一、肝硬化患者血清MMP-2和TIMP-1的测定及临床意义（论文文献综述）
田园硕[1]（2021）在《活血软坚扶正方干预乙肝后肝纤维化的临床疗效研究及机制探索》文中指出研究目的:本研究通过网络药理学方法筛选活血软坚扶正方治疗乙肝后肝纤维化的作用靶点、信号通路;通过临床研究观察活血软坚扶正方对气虚血瘀型乙肝后肝纤维化患者的有效性和安全性,并通过对人转化生长因子β 1、金属蛋白酶抑制因子1浓度的测定,探讨活血软坚扶正方干预本病的可能疗效机制,为临床应用提供科学依据。研究方法:1.网络药理学研究:采用 TCMSP、TCMID、SwissTargetPrediction、PubChem、DisGeNET、OMIM、GeneCards等数据库筛选活血软坚扶正方活性成分及与乙肝后肝纤维化相关靶基因,采用Cytoscape软件构建“方药-成分-靶点-疾病”网络图,采用String数据库构建蛋白质相互作用网络,采用Metascape对活血软坚扶正方治疗乙肝后肝纤维化关键作用靶点进行GO富集分析和KEGG富集分析,获取活血软坚扶正方治疗乙肝后肝纤维化的主要生物过程和信号通路。2.临床试验研究:采用随机数分组方法,将符合纳入标准、不符合排除标准的63例气虚血瘀型乙肝后肝纤维化患者随机分为中药组和对照组,中药组33例（后脱落3例）,对照组30例。在抗病毒治疗的基础上,中药组予活血软坚扶正方,对照组予复方鳖甲软肝片,连续干预6个月。两组均于治疗前后记录中医证候评分、检测肝弹性值,检查肝功能、血清蛋白、凝血功能、肝纤四项、人转化生长因子β1、血清金属蛋白酶抑制因子1,计算无创肝纤维化指标（APRI、FIB-4）,并在治疗前、治疗3个月、治疗6个月时检测血、尿、便常规等安全性指标。观察比较两组患者治疗前后的肝弹性值、肝纤四项、APRI、FIB-4、肝功能、血清蛋白、凝血功能、人转化生长因子β1、血清金属蛋白酶抑制因子1、中医证候评分以及相关安全性指标的变化,并统计分析。研究结果:1.网络药理学研究结果研究最终共筛选获取33个活性成分,129个作用靶点与活血软坚扶正方治疗乙肝后肝纤维化密切相关。活血软坚扶正治疗乙肝后肝纤维化主要涉及生物过程、细胞组成、分子功能等多层次功能,通过调节PI3K-Akt信号通路、mTOR信号通路、phospholipase D信号通路、HIF-1α信号通路、FoxO信号通路、JAK-STAT信号通路、IL-17信号通路、MAPK信号通路、AMPK信号通路、TNF信号通路、PPARγ信号通路等多个通路等来发挥治疗作用。2.临床试验研究结果（1）影像学肝纤维化指标:中药组和对照组组内对比均能够显着降低患者的肝弹性值（P<0.01）,且中药组疗效优于对照组（P<0.05）。（2）血清学肝纤维化指标:中药组能显着降低血清中CIV的水平（P<0.01）,对照组治疗前后CIV无明显差异（3）无创肝纤维化指标:中药组和对照组组内对比均能降低FIB-4的水平（P<0.05）,且中药组疗效优于对照组（P<0.05）;中药组可显着降低APRI的水平（P<0.01）,对照组治疗前后APRI无显着差异。（4）肝功能相关指标:中药组和对照组组内对比均能显着降低血清中TBIL的水平（P<0.05）,且两组组间无明显差异;中药组可显着降低AST的水平（P<0.01）,对照组治疗前后AST无显着差异。（5）血清蛋白相关指标:两组治疗前后组内对比ALB和GLO水平无显着差异。（6）凝血功能相关指标:中药组可显着升高的PTA和PLT的水平（P<0.01）,对照组无明显PTA和PLT升高。（7）TIMP-1和TGF-β1:中药组可降低血清中TIMP-1的浓度（P>0.05）,对照组能够降低血清中TGF-β1的浓度（P>0.05）,但TIMP-1和TGF-β1组内、组间差异均无统计学意义。