一、新城疫和肾传支并发的诊治(论文文献综述)
李真真[1](2020)在《磁性介孔硅纳米探针的构建及其在新城疫病毒检测中的研究》文中提出新城疫(Newcastle disease,ND)也称为亚洲鸡瘟或伪鸡瘟,是由新城疫病毒(Newcastle disease Virus,NDV)引起的一种急性、热性和高度接触性禽传染病。新城疫主要特征为呼吸困难、神经症状及浆膜和黏膜出血。近年来,检测NDV的方法不断更新,但规模化养殖模式需要更灵敏或更快捷的检测技术检测NDV的早期感染,以便更好地防控NDV。传统的NDV检测方法主要包括病原的分离与培养鉴定、PCR(Polymerase chain reaction)、LAMP(Loop-mediated Isothermal Amplification)及 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)等技术。这些检测技术各有其优缺点:病原学诊断方法为检测NDV的金标准,但检测时间长、成本高。PCR技术灵敏度高,但需要对样品进行核酸提取,对实验人员技术要求高,样品易污染。LAMP是一种等温扩增技术,但其扩增效率低,灵敏度与PCR相差甚远,还没有被广泛认可。ELISA是用酶联抗体与底物放大信号的技术,灵敏度较高,易于进行大批量样本检测,但由于其需要几步孵育,检测时间比较长,但仍有提升空间,非特异性吸附难以避免导致重复性差,在实验室检测抗原时需要多次优化条件。磁性介孔二氧化硅纳米颗粒(Magnetic mesoporous silica nanoparticles,M-MSNs)具有许多突出的优点,如大的孔隙体积(高达2.5 cm3/g)、高比表面积(>1000 m2/g)、可调控孔径大小、可功能化、高的化学和生物稳定性以及良好的生物兼容性等,被广泛应用于生物检测、传感及载药体系。本研究,利用介孔二氧化硅的可装载性及可修饰性,制备了一种磁性介孔二氧化硅纳米免疫探针,替代ELISA技术中的一抗孵育及酶标二抗孵育两步试验步骤,构建了一种基于具有载酶磁性介孔二氧化硅纳米免疫探针。简述如下:选择粒径约60 nm、孔径约5 nm的磁性介孔二氧化硅纳米颗粒,将分子量为44 kDa的过氧化物酶(Peroxidase,POD)通过扩散作用使其进入M-MSNs的介孔中,随后在M-MSNs表面包裹一层阳离子聚合物聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)使POD分子驻留在M-MSNs孔内,无法渗出。最后利用DNA修饰抗体(负电性的DNA修饰抗体从而增加抗体的负电性)与包覆了 M-MSNs表面的PEI通过静电吸附制得M-MSNs纳米免疫探针。DNA功能化的抗体是通过点击化学将单链DNA与NDV抗体以“一对一”形式耦连。使用SDS-PAGE电泳、热重分析、DLS分析及透射电镜等方法对纳米探针进行分析验证,结果表明:此载酶介孔二氧化硅纳米免疫探针的介孔中成功装载了约400个POD分子,并且该纳米探针成功的使用PEI对介孔结构进行“包封”防止了 POD的渗出。通过SDS-PAGE以及纳米探针表面的电位变化情况可以得知成功的将DNA功能化的抗体修饰在纳米探针表面,且每个纳米颗粒表面约有200个抗体分子。随后将探针存放在4℃中两个月,考察探针中的酶活稳定性结果表明:磁性介孔二氧化硅纳米探针POD的活性保持稳定,探针无酶泄漏。这表明,载酶介孔二氧化硅免疫纳米探针构建成功。我们采用本研究构建的磁性介孔二氧化硅纳米探针检测经纯化的NDV样品,结果显示该探针具有特异性,检测灵敏度达到了 102 PFU/100 μL,同时使用传统的ELISA方法检测平行实验,对比灵敏度和检测时间,在检测体系构建过程中,利用PCR方法验证探针法检测结果的准确性和一致性,通过透射电子显微镜(Transmission electron microscope,TEM)表征验证载酶介孔二氧化硅纳米免疫探针捕获病毒的结果。最后使用本文构建的磁性介孔二氧化硅纳米探针ELISA法检测了感染NDV的禽的泄殖腔棉拭子样品;通过已建立的检测体系进行测定,同时采用传统ELISA方法验证结果,结果发现本研究中构建的载酶介孔硅免疫探针的法的灵敏度比传统ELISA提高了 10倍,同时与ELISA相比检测时间缩短,证明该方法可用于实际检测。综上所述,该研究成功构建了一种基于载酶介孔二氧化硅纳米免疫探针的新型检测技术,此技术比传统的ELISA技术灵敏10倍,对比传统ELISA法检测时间缩短。此技术有望替代传统的ELISA方法,被广泛应用于各个生物实验室和检测中心。
王慧瑾,王常国[2](2009)在《鸡传支与大肠杆菌、霉形体混合感染的诊治》文中研究指明目前肉鸡市场出现肉鸡饲养到20~30日龄时的由于疾病的原因,使用大肠杆菌药物治疗一直不理想,不得不提前出栏,给养殖户造成极大的损失。昌盛药业集团公司对此进行了长期市场跟踪调查,主要以山东为基
