用。采用Caco-2细胞模型研究荷叶乙醇提取物、总黄酮和总生物碱对P-糖蛋白（P-gp）功能的影响。结果表明,荷叶乙醇提取物和总生物碱对P-gp存在浓度依赖性的抑制作用,在浓度为100μg/mL时,Caco-2细胞内的荧光强度明显增加,即Caco-2细胞对Rho-123的摄取量增加,有显着的抑制作用（P<0.05）；荷叶总黄酮对P-gP有一定的抑制作用,但与空白对照组相比较,无显着差异（P>0.05）。上述研究显示,荷叶对P450酶的活性有抑制作用,尤其是对CYP2D6亚型有较强的抑制作用；对P-gp功能也有一定的抑制作用。这些抑制作用主要与荷叶所含的生物碱成分有关。提示荷叶在与其他药物合并使用时,可能存在药物相互作用风险。3.采用右美沙芬和美托洛尔作为CYP2D6酶的探针底物,以LC-MS/MS技术为分析手段,研究荷叶总生物碱对这两种探针底物在体内的代谢产物右菲烷和α-羟基美托洛尔药代动力学的影响；给大鼠连续灌胃总生物碱（50mg/kg）7天,并于末次给药后2或12h时间点给大鼠静脉注射右美沙芬（5mg/kg）或美托洛尔（10mg/kg）,观察其代谢产物血药浓度的变化。并通过蛋白质印迹法（western blot）研究总生物碱对大鼠体内CYP2D6酶蛋白表达水平的影响。结果表明,总生物碱能显着降低右菲烷和α-羟基美托洛尔的血药浓度。在末次给总生物碱后2或12h时间点给大鼠静脉注射右美沙芬或美托洛尔,总生物碱使右菲烷的AUCall从167.27h-ng/mL分别下降到43.13h-ng/mL（P<0.01）（给生物碱后2h时间点）和62.25h-ng/mL（P<0.05）（给生物碱后12h时间点）；使α-羟基美托洛尔的AUCall从347.68h·ng/mL下降到223.24h·ng/mL（P<0.05）（给生物碱后12h时间点）。连续给予大鼠总生物碱7天后,大鼠体内CYP2D6酶蛋白的表达水平并无明显改变。上述研究结果提示,总生物碱在体内亦对大鼠CYP2D6酶有明显的抑制作用,与体外结果相吻合；但这种抑制作用并不影响CYP2D6蛋白的表达水平。4.采用LC-MS/MS分析方法,研究给大鼠灌胃荷叶总黄酮（50mg/kg）或总生物碱（50mg/kg）后的体内药物成分,以及大鼠静脉注射荷叶总生物碱（50mg/kg）后,其主要生物碱成分荷叶碱、N-去甲荷叶碱和2-羟基-1-甲氧基阿朴啡在大鼠组织中的分布情况。结果从大鼠血液和尿液中鉴定出37个黄酮成分,主要包括原型化合物和这些化合物与葡萄糖醛酸和硫酸等结合而形成的代谢产物,表明荷叶黄酮成分在体内的代谢途径主要为Ⅱ相代谢；从大鼠血液和尿液中鉴定出17个生物碱成分,包括生物碱原型化合物及其经氧化、甲基化等的代谢产物,和葡萄糖醛酸和硫酸等的结合物,表明荷叶生物碱在体内代谢广泛,其代谢途径包括Ⅰ相和Ⅱ相代谢。给大鼠静脉注射总生物碱后,三个主要生物碱成分荷叶碱、N-去甲荷叶碱和2-羟基-1-甲氧基阿朴啡能迅速（5min）分布到各组织,其中在肝脏、肺、脾脏和肾脏等组织中具有较高的浓度,并在体内维持较长时间。通过上述研究结果可初步推测荷叶对P450酶活性的抑制与其在体内的药物成分及其组织分布情况有关。总之,本文系统地研究了荷叶乙醇提取物、荷叶总黄酮和总生物碱及其主要化学成分对P450酶活性的影响,尤其是总生物碱对CYP2D6酶活性的抑制作用方面进行了深入研究。同时,对荷叶乙醇提取物及总黄酮和总生物碱对P-gp功能的影响进行了初步研究；最后,对给药后的大鼠进行体内药物成分分析和鉴定,并对总生物碱的主要成分在大鼠组织中的分布情况进行了研究。结果提示荷叶可通过抑制P450酶的活性或P-gp的功能,引起药物相互作用；而且,荷叶对P450酶的活性和P-gp功能的影响主要与其所含生物碱成分有关。本研究为荷叶在临床上的安全、合理应用提供了新信息；为荷叶成分的药理、毒理研究和开发利用提供了新思路。
袁梅,张弋[9]（2013）在《中药、中药成分与常见食物对他克莫司血药浓度的影响》文中研究表明笔者通过查阅相关文献,对中药、中药成分或常见食物和他克莫司相互作用的情况进行归纳和分析,了解中药、中药成分或常见食物对免疫抑制剂他克莫司血药浓度的影响。发现他克莫司与临床使用的一些中药、中药成分或常见食物会发生不良药物相互作用,从而使药物血药浓度或免疫抑制作用发生改变。因此他克莫司与这些中药、中药成分或食物合用时,应密切关注他克莫司的血药浓度变化,以确保治疗的安全和有效。
王国永[10]（2012）在《氟苯尼考与聚醚类离子载体抗球虫药在肉鸡体内的相互作用初步研究》文中研究说明氟苯尼考是一种广泛应用于畜禽和水产养殖业中的氯霉素类新型广谱抗菌药,具有抗菌活性高、不良反应小等特点。氟苯尼考在食品动物体内的药动学和残留研究报道较多,其主要药动学特征是吸收良好、生物利用度高,但代谢产物较多,动物性产品中残留严重。目前,介导氟苯尼考在动物体内的代谢酶及氟苯尼考与其他药物间的相互作用研究的还很少。本实验室前期研究资料显示,CYP3A和P-gp参与了氟苯尼考在兔体内的代谢,CYPIA参与了氟苯尼考在大鼠体内的代谢,而在全球消费量最大的食品动物鸡的体内,氟苯尼考的代谢由哪些酶和蛋白介导、氟苯尼考会不会和养禽业常用的其他药物发生相互作用尚待研究。聚醚类离子载体抗球虫药通常长期添加于饲料中以防控畜禽球虫病。大量研究报道,聚醚类离子载体抗球虫药的某些品种对动物体内的CYP450、b5、AND、AH、EROD、ECON等酶有诱导或抑制作用,对人肿瘤细胞中的P-糖蛋白的基因表达有抑制作用。因此,在使用氟苯尼考来治疗畜禽细菌性疾病感染时,聚醚类离子载体抗球虫药在动物体内的存在就可能与氟苯尼考产生相互作用。为避免药物相互作用带来的不良反应,指导兽医临床上氟苯尼考的合理用药,减少肉鸡可食性组织的药物残留,本试验研究了氟苯尼考与畜禽常用的聚醚类离子载体抗球虫药盐霉素、莫能菌素和马杜霉素在肉鸡体内的相互作用及其机制。具体内容如下：1.细胞色素CYP4501A、3A以及P-糖蛋白在肉鸡体内氟苯尼考代谢中的作用。1日龄AA肉鸡饲喂不含任何药物的饲料饲喂至28日龄后,挑选24只健康的雄性肉鸡分为对照组、氟伏沙明处理组、酮康唑处理组和维拉帕米处理组,每组6只。氟伏沙明处理组动物按25mg/kg b.w.t灌服氟伏沙明,1次/天,连续7天,最后一次灌药0.5h后,肉鸡按30mg/kg体重灌服氟苯尼考溶液；酮康唑处理组、维拉帕米处理组、对照组与氟伏沙明处理组操作相同,分别灌服60mg/kg b.w.t的酮康唑、9mg/kg b.w.t的维拉帕米和相同体积的生理盐水。所有肉鸡在灌服氟苯尼考后12h内从翅下静脉采血,高效液相色谱测定氟苯尼考的血药浓度,3P97药动学软件分析药-时数据。结果显示,肉鸡单剂量口服氟苯尼考的药动学过程符合一室开放动力学模型。对照组氟苯尼考的药-时曲线下面积（AUC）和表观清除率（CL/F）分别为13.80±2.18μg/mL-h和2.28±0.34L/kg/h,当体内的CYPIA活性被氟伏沙明特异性抑制后,血浆中氟苯尼考的药时曲线下面积、表观清除率均未发生显着变化（P>0.05）；当体内的CYP3A活性被酮康唑特异性抑制后,血浆中氟苯尼考的药时曲线下面积显着上升了约3倍（35.04±2.11μg/mL·h；P<0.01）,表观清除率显着下降到0.86±0.06L/kg/h（P<0.01）；当肉鸡体内P-糖蛋白被特异性抑制后,血浆中氟苯尼考的峰浓度极显着升高,而药-时曲线下面积未发生显着改变。结果表明,CYP3A对氟苯尼考在肉鸡体内的代谢起关键作用,提示在肉鸡疾病防控用药时,为防止药物间相互作用的发生,氟苯尼考应避免和CYP3A的底物、诱导剂和抑制剂联合使用。