（8）中医证候指标:中药组和对照组均能明显降低患者的中医证候评分（P<0.01）,且中药组疗效优于对照组（P<0.01）。结论:1.网络药理学研究提示:活血软坚扶正方改善乙肝后肝纤维化具有多层次、多系统和整体干预的特点。2.通过影像学、血清学、无创肝纤维化指标三种方式的比较,发现:活血软坚扶正方可有效抑制乙肝后肝纤维化的形成。3.活血软坚扶正方能够显着改善气虚血瘀型乙肝后肝纤维化患者的症状、减轻肝脏炎症,调节凝血功能。4.活血软坚扶正方干预血清中金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）和人转化生长因子β1（TGF-β1）的作用不显着,药物对其可能存在一定抑制作用,但是否是主要干预因子尚存疑,需进一步的研究进行验证。
张嘉鑫[2]（2021）在《基于弹性蛋白合成及降解探讨益肝消积方干预早期肝硬化的机制研究》文中研究表明背景:肝硬化（Hepatic cirrhosis,HC）为肝脏受各种损伤因素侵袭,出现以肝纤维化、假小叶为特点的疾病,由乙肝病毒、丙肝病毒、酒精等一种或多种病因引起。5年生存率为14-35%,已成为全球成人死亡率第14高的病因。目前的治疗主要集中在病因与并发症防治方面,肝硬化本身能否被逆转一直存在争议。国内外学者认为,肝硬化实现逆转必然涉及以下三方面环节:细胞外基质（extracellular matrix,ECM）降解,肝细胞再生及肝小叶结构重建。其中,ECM降解为重要前提。近年研究提示,弹性蛋白合成、降解及其交联阻碍了 ECM降解,进而影响逆转过程。弹性蛋白是由肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）分泌的,为ECM重要组分。其在正常肝脏中也存在,但含量极低,在肝硬化阶段,沉积迅速。目前,中药单体、复方研究多集中于抗纤维化领域,对早期肝硬化关注较少,需要更多基础研究及高质量的临床试验进一步证实中药疗效优势,并对其相关机制进行深入挖掘。中药复方具有多层次、多靶点的先天优势,但现有研究多聚焦于抑制HSCs活化、促进胶原降解或抗肝窦毛细血管化等方向,尚未对中医药潜在的调控弹性蛋白合成及降解的相关机制进行探索。目的:基于益肝消积方对弹性蛋白合成及降解的调控作用,探索在四氯化碳（CCl4）诱导的肝脏发生损伤形成早期肝硬化病变后,该复方干预早期肝硬化的效果及其可能的机制,以期为益肝消积方进一步成果转化提供理论支撑,同时亦为其它防治早期肝硬化药物的研发提供方向。方法:通过给予SPF级雄性Sprague Dawley大鼠（200±10g）1ml/kg腹腔内注射50%CCl4和橄榄油混合液,2次/周,共6周,构建早期肝硬化模型。7周始,予益肝消积方、阳性对照药（安络化纤丸）,1ml/100g剂量灌胃。空白对照、模型对照组予等剂量蒸馏水灌胃,日1次,持续6周。用生化法检测ALT、AST评估肝功能;行组织病理学染色（HE染色、天狼猩红染色及Masson染色）评估早期肝硬化病变进展、检测肝脏胶原沉积;用弹性纤维染色评估肝脏的弹性蛋白沉积;免疫组织化学染色、免疫荧光染色观察肝组织中TGF-β1、CD68、CD80、CD163和α-SMA表达情况;用蛋白免疫印迹（Western blot,WB）分析以及实时定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测 Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CCL2、CCR2、TGF-β1、TGF-βR-Ⅱ、Smad2/3、P-Smad2/3、Smad4、Smad7、Sp1、TNF-α、Ras、MEK1/2、ERK1/2、MMP-2、MMP-9、MMP-12、TIMP-1的蛋白水平及bFGF、弹性蛋白（Elastin）的mRNA水平变化,进而对益肝消积方干预早期肝硬化的作用及其相关机制进行初步探索。