黄占京,张红权,杨新宇,王贵军[3](2006)在《一例育肥鸽肾传支并发支原体病和大肠杆菌病的诊治》文中研究指明 1 发病情况河南淇县易普森鸽业有限公司,现有种鸽存栏3万套,每天出雏1000只,通常本鸽场的乳鸽在全程育肥中伤亡率为12%左右。2006年11月26日开始,育肥鸽出现大批死亡,每个批次,每个日龄都有伤亡。从2日龄开始死亡,10日龄伤亡率达到30%,曾多方求医,用多种药物治疗均无效,经人介绍到河南鹤壁丰达畜牧中心(河南明磊动物药业有限公司技术服务处)求诊。2 临床症状乳鸽精神不振,排白色水样便,自然哺乳的乳鸽不发病,主要是人工哺乳的乳鸽发病率高。3 剖检变化取1~10日龄乳鸽,每批各3只进行剖检,其剖检病变为:气管有黏液,气管下1/3处及支气管有血性分泌物,气囊
窦小波[4](2004)在《新城疫和肾传支并发的诊治》文中研究说明 2004年12月6日,河北省滦县一养殖户饲养的2500只23日龄肉仔鸡发病,发病初鸡只零星拉稀,尚无明显病变,后来有呼吸道症状,拉黄白绿粪,每天死亡5~6只鸡。一、临床症状鸡群发病时,表现呼吸困难,张口伸颈,流泪、呼噜、甩鼻子、有严重的咳嗽,口腔内充满黏液,不断吞咽和摇头,企图把口腔的黏液甩出,口渴贪饮,食欲废绝,精神沉郁,怕冷扎堆,严重下痢,拉黄白绿粪。二、剖检变化剖检5只病死鸡,病变大致相同。机体
二、新城疫和肾传支并发的诊治(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、新城疫和肾传支并发的诊治(论文提纲范文)
(1)磁性介孔硅纳米探针的构建及其在新城疫病毒检测中的研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
缩略语 |
第一部分 文献综述 |
1、磁性介孔二氧化硅纳米颗粒的研究背景 |
1.1 概述 |
1.2 M-MSNs在检测中的应用 |
2、NDV的研究背景 |
2.1 NDV的概述 |
2.2 NDV检测方法的研究进展 |
3、研究目的与意义 |
第二部分 研究内容 |
第一章 M-MSN纳米探针的制备与表征 |
1、实验材料与设备仪器 |
1.1 主要试剂和耗材 |
1.2 主要仪器 |
2、实验方法 |
2.1 M-MSN材料表征方法 |
2.2 POD的装载方法及表征方法 |
2.3 聚乙烯亚胺(PEI)包封POD/M-MSN的方法 |
2.4 抗体(Ab)与单链核酸(ssDNA)的合成方法 |
2.5 POD/M-MSN/PEI与Ab-ssDNA的表征方法 |
3、实验结果与讨论 |
3.1 M-MSN材料表征 |
3.2 POD装载的结果分析 |
3.3 PEI包裹POD/M-MSN纳米颗粒的表征结果分析 |
3.4 抗体连结单链DNA的紫外可见光谱和凝胶电泳表征结果 |
3.5 NDVAb、ssDNA、Ab-ssDNA的质谱分析结果 |
3.6 POD/M-MSN/PEI/Ab-ssDNA的蛋白电泳结果 |
3.7 探针中POD活性的测定结果 |
4、本章小结 |
第二章 POD/M-MSN/PEI/Ab-ssDNA探针识别NDV |
1、实验材料与设备仪器 |
1.1 细胞系及菌株 |
1.2 主要试剂和耗材 |
1.3 主要仪器 |
2、实验方法 |
2.1 病毒的培养与纯化方法 |
2.2 NDV的鉴定方法 |
2.2.1 PCR鉴定NDV的方法 |
2.2.2 NDV病毒的TEM形貌表征方法 |
2.3 NDV的滴度测定方法 |
2.4 POD/M-MSN/PEI/Ab-ssDNA探针结合NDV方法 |
2.5 POD/M-MSN/PEI/Ab-ssDNA探针结合NDV的TEM观察方法 |
2.6 POD/M-MSN/PEI/Ab-ssDNA探针的特异性表征方法 |
2.7 探针法与传统ELISA法的对比实验 |
2.8 应用POD/M-MSN/PEI/Ab-ssDNA探针检测实际NDV样品 |
2.8.1 NDV动物模型的建立 |
2.8.2 POD/M-MSN/PEI/Ab-ssDNA探针检测NDV |
3、实验结果与讨论 |
3.1 NDV的鉴定与形貌观察 |
3.2 POD/M-MSN/PEI/Ab-ssDNA探针结合NDV的PCR结果 |
3.3 POD/M-MSN/PEI/Ab-ssDNA探针结合NDV的TEM观察 |
3.4 POD/M-MSN/PEI/Ab-ssDNA探针的特异性 |
3.5 探针法与传统ELISA法的对比实验 |
3.6 探针检测实际样品中NDV的TEM表征 |
3.7 ELISA方法检测真实样品中的NDV |
4、本章小结 |
全文总结 |
参考文献 |
攻读学位期间发表的学术论文及发明专利目录 |
致谢 |
(2)鸡传支与大肠杆菌、霉形体混合感染的诊治(论文提纲范文)
(一) 发病情况 |
(二) 发病原因及病理分析 |
(三) 防治措施 |
(四) 防治体会 |
四、新城疫和肾传支并发的诊治(论文参考文献)
- [1]磁性介孔硅纳米探针的构建及其在新城疫病毒检测中的研究[D]. 李真真. 扬州大学, 2020(01)
- [2]鸡传支与大肠杆菌、霉形体混合感染的诊治[J]. 王慧瑾,王常国. 兽医导刊, 2009(08)
- [3]一例育肥鸽肾传支并发支原体病和大肠杆菌病的诊治[J]. 黄占京,张红权,杨新宇,王贵军. 北方牧业, 2006(24)
- [4]新城疫和肾传支并发的诊治[J]. 窦小波. 北方牧业, 2004(24)