2.聚醚类离子载体抗球虫药对氟苯尼考在肉鸡体内药动学的影响。1日龄AA肉鸡饲喂不含任何药物的饲料饲喂至28日龄后,挑选48只健康雄性肉鸡随机分成对照组、盐霉素诱导组、莫能菌素诱导组和马杜霉素诱导组,每组12只。对照组肉鸡连续14天继续饲喂不含任何药物的饲料；盐霉素诱导组、莫能菌素诱导组和马杜霉素诱导组分别连续14天饲喂含有盐霉素（60mg/kg）、莫能菌素（120mg/kg）和马杜霉素（5mg/kg）的饲料。第15天每组均按30mg/kg体重静脉注射（6只）和经口（6只）灌服氟苯尼考溶液,并分别采集给药后0-10h（静注）和0-24h的血液（口服）,用高效液相色谱检测氟苯尼考的血药浓度。结果显示,静注给药后氟苯尼考血药浓度符合二室开放模型,马杜霉素诱导组肉鸡氟苯尼考中央室分布容积（Vc=1.66+0.09L/kg）显着高于对照组（Vc=1.33±0.08L/kg）；盐霉素和马杜霉素诱导组肉鸡的氟苯尼考分布半衰期（t1/2α=0.67±0.05h（SAL）,0.62±0.02h（MAD））显着低于对照组（t1/2α=0.86±0.06h）；所有聚醚类离子载体抗球虫药诱导组肉鸡的氟苯尼考消除半衰期（t12β=2.29±0.18h（SAL）,2.30±0.05h（MON）,2.11±0.06h（MAD））和药时曲线下面积（AUC=24.24±1.97mg·h/L（SAL）,23.04±1.43mg·h/L（MON）,18.64±0.96mg-h/L（MAD））均显着低于对照组（t1/2β=3.34±0.16h,AUC=29.68±1.58mg·h/L）；莫能菌素和马杜霉素诱导组血浆清除率（CLs=1.33土0.08L/kg·h（MON）,1.63±0.08L/kg·h（MAD））显着高于对照组（CLs=1.02±0.05L/kg·h）。口服给药后氟苯尼考血药浓度符合一室开放模型。莫能菌素诱导组肉鸡的吸收半衰期（t1/2kα=0.59±0.06h）、药峰浓度（Cmax=2.93±0.41μg/mL）和峰时（Tmax=1.32±0.08h）显着低于对照组（t1/2kα=1.15±0.11h,Cmax=4.72±0.82gg/mL,Tmax=2.19±0.26h）,而血浆表观清除率（CL/F（s）=2.75±0.30L/Kg·h）和表观分布容积（V/F=6.39±1.13L/kg）显着高于对照组（CL/F（s）=1.19±0.16L/kg·h,V/F=3.79±0.94L/kg）；各聚醚类离子载体抗球虫药诱导组的药时曲线下面积（AUC=18.17±1.77mg-h/L,11.94±1.90mg·h/L,19.61±1.65mg-h/L）均显着低于对照组（AUC=26.99土2.85mg·h/L）,但仅莫能菌素诱导组的生物利用度（F%=52±8）显着低于对照组（F%=91±10）。提示三种聚醚类离子载体抗球虫药与氟苯尼考之间产生了药物相互作用,因而给饲喂添加含有聚醚类离子载体药物的动物使用氟苯尼考需谨慎。3.聚醚类离子载体抗球虫药对肉鸡肝脏和小肠氟苯尼考代谢相关基因mRNA表达水平的影响。1日龄AA肉鸡饲喂不含任何药物的饲料饲喂至28日龄后,挑选24只健康雄性肉鸡随机分成对照组、盐霉素诱导组、莫能菌素诱导组和马杜霉素诱导组,每组6只。对照组肉鸡连续10天继续饲喂不含任何药物的饲料；盐霉素诱导组、莫能菌素诱导组和马杜霉素诱导组分别连续10天饲喂含有盐霉素（60mg/kg）、莫能菌素（120mg/kg）和马杜霉素（5mg/kg）的饲料。采用分光光度法测定肉鸡肝和小肠CYP450和b5的含量,荧光定量PCR检测肉鸡肝和小肠CYP3A37、CXR和MDR1mRNA的表达。荧光定量PCR检测显示,莫能菌素和马杜霉素极显着增加肉鸡肝脏中CYP3A37基因mRNA的含量（P0.01）；盐霉素和马杜霉素则能促进肝脏中CXR基因mRNA的表达（P<0.01,P<0.05）,同时还极显着降低肝脏中MDRl基因mRNA含量（P<0.01）。莫能菌素和马杜霉素能诱导肉鸡小肠中CYP3A37基因的mRNA的表达（P<0.01,P<0.05）；三种抗球虫药对小肠中CXR的表达无显着影响；而盐霉素则极显着抑制了小肠中MDR1基因的表达（P<0.01）。结果表明,三种聚醚类离子载体抗球虫药对肉鸡肝脏和小肠中CYP3A37、CXR mRNA的表达有不同程度的诱导作用,对MDR1mRNA的表达有不同程度的抑制作用。三种聚醚类离子载体抗球虫药对肉鸡肝和小肠中CYP3A37及其受体CXR mRNA的表达的影响不一致,提示受体CXR并未参与CYP3A37mRNA的表达调控。4.聚醚类离子载体抗球虫药对肉鸡肝脏和小肠CYP3A蛋白表达的影响。1日龄AA肉鸡饲喂不含任何药物的饲料饲喂至28日龄后,挑选24只健康雄性肉鸡随机分成对照组、盐霉素诱导组、莫能菌素诱导组和马杜霉素诱导组,每组6只。对照组肉鸡连续10天继续饲喂不含任何药物的饲料；盐霉素诱导组、莫能菌素诱导组和马杜霉素诱导组分别连续10天饲喂含有盐霉素（60mg/kg）、莫能菌素（120mg/kg）和马杜霉素（5mg/kg）的饲料。以β-actin蛋白为内参,免疫印迹检测对照组和各诱导组肉鸡肝脏和小肠CYP3A蛋白表达的相对量。结果表明,盐霉素、莫能菌素可显着提高肉鸡肝脏组织中CYP450的含量（P<0.05）,莫能菌素还可增加肝中b5的含量,而马杜霉素对CYP450含量则无显着影响；三种聚醚类离子载体抗球虫药诱导组肉鸡肝脏中CYP3A蛋白的表达量稍有增加,但统计学上无显着差异（P>0.05）；而这三种聚醚类离子载体抗球虫药均能显着提高肉鸡小肠中CYP3A蛋白的含量（P<0.01）。提示三种聚醚类离子载体抗球虫药对肉鸡肝脏和小肠中CYP3A蛋白的表达的诱导作用存在组织差异性,对小肠中CYP3A蛋白表达的诱导作用是导致聚醚类离子载体抗球虫药与氟苯尼考相互作用的关键因素。兽医临床上联合使用聚醚类离子载体抗球虫药和氟苯尼考等经由CYP3A代谢的药物或其他对CYP3A有诱导或抑制作用的药物时,会产生严重的药物相互作用。
二、盐酸小檗碱及其与环孢素A合用对大鼠肝P450同工酶及其多药耐药基因的的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、盐酸小檗碱及其与环孢素A合用对大鼠肝P450同工酶及其多药耐药基因的的影响（论文提纲范文）
（1）基于核受体-CYP450/OATPs通路研究小檗碱对调血脂药代谢和转运的调控作用及分子学机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 小檗碱、小檗红碱和去亚甲基小檗碱对HepG2 细胞中CYP1A2、3A4、2B6 表达的影响 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 细胞株 |
| 2.1.2 主要药品 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要仪器设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 主要工作液的配置 |
| 2.2.2 HepG2 细胞培养及生长曲线绘制 |
| 2.2.3 BBR、BRB、DBB、RIF、PHE、OME对 HepG2 细胞的毒性实验 |
| 2.2.4 细胞中蛋白浓度的测定 |
| 2.2.5 BBR、BRB、DBB对 Hep G2 细胞中CYP1A2、3A4、2B6 mRNA表达的影响 |