结果:1.模型制备:予50%CCl4/橄榄油混合液,腹腔注射,1ml/kg,2次/周。造模6周后,组织病理染色发现,模型组大鼠肝脏出现大量纤维增生,汇管区增宽,形成假小叶,说明模型制备成功。2.一般情况:益肝消积方治疗组及阳性对照安络化纤丸组大鼠毛色、精神状态、进食量等方面均优于模型组。体重上,治疗组大鼠体重均明显高于模型组（P<0.01）;体重增长趋势上,益肝消积方组优于安络化纤丸组。3.肝功能:与正常组相比,模型组大鼠血清中ALT、AST含量升高显着（P<0.01）。益肝消积方和阳性对照组（安络化纤丸）较模型组显着下降（P<0.05或P<0.01）。与安络化纤丸相比,益肝消积方在改善ALT方面疗效较优。4.肝组织病理学表现:从肝脏外观看,模型组大鼠颜色变暗,体积缩小,表面粗糙,边缘较钝,质地较硬韧,部分肝脏在剥离时与胸膜腔其他组织相粘连,难以剥离。益肝消积方和安络化纤丸治疗后的大鼠肝体积缩小不明显,表面粗糙不明显,质地较柔韧,未发现与胸腔其他组织粘连,较易剥离。此外,通过组织学染色（HE染色、Masson染色、天狼猩红染色）发现,与模型组大鼠相比,益肝消积方和安络化纤丸治疗后的大鼠肝脏炎性细胞浸润程度减轻,病变范围减小,汇管区及周围纤维增生程度减轻,假小叶数量明显减少,且胶原纤维等细胞外基质成分沉积减少（P<0.01）。对比安络化纤丸,益肝消积方抑制胶原沉积的效果较好。说明益肝消积方能够有效抑制炎细胞浸润,减少胶原纤维过度沉积,从而发挥干预早期肝硬化的作用。5.弹性纤维染色结果:为观测弹性纤维变化,我们对其进行了特殊染色。实验发现,在早期肝硬化阶段,模型组弹性纤维含量增多迅速,显着高于空白对照组（P<0.01）。益肝消积方、安络化纤丸治疗组与模型组相比,弹性纤维含量显着减少（P<0.01）,且益肝消积方效果较明显。6.免疫组化、免疫荧光染色结果:与空白对照组相比,模型组TGF-β1、α-SMA、CD68、CD80、CD163阳性表达区域明显增多。与模型组相比,益肝消积方、安络化纤丸组阳性区域明显减少。7.qRT-PCR结果:模型组与空白对照组相比,ElastinmRNA表达量显着升高（P<0.01）。与模型组相比,益肝消积方治疗组ElastinmRNA表达量显着下降（P<0.01）。对比安络化纤丸,益肝消积方减少ElastinmRNA表达更显着;模型组bFGF mRNA较正常组升高显着（P<0.01）。对比模型组,益肝消积方治疗组bFGF mRNA表达量显着下降（P<0.01）。对比安络化纤丸,益肝消积方下调bFGF mRNA表达更显着。8.Western blot 结果:与空白对照组相比,模型组 Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CCL2、CCR2、TGF-β1、TGF-β RⅡ、P-Smad2/3、Smad4、Ras、Sp1、MMP-2、MMP-9、MMP-12、TIMP-1 蛋白表达含量明显升高（P<0.05 或 P<0.01）,Smad7、TNF-α、MEK1/2 蛋白表达含量明显下降（P<0.05或P<0.01）;与模型组相比,益肝消积方治疗组Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CCL2、CCR2、TGF-β1、TGF-β RⅡ、P-Smad2/3、Smad4、Ras、Sp1、MMP-2、MMP-9、MMP-12、TIMP-1 蛋白表达含量明显降低（P<0.05 或 P<0.01）,Smad7、TNF-α、MEK1/2蛋白表达含量明显上升（P<0.05或P<0.01）。结论:1.