| 2.2.6 BBR和 BRB对 Hep G2 细胞中CYP1A2、CYP3A4 蛋白表达的影响[51] |
| 2.2.7 数据处理与统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 HepG2 细胞的培养及其生长曲线的绘制 |
| 2.3.2 BBR、BRB、DBB、RIF、PHE、OME对 HepG2 细胞的毒性实验 |
| 2.3.3 细胞中蛋白浓度的测定 |
| 2.3.4 RT-qPCR引物及扩增产物特异性 |
| 2.3.5 BBR、BRB和 DBB对 HepG2 细胞中CYP1A2、3A4、2B6mRNA表达的影响 |
| 2.3.6 BBR和 BRB对 HepG2 细胞中CYP1A2、3A4 蛋白表达的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第3章 小檗碱和小檗红碱对HepG2 细胞代谢非那西汀、咪达唑仑和阿托伐他汀的影响 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 细胞株 |
| 3.1.2 主要药品 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.1.4 主要仪器和设备 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 主要工作液的配制 |
| 3.2.2 HepG2 细胞的培养 |
| 3.2.3 HepG2 细胞样品中非那西汀、咪达唑仑、阿托伐他汀浓度测定 |
| 3.2.4 BBR、BRB对 HepG2 细胞代谢PHE、MDZ和 ATV的影响 |
| 3.2.5 数据处理与统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 细胞样品中PHE、MDZ、ATV浓度测定的方法学评价结果 |
| 3.3.2 BBR、BRB对 HepG2 细胞代谢PHE、MDZ和 ATV的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 第4章 小檗碱、小檗红碱和去亚甲基小檗碱对HepG2 细胞中OATP1B1 转运体表达的影响 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 细胞株 |
| 4.1.2 主要药品 |
| 4.1.3 主要试剂 |
| 4.1.4 主要仪器设备 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 主要工作液的配置 |
| 4.2.2 HepG2 细胞培养 |
| 4.2.3 细胞中蛋白浓度的测定 |
| 4.2.4 BBR及 BRB、DBB对 HepG2 细胞中OATP1B1 mRNA表达的影响 |
| 4.2.5 BBR及 BRB、DBB对 HepG2 细胞中OATP1B1 转运体蛋白表达的影响 |
| 4.2.6 数据处理与统计分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 细胞样品中蛋白浓度的测定 |
| 4.3.2 RT-qPCR引物及扩增产物特异性 |
| 4.3.3 BBR及 BRB、DBB对 HepG2 细胞中OATP1B1 mRNA表达的影响 |
| 4.3.4 BBR、BRB和 DBB对 HepG2 细胞中OATP1B1 转运体蛋白表达的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 第5章 小檗碱、小檗红碱对HepG2 细胞摄取阿托伐他汀和瑞舒伐他汀的影响 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 细胞株 |
| 5.1.2 主要药品 |
| 5.1.3 主要试剂 |
| 5.1.4 主要仪器和设备 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 主要工作液的配制 |
| 5.2.2 HepG2 细胞的培养 |
| 5.2.3 细胞中蛋白浓度的测定 |
| 5.2.4 HepG2 细胞样品中RSV、ATV浓度测定方法的建立 |
| 5.2.5 ATV和 RSV在 HepG2 细胞中摄取条件的优化 |
| 5.2.6 BBR、BRB对 HepG2 细胞摄取ATV和 RSV的影响 |
| 5.2.7 数据处理与统计分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 细胞样品中RSV、ATV浓度测定的方法学部分验证结果 |
| 5.3.2 ATV和 RSV在 HepG2 细胞中摄取条件的优化结果 |
| 5.3.3 BBR、BRB对 HepG2 细胞摄取ATV和 RSV的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 第6章 小檗碱对阿托伐他汀钙、瑞舒伐他汀钙在大鼠体内药代动力学影响 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 实验动物 |
| 6.1.2 主要药品与试剂 |
| 6.1.3 主要仪器 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 主要溶液的配制 |
| 6.2.2 大鼠血浆中RSV、ATV浓度测定的LC-MS/MS方法建立 |
| 6.2.3 长期给予BBR对 ATV在大鼠体内药代动力学的影响研究 |
| 6.2.4 长期给予BBR对 RSV在大鼠体内药代动力学的影响研究 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 LC-MS/MS法测定大鼠血浆中ATV、RSV浓度的方法学验证 |
| 6.3.2 长期给予BBR对 ATV在大鼠体内药代动力学的影响 |
| 6.3.3 BBR对 RSV在大鼠体内药代动力学的影响 |
| 6.4 讨论 |
| 第7章 基于核受体AhR和 PXR研究小檗碱和小檗红碱对CYP1A2和CYP3A4 表达的影响 |
| 7.1 材料 |
| 7.1.1 细胞株和质粒 |
| 7.1.2 主要药品 |
| 7.1.3 主要试剂 |
| 7.1.4 主要仪器设备 |
| 7.2 方法 |
| 7.2.1 主要溶液的配制 |
| 7.2.2 HepG2 细胞的培养 |
| 7.2.3 质粒的构建及提取 |
| 7.2.4 质粒瞬时共转染 |
| 7.2.5双荧光素酶报告基因实验 |
| 7.2.6 细胞蛋白的提取 |
| 7.2.7 基于AhR、PXR探究BBR及 BRB对 CYP1A2和CYP3A4 报告基因活性的影响 |
| 7.2.8 沉默AhR、PXR对 BBR及 BRB调控CYP1A2和CYP3A4 蛋白的影响 |
| 7.2.9 BBR及 BRB对核受体AhR、PXR胞核蛋白表达的影响 |
| 7.2.10 数据处理与统计分析 |
| 7.3 结果 |
| 7.3.1 基于AhR、PXR探究BBR及 BRB对 CYP1A2和CYP3A4 报告基因活性的影响 |
| 7.3.2 沉默AhR、PXR对 BBR及 BRB调控CYP1A2和CYP3A4 蛋白的影响 |
| 7.3.3 BBR及 BRB对核受体AhR、PXR胞核蛋白表达的影响 |
| 7.4 讨论 |
| 第8章 基于RXRα研究小檗碱及小檗红碱对OATP1B1 表达的影响 |
| 8.1 材料 |
| 8.1.1 细胞株和质粒 |
| 8.1.2 主要药品 |
| 8.1.3 主要试剂 |
| 8.1.4 主要仪器设备 |
| 8.2 方法 |
| 8.2.1 主要溶液的配制 |
| 8.2.2 HepG2 细胞的培养 |
| 8.2.3 质粒的构建及提取 |
| 8.2.4 质粒瞬时共转染 |
| 8.2.5双荧光素酶报告基因实验 |
| 8.2.6 细胞蛋白的提取 |
| 8.2.7 基于RXRα研究BBR及 BRB对 OATP1B1 报告基因活性的影响 |
| 8.2.8 分别沉默FXR、LXRα 和RXRα 对BBR及BRB调控OATP1B1 蛋白表达的影响 |
| 8.2.9 BBR及BRB对FXR、LXRα 和RXRα 胞核蛋白表达的影响 |
| 8.2.10 数据处理与统计分析 |
| 8.3 结果 |
| 8.3.1 基于RXRα 研究BBR及BRB对OATP1B1 报告基因活性的影响 |
| 8.3.2 分别沉默FXR、LXRα 和RXRα 对BBR及BRB调控OATP1B1 影响 |
| 8.3.3 BBR及BRB对FXR、LXRα 和RXRα 胞核蛋白表达的影响 |
| 8.4 讨论 |
| 第9章 结论与展望 |
| 9.1 结论 |
| 9.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（2）基于液相色谱质谱联用技术对复方中药艾可清化学成分及其调节细胞色素P450酶作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 中药药效物质基础研究进展 |
| 1.1.1 基于化学物质的中药药效物质基础研究 |
| 1.1.2 基于谱效关系的中药物质基础研究 |
| 1.1.3 血清药物化学与血清药理学相结合的研究方法 |
| 1.1.4 基于代谢组学的中药物质基础研究 |
| 1.1.5 基于生物活性筛选/在线分析技术的中药物质基础研究 |
| 1.1.6 基于计算机虚拟筛选的中药药效组分辨识模式 |
| 1.2 液质联用技术在中药分析中的应用 |
| 1.2.1 液质联用技术在中药化学成分定性和定量分析中的应用 |
| 1.2.2 液质联用技术在中药指纹图谱研究中的应用 |
| 1.2.4 液质联用技术在中药复方药代动力学及药物代谢研究中的应用 |
| 1.3 细胞色素P450酶介导的中药药-西药相互作用 |
| 1.3.1 细胞色素P450酶 |
| 1.3.2 基于CYP450酶的药物相互作用研究方法 |
| 1.3.3 基于CYP450酶的中药-西药相互作用 |
| 1.4 复方中药艾可清的研究进展 |
| 第二章 基于UPLC-ESI-QTOF-MS技术的复方中药艾可清化学成分分析 |
| 2.1 仪器和实验材料 |
| 2.1.1 仪器 |
| 2.1.2 材料与试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 艾可清提取液及各味药材提取液的制备 |
| 2.2.2 对照品溶液配制 |
| 2.2.3 液质条件 |
| 2.2.4 数据处理与分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 色谱和质谱条件优化 |
| 2.3.2 提取条件优化 |
| 2.3.3 艾可清化学成分的鉴定 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 UPLC-ESI-QTOF-MS法分析大鼠口服复方中药艾可清后体内移行成分及代谢产物 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 仪器 |
| 3.1.2 材料与试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 艾可清供试液的制备 |
| 3.2.2 对照品溶液配制 |
| 3.2.3 动物实验 |
| 3.2.4 样品的前处理 |
| 3.2.5 液质条件 |
| 3.2.6 数据的处理和分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 给药剂量的优化 |
| 3.3.2 样品收集时间的优化 |
| 3.3.3 样品前处理方法的优化 |
| 3.3.4 艾可清在大鼠体内的原型成分的分析鉴定 |
| 3.3.5 艾可清代谢产物的鉴定 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 艾可清对细胞色素P450酶抑制作用的研究 |
| 4.1 体外人肝微粒体法测定艾可清对细胞色素P450酶抑制作用 |
| 4.1.1 实验材料与仪器 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.1.3 实验结果 |
| 4.1.4 讨论 |
| 4.2 WESTERN-BLOT法检测艾可清对大鼠肝脏CYP2D6,CYP3A4蛋白表达的影响 |
| 4.2.1 仪器和材料 |
| 4.2.2 试剂的配制 |
| 4.2.3 实验方法 |
| 4.2.4 实验结果 |
| 4.2.5 讨论 |
| 第五章 基于计算机虚拟筛选艾可清中CYP3A4和CYP2D6抑制作用的活性成分 |
| 5.1 艾可清中抑制CYP3A4和CYP2D6活性成分的虚拟筛选 |
| 5.1.1 材料与仪器 |
| 5.1.2 分子对接的计算 |
| 5.1.3 数据分析与作图 |
| 5.1.4 分子对接及MOLCAD分子表面计算结果 |
| 5.2 体外人肝微粒体法测定艾可清成分对CYP3A4和CYP2D6抑制作用 |
| 5.2.1 实验材料与仪器 |
| 5.2.2 实验方法 |
| 5.2.3 实验结果 |
| 5.3 讨论 |
| 第六章 艾可清对抗HIV药物克力芝在大鼠体内药代动力学的影响 |
| 6.1 仪器与实验材料 |
| 6.1.1 仪器 |
| 6.1.2 试剂与耗材 |
| 6.1.3 实验动物 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 液质条件 |
| 6.2.2 溶液配制 |
| 6.2.3 动物实验 |
| 6.2.4 样品前处理 |
| 6.2.5 方法学验证 |
| 6.2.6 药动学研究 |
| 6.3 实验结果 |
| 6.3.1 方法学考察 |
| 6.4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文 |
| 致谢 |
| 详细摘要 |
（3）黄连生物碱与UGT和OCTs相互作用及基于OCTs的交泰丸催眠作用机制初探（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一篇 UGT及其介导的药物相互作用 |
| 第二篇 OCTs及其介导的药物相互作用 |
| 第三篇 黄连与药物代谢酶和转运体相互作用研究进展 |
| 第四篇 交泰丸药理作用及其机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 6种黄连生物碱对鼠肝微粒体UGTs及UGT1A1活性影响的体内外研究 |
| 第一节 6种黄连生物碱对鼠肝微粒体UGTs及UGT1A1活性影响的体外研究 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 第二节 6种黄连生物碱对小鼠肝微粒体UGTs及UGT1A1活性影响的体内研究 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 本章实验小结 |
| 第二章 黄连生物碱与OCTs相互作用的体内实验研究 |
| 第一节 黄连生物碱连续腹腔注射对大鼠OCT1及OCT2活性的影响 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 第二节 黄连生物碱连续腹腔注射对大鼠各组织OCT表达的影响 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 第三章 交泰丸催眠作用与OCTs相关性研究 |
| 第一节 “心肾不交”失眠状态下OCTs活性的变化 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 第二节 交泰丸对正常及“心肾不交”失眠模型大鼠OCTs活性的影响 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结与讨论 |
| 本章实验小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（4）人源化乳腺癌耐药蛋白高表达BCRP-MDCKⅡ细胞模型的建立IMMH002（H002）临床前药代动力学研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 人源化乳腺癌耐药蛋白高表达BCRP-MDCK Ⅱ细胞模型的建立 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1. BCRP表达质粒的酶切鉴定 |
| 3.2. G418筛选浓度的确定 |
| 3.3. 病毒包装细胞BCRP-HEK-293T的建立 |
| 3.4. BCRP-MDCKⅡ细胞模型的建立与鉴定 |
| 4. 讨论 |
| 第二部分 IMMH002(H002)临床前药代动力学研究 |
| 第一节 生物样品中H002及其代谢产物的LC-MS/MS测定方法的建立 |
| 一.大鼠生物样品中H002及其代谢产物的LC-MS/MS测定方法的建立 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1. 方法专属性 |
| 3.2. 回归曲线和灵敏度 |
| 3.3. 精密度和准确度 |
| 3.4. 基质效应和回收率 |
| 3.5. 稳定性 |
| 3.6. 稀释稳定性 |
| 二.Beagle犬生物样品中H002及其代谢产物的LC-MS/MS测定方法的建立 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1. 方法专属性考察 |
| 3.2. 线性范围和标准曲线 |
| 3.3. 精密度和准确度 |
| 3.4. 基质效应和回收率 |
| 3.5. 稳定性 |
| 3.6. 全血样品稀释稳定性 |
| 第二节 H002在大鼠体内的药代动力学研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1. 大鼠口服H002的全血药代动力学 |
| 3.2. 大鼠静脉注射H002后的全血药代动力学 |
| 3.3. 大鼠口服H002后在主要脏器和组织中的分布 |
| 3.4. 大鼠口服H002后经粪便、尿液和胆汁的排泄 |
| 3.5. H002与大鼠、犬、猴及人血浆蛋白的结合 |
| 4. 讨论 |
| 第三节 H002在BEAGLE犬体内的药代动力学研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1. Beagle犬口服H002的全血药代动力学 |
| 3.2. Beagle犬静脉注射H002后的全血药代动力学 |
| 3.3. Beagle犬多次口服H002后的药代动力学研究 |
| 3.4. Beagle犬口服H002后自粪便、尿液的排泄 |
| 4. 讨论 |
| 第四节 H002的生物转化研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1. H002在体内外样品中的代谢产物鉴定 |
| 3.1.1. 大鼠全血、粪、尿、胆汁中代谢产物鉴定 |
| 3.1.2. 犬全血、粪、尿中代谢产物鉴定 |
| 3.1.3. 大鼠、犬、猴和人肝微粒体中代谢物鉴定 |
| 3.2. H002的体外稳定性研究 |
| 3.2.1. H002在人工胃肠液、肠道菌群、大鼠血浆中的稳定性 |
| 3.2.2. H002在大鼠、犬、猴、人肝微粒体中的代谢稳定性 |
| 3.2.3. H002在大鼠、犬、猴和人全血中的代谢稳定性 |
| 3.2.4. 小结 |
| 3.3. 磷酸化产物H002-P与羟化产物H002-M的体内生成场所鉴定 |
| 3.4. 参与H002-P生成的药物代谢酶鉴定 |
| 3.4.1. H002-P在红细胞中的生成 |
| 3.4.2. SPHK抑制剂对红细胞中H002-P生成的影响 |
| 3.4.3. 小结 |
| 3.5. 参与H002-M生成的药物代谢酶鉴定 |
| 3.5.1. H002在大鼠、犬、猴和人肝微粒体中的氧化代谢速率 |
| 3.5.2. 参与大鼠、犬、猴、人肝微粒体中H002-M和H002-M1生成的CYPs鉴定 |
| 3.5.3. 应用CYPs单抗鉴定人肝微粒体中参与H002代谢的CYPs |
| 3.5.4. 应用人源化重组酶鉴定参与H002-M,H002-M1生成的CYPs |
| 3.5.5. 小结 |
| 4. 讨论 |
| 第五节 H002及其代谢产物对药物代谢酶的抑制/诱导作用 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1. H002对大鼠/犬/猴/人肝微粒体CYP450同功酶的体外抑制作用 |
| 3.2. H002多次口服给药后对大鼠肝脏药物代谢酶的影响 |
| 4. 讨论 |
| 第六节 H002在CACO-2和MDR1-MDCKⅡ细胞中的转运 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1. H002经Caco-2和MDR1-MDCKⅡ细胞的转运 |
| 3.2. H002对P-gp的抑制 |
| 4. 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（5）黄连素对HepG2细胞CYP3A4和P-gp的影响和作用机制研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
（6）表小檗碱体内外生物代谢反应研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 文献综述 |
| 第一部分 黄连研究进展 |
| 第二部分 表小檗碱研究进展 |
| 第三部分 药物代谢研究方法 |
| 第四部分 代谢酶介导的药物相互作用 |
| 前言 |
| 第一部分 LC-MS/MS鉴定表小檗碱体内体外主要代谢产物 |
| 第一章 灌胃和静注表小檗碱后大鼠体内代谢产物的比较 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二章 表小檗碱体外肝微粒体Ⅰ相代谢产物分析 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三章 表小檗碱体外肝微粒体Ⅱ相代谢产物分析 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第四章 表小檗碱在肠菌培养液中代谢产物分析 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 表小檗碱CYP450代谢酶亚型的鉴定 |
| 第一章 表小檗碱在HLM和RLM中LC-MS测定方法的建立 |
| 材料与仪器 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二章 化学抑制剂法鉴定表小檗碱I相代谢酶 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三章 人重组酶试验鉴定表小檗碱Ⅰ相代谢酶 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 表小檗碱对大鼠P450酶活性影响的体内外研究 |
| 第一章 表小檗碱灌胃诱导对大鼠P450酶活性的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二章 体外表小檗碱对大鼠CYP450酶活性的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 讨论与结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）黄连素在体内外对CYP 3A和P-糖蛋白的影响及其作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第1章 前言 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 CYP3A和 P-gp 对 CsA的代谢和转运 |
| 1.3 PXR等核受体对 CYP3A和 P-gp 的调控作用 |
| 1.4 本课题的实验设计 |
| 第2章 黄连素对大鼠体内 CYP3A活性影响的研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 主要仪器与设备 |
| 2.1.2 主要药品与试剂 |
| 2.1.3 实验动物 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 溶液的配制 |
| 2.2.2 MDZ 及其代谢产物 1ˊ-OH-MDZ HPLC 分析方法建立 |
| 2.2.3 MDZ 及其代谢产物 1ˊ-OH-MDZ HPLC 分析方法评价 |
| 2.2.4 测定 BBR 对大鼠 MDZ 代谢的药代动力学参数的影响 |
| 2.2.5 统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 MDZ 及其代谢产物 1ˊ-OH-MDZ HPLC 分析方法评价结果 |
| 2.3.2 BBR 对大鼠 MDZ 代谢的药代动力学参数的影响及比较 |
| 2.4 小结与讨论 |
| 第3章 黄连素对大鼠体内 P-糖蛋白活性影响的研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 主要仪器与设备 |
| 3.1.2 主要药品与试剂 |
| 3.1.3 实验动物 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 溶液的配制 |
| 3.2.2 大鼠血浆中 Rh123 HPLC 分析方法建立 |
| 3.2.3 大鼠血浆中 Rh123 HPLC 分析方法评价 |
| 3.2.4 测定 BBR 对大鼠 Rh123代谢的药代动力学参数的影响 |
| 3.2.5 统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 大鼠血浆中 Rh123 HPLC 分析方法评价结果 |
| 3.3.2 BBR 对大鼠 Rh123代谢的药代动力学参数的影响及比较 |
| 3.4 小结与讨论 |
| 第4章 黄连素对 HepG2 细胞 CYP3A4和 P-糖蛋白的影响和作用机制研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 主要仪器与设备 |
| 4.1.2 主要药品与试剂 |
| 4.1.3 人肝癌细胞 HepG234 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 主要溶液配置 |
| 4.2.2 HepG2 细胞复苏传代冻存 |
| 4.2.3 HepG2 细胞生长曲线建立 |
| 4.2.4 BBR 对 HepG2 细胞毒性试验 |
| 4.2.5 分组及给药 |
| 4.2.6 Western Blotting 检测目的基因蛋白的表达 |
| 4.2.7 RTQ-PCR检测目的基因以及上游调控基因 mRNA水平的表达·38 |
| 4.2.8 统计分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 HepG2 细胞生长曲线 |
| 4.3.2 BBR 对 HepG2 细胞毒性试验结果 |
| 4.3.3 蛋白浓度标准曲线 |
| 4.3.4 BBR 对 HepG2 细胞 CYP3A4和 P-gp 蛋白表达水平的影响 |
| 4.3.5 BBR 对 HepG2 细胞 CYP3A4 和 MDR1 及上游调控基因 mRNA表达水平的影响 |
| 4.4 小结与讨论 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（8）荷叶代谢性药物相互作用及体内成分研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语表 |
| 第一章 前言 |
| 第一节 代谢性药物相互作用的研究进展 |
| 1. P450酶的命名 |
| 2. 参与药物代谢的主要P450酶亚型 |
| 3. 代谢性药物相互作用及其危害 |
| 4. 代谢性药物相互作用的研究方法 |
| 5. 细胞色素P450酶的抑制和诱导作用研究 |
| 6. 预测药物引起相互作用的能力 |
| 7. 小结 |
| 第二节 荷叶的研究进展 |
| 1. 荷叶的化学成分 |
| 2. 荷叶的药理活性 |
| 3. 荷叶的药代动力学研究 |
| 4. 荷叶的应用 |
| 5. 小结 |
| 6. 研究目的和主要内容 |
| 参考文献 |
| 第二章 常用中药对P450酶活性影响的研究 |
| 1. 材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 2. 方法 |
| 2.1 溶液配制 |
| 2.2 肝微粒体酶体外孵育反应体系 |
| 2.3 代谢产物的LC-MS/MS分析方法 |
| 2.4 方法学验证 |
| 2.5 中药提取物对对P450酶活性影响 |
| 2.6 数据分析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 方法学特异性 |
| 3.2 线性范围与LLOQ和LOD |
| 3.3 精密度和准确度 |
| 3.4 稳定性 |
| 3.5 基质效应 |
| 3.6 阳性抑制剂对p450酶活性的影响 |
| 3.7 中药提取物对p450酶活性的影响 |
| 4. 讨论 |
| 5. 本章小结 |
| 第三章 荷叶潜在药物相互作用研究 |
| 第一节：荷叶化学成分分析 |
| 1. 材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 2. 方法 |
| 2.1 荷叶提取物的制备 |
| 2.2 荷叶化学成分的分析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 荷叶总黄酮中的成分分析 |
| 3.2 荷叶总生物碱中的成分分析 |
| 4. 讨论 |
| 第二节：荷叶活性部位及其主要化合物对P450酶的影响 |
| 1. 材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 2. 方法 |
| 2.1 药物配制 |
| 2.2 人肝微粒体外孵育化反应 |
| 2.3 荷叶黄酮与生物碱对P450酶活性的影响 |
| 2.4 生物碱化合物对CYP2D6的抑制机制研究 |
| 2.5 生物碱化合物对CYP2D6的不可逆抑制研究 |
| 2.6 数据分析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 总黄酮及其化合物对P450酶活性的抑制作用 |
| 3.2 总生物碱及其化合物对P450酶活性的抑制 |
| 3.3 NF、N-NF和HMA对CYP2D6的抑制作用 |
| 3.4 NF、N-NF和HMA对CYP2D6抑制机制研究 |
| 3.5 NF、N-NF和HMA对CYP2D6的不可逆抑制研究 |
| 4. 讨论 |
| 第三节：荷叶对P-糖蛋白活性的影响 |
| 1. 材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 2. 方法 |
| 2.1 细胞培养液的配制 |
| 2.2 药品溶液配制 |
| 2.3 细胞复苏 |
| 2.4 细胞培养和传代 |
| 2.5 细胞毒性实验 |
| 2.6 荧光淬灭实验 |
| 2.7 LLE、TF和TA对P-gp功能的影响 |
| 2.8 数据处理 |
| 3. 结果 |
| 3.1 不同浓度LLE、TF和TA条件下对细胞存活率的影响 |
| 3.2 荧光淬灭实验 |
| 3.3 不同浓度药物对P-gp功能的影响 |
| 4. 讨论 |
| 5. 本章小结 |
| 第四章 荷叶总生物碱对大鼠体内CYP2D6酶活性的影响 |
| 第一节 荷叶总生物碱对大鼠CYP2D6酶抑制作用的体内研究 |
| 1. 材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 动物 |
| 2. 方法 |
| 2.1 药物配制 |
| 2.2 标准血浆样品和质控样品的配制 |
| 2.3 血浆样品处理 |
| 2.4 给药与样品采集及制备 |
| 2.5 LC-MS/MS条件 |
| 2.6 方法学验证 |
| 2.7 数据处理 |
| 3. 结果 |
| 3.1 方法专属性 |
| 3.2 线性范围与最低检测限和最低定量限 |
| 3.3 精密度和准确度 |
| 3.4 回收率 |
| 3.5 基质效应 |
| 3.6 稳定性 |
| 3.7 荷叶总生物碱对右菲烷药动学的影响 |
| 3.8 荷叶总生物碱对OHMT药动学的影响 |
| 4. 讨论 |
| 第二节 荷叶生物碱对大鼠体内CYP2D6酶蛋白表达的影响 |
| 1. 材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 动物 |
| 2. 方法 |
| 2.1 动物给药 |
| 2.2 生物样品的采集 |
| 2.3 蛋白提取 |
| 2.4 蛋白含量测定 |
| 2.5 蛋白样品制备 |
| 2.6 凝胶的制备 |
| 2.7 上样和电泳 |
| 2.8 转膜与封闭 |
| 2.9 杂交及鉴定 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 本章小结 |
| 第五章 大鼠体内荷叶成分的分析 |
| 第一节 荷叶主要化学成分在大鼠体内的分析 |
| 1. 材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 动物 |
| 2. 方法 |
| 2.1 药物配制 |
| 2.2 生物样品的采集及制备 |
| 2.3 体内成分的鉴定 |
| 2.3.1 体内荷叶黄酮及其代谢产物的鉴定 |
| 2.3.2 体内荷叶生物碱及其代谢产物的鉴定 |
| 3. 结果 |
| 3.1 大鼠体内黄酮及其代谢产物 |
| 3.2 大鼠体内生物碱成分鉴定 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 体内黄酮成分的分析 |
| 4.2 体内生物碱成分的分析 |
| 第二节 荷叶生物碱在大鼠体内的组织分布 |
| 1. 材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 动物 |
| 2. 方法 |
| 2.1 药物配制 |
| 2.2 标准生物样品的配制 |
| 2.3 给药和生物样品的采集 |
| 2.4 生物样品的处理 |
| 2.5 LC-MS/MS分析方法 |
| 2.6 方法学考察 |
| 3. 结果 |
| 3.1 方法学特异性 |
| 3.2 线性范围与最低检测限和定量限 |
| 3.3 精密度、准确度和回收率 |
| 3.4 基质效应 |
| 3.5 稳定性 |
| 3.6 生物碱成分在大鼠组织中分布 |
| 4. 讨论 |
| 5. 本章小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 1. 本文的主要结果 |
| 2. 本文的创新点 |
| 3. 研究展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
（9）中药、中药成分与常见食物对他克莫司血药浓度的影响（论文提纲范文）
| 1 影响他克莫司血药浓度的中药及中药成分 |
| 1.1 五酯胶囊 |
| 1.2 黄连 (Berberine) |
| 1.3 大黄 (Rhubarb) |
| 1.4 复方甘草酸苷 (Glycyrrhizin) |
| 1.5 桑黄 (Phellinus igniarius) |
| 1.6 贯叶连翘 (St.John's wort、Hypericum perforatum) |
| 2 影响他克莫司血药浓度的常见食物 |
| 2.1 葡萄柚 (Grapefruit) |
| 2.2 茶 (Tea) |
| 2.3 其他 |
| 3 小结 |
（10）氟苯尼考与聚醚类离子载体抗球虫药在肉鸡体内的相互作用初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号及缩略语 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 氟苯尼考 |
| 1.1 抗菌机理及抗菌活性 |
| 1.2 药动学 |
| 1.3 新剂型 |
| 1.4 临床应用 |
| 1.5 毒性 |
| 2 聚醚类离子载体抗球虫药 |
| 2.1 作用方式独特,抗球虫谱广 |
| 2.2 耐药性形成缓慢,有交叉耐药性 |
| 2.3 安全范围窄,易中毒 |
| 2.4 对药物代谢酶的影响 |
| 3 药物相互作用 |
| 3.1 基于CYP450酶及其受体的药物相互作用 |
| 3.2 基于P-糖蛋白的药物相互作用 |
| 4 CYP450及其受体 |
| 4.1 CYP450的命名 |
| 4.2 CYP450的组成 |
| 4.3 CYP450的分布 |
| 4.4 CYP450的催化机制 |
| 4.5 CYP450的功能 |
| 4.6 CYP450的亚型 |
| 4.7 CYP450的影响因素 |
| 4.9 CYP450的诱导和抑制 |
| 4.10 CYP450受体 |
| 5 P-糖蛋白 |
| 5.1 研究简史 |
| 5.2 结构 |
| 5.3 分布 |
| 5.4 作用机制 |
| 5.5 P-gp生理功能 |
| 5.6 P-gp在药代动力学中的作用 |
| 5.7 P-gp底物 |
| 5.8 P-gp的抑制剂和诱导剂 |
| 参考文献 |
| 第二章 细胞色素P450 1A、3A以及P-糖蛋白对氟苯尼考在肉鸡体内代谢的作用 |
| 摘要 |
| 第一节 肉鸡血浆中氟苯尼考高效液相色谱测定方法的建立 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 主要药物和试剂 |
| 1.2 主要试验仪器 |
| 1.3 试验动物 |
| 1.4 血样采集 |
| 1.5 样品处理方法 |
| 1.6 药物配制 |
| 1.7 氟苯尼考HPLC条件 |
| 1.8 氟苯尼考标准曲线的制备 |
| 1.9 血浆中氟苯尼考的专属性考察 |
| 1.10 血浆中氟苯尼考测定的准确度 |
| 1.11 血浆中氟苯尼考测定的精密度 |
| 1.12 血浆中氟苯尼考的提取回收率 |
| 1.13 血浆中氟苯尼考的最低检测限和最低定量限 |
| 1.14 数据统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 方法的专属性 |
| 2.2 标准曲线方程及最低检测限、最低定量限 |
| 2.3 准确度、精密度和提取回收率 |
| 3 讨论 |
| 第二节 细胞色素P450 1A、3A以及P-糖蛋白对氟苯尼考在肉鸡体内代谢的作用 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 主要药物和试剂 |
| 1.2 主要试验仪器 |
| 1.3 试验动物 |
| 1.4 给药方案 |
| 1.5 血样采集 |
| 1.6 样品处理方法 |
| 1.7 药物配制 |
| 1.8 氟苯尼考标准曲线的制备 |
| 1.9 氟苯尼考HPLC条件 |
| 1.10 药动学统计分析 |
| 1.11 数据统计分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 第三章 聚醚类离子载体抗球虫药对氟苯尼考在肉鸡体内药动学的影响 |
| 摘要 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 主要药物和试剂 |
| 1.2 主要试验仪器 |
| 1.3 试验动物 |
| 1.4 给药方案 |
| 1.5 血样采集 |
| 1.6 样品处理方法 |
| 1.7 药物配制 |
| 1.8 氟苯尼考标准曲线的制备 |
| 1.9 氟苯尼考HPLC条件 |
| 1.10 药动学统计分析 |
| 1.11 数据统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 对静注给药氟苯尼考的药动学影响 |
| 2.2 对口服给药氟苯尼考的药动学影响 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 第四章 聚醚类离子载体抗球虫药对肉鸡肝脏和小肠氟苯尼考代谢相关基因mPNA表达水平的影响 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验药物与试剂 |
| 1.2 试验仪器 |
| 1.3 试验动物与给药方案 |
| 1.4 RNA的提取与Real-time PCR分析 |
| 1.5 数据的分析与统计 |
| 2 结果 |
| 2.1 RNA的完整性 |
| 2.2 基因组污染判断 |
| 2.3 三种聚醚类离子载体抗球虫药对肉鸡肝和小肠CYP3A37、CXR和MDR1mRNA表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五章 聚醚类离子载体抗球虫药对肉鸡肝脏和小肠CYP3A蛋白表达的影响 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验药物与试剂 |
| 1.2 试验仪器 |
| 1.3 试验动物与给药方案 |
| 1.4 肝微粒体的分离与CYP450和b_5含量的测定 |
| 1.5 蛋白检测的方法 |
| 1.6 数据分析与统计 |
| 2 结果 |
| 2.1 微粒体蛋白浓度测定标准曲线及双光束紫外-可见扫描 |
| 2.2 平均增重、相对肝重及微粒体蛋白以及细胞色素P450和b_5含量 |
| 2.3 盐霉素、莫能菌素和马杜霉素对肉鸡肝脏和小肠CYP 3A蛋白表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 全文结论 |
| 创新点 |
| 在读期间待发表或完成的学术论文 |
| 致谢 |
四、盐酸小檗碱及其与环孢素A合用对大鼠肝P450同工酶及其多药耐药基因的的影响（论文参考文献）
- [1]基于核受体-CYP450/OATPs通路研究小檗碱对调血脂药代谢和转运的调控作用及分子学机制[D]. 刘名义. 南昌大学, 2020(08)
- [2]基于液相色谱质谱联用技术对复方中药艾可清化学成分及其调节细胞色素P450酶作用的研究[D]. 卢元媛. 广州中医药大学, 2018(03)
- [3]黄连生物碱与UGT和OCTs相互作用及基于OCTs的交泰丸催眠作用机制初探[D]. 赵园园. 北京中医药大学, 2016(04)
- [4]人源化乳腺癌耐药蛋白高表达BCRP-MDCKⅡ细胞模型的建立IMMH002（H002）临床前药代动力学研究[D]. 米家琦. 北京协和医学院, 2016(01)
- [5]黄连素对HepG2细胞CYP3A4和P-gp的影响和作用机制研究[J]. 唐霞,辛华雯,李维亮,欧阳萌. 中国临床药理学与治疗学, 2015(01)
- [6]表小檗碱体内外生物代谢反应研究[D]. 叶静. 北京中医药大学, 2014(04)
- [7]黄连素在体内外对CYP 3A和P-糖蛋白的影响及其作用机制研究[D]. 唐霞. 南昌大学, 2014(01)
- [8]荷叶代谢性药物相互作用及体内成分研究[D]. 叶林虎. 北京协和医学院, 2014(11)
- [9]中药、中药成分与常见食物对他克莫司血药浓度的影响[J]. 袁梅,张弋. 药品评价, 2013(16)
- [10]氟苯尼考与聚醚类离子载体抗球虫药在肉鸡体内的相互作用初步研究[D]. 王国永. 南京农业大学, 2012(12)