予50%CCl4/橄榄油混合液,腹腔注射,1ml/kg,2次/周,共6周,可成功制备早期肝硬化大鼠模型。予益肝消积方干预后,可改善早期肝硬化大鼠体重、肝功能;有效抑制早期肝硬化大鼠肝脏炎性细胞浸润,肝细胞变性、坏死,胶原纤维（Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ）、弹性纤维等ECM沉积,改善病变程度。2.益肝消积方可抑制α-SMA表达,下调CD68、CD80、CD163表达量,抑制CCL2-CCR2通路,进而具有抑制HSCs激活,抑制单核/巨噬细胞浸润,及向M2型巨噬细胞极化,阻止单核/巨噬细胞向损伤肝组织部位迁移,减少Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ和Elastin含量,发挥干预早期肝硬化的作用。3.益肝消积方能通过 TGF-β1/Smads、TGF-β1/Ras/ERK 和 bFGF、TNF-α/MEK/ERK信号转导通路抑制胶原纤维、弹性纤维等ECM合成,发挥干预早期肝硬化的作用。4.益肝消积方可通过调节MMPs/TIMPs酶系,促进胶原纤维、弹性纤维等ECM降解,达到干预早期肝硬化的作用。
史扬[3]（2021）在《基于“精损络痹”理论探讨DKD肾精亏虚证与纤维化因子的关联性》文中指出目的:本团队前期研究结果显示肾精亏虚证是糖尿病肾脏病（Diabetc kidney disease,DKD）患者最主要的本虚证型,以填补肾精为核心的治疗大法在DKD临床治疗中收效显着,中医辨证施治的准确性直接影响DKD的病情进展及预后。目前,肾精亏虚的证型评判主要依靠主观判断实施,尚缺乏客观化的生物学评判指标,掣肘了填补肾精这一有效治法在临床中的广泛应用。通过拮抗纤维化发挥肾脏保护作用的Klotho蛋白具有类似“肾精”的生物学效应,相关课题前期动物实验研究发现以“精损络痹”理论为指导的填补肾精治法可抑制DKD促纤维化因子如TGF-β1等的表达,故本次研究旨在探索DKD肾精亏虚证与纤维化因子的关联性,以求为DKD肾精亏虚证的辨证施治提供客观依据。方法:依托课题“探讨线粒体损伤与糖尿病肾脏病患者肾虚证的相关性”（课题编号2020-JYB-XJSJJ-062）纳入符合诊断标准的Ⅲ～Ⅳ期DKD患者、糖尿病（Diabetes mellitus,DM）患者,再依据课题前期研究形成的中医证素评判量表将DKD组分为肾精亏虚组（精亏组）、非肾精亏虚组（非精亏组）,收集患者的一般资料、理化检查结果及血清样本,用Elisa检测方法评估上述受试者血清TGF-β1、Klotho、MMP-9、TIMP-1水平。对DKD组、DM组与精亏组、非精亏组的临床资料及上述血清纤维化相关指标的表达水平进行组间对比;探索DKD肾精亏虚证与纤维化相关因子TGF-β1、Klotho、MMP-9、TIMP-1的关系。结果:本研究共纳入符合诊断标准的Ⅲ～Ⅳ期DKD患者56例、DM患者29例,并依据课题前期研究形成的中医证素评判量表将DKD组分为精亏组36例、非精亏组20例。1.DKD与DM组间比较在性别、年龄、BMI、既往史等一般资料方面未见统计学差异（P>0.05）;与DM组相比,DKD患者的红细胞计数降低,差异有统计学意义（P<0.05）;血红蛋白水平、估算肾小球滤过率显着下降（P<0.01）,总胆固醇水平降低（P<0.05）,差异有统计学意义;尿素氮、血肌酐水平显着升高（P<0.01）;糖化血红蛋白、血尿酸、甘油三酯等其余临床理化结果均未见统计学差异（P>0.05）。2.与DM组相比,DKD组患者血清TGF-β1、TIMP-1显着升高（P<0.01）,MMP-9/TIMP-1显着降低（P<0.01）,Klotho水平下降（P<0.05）,差异有统计学意义;两组间MMP-9水平无统计学差异（P>0.05）。3.与DKD非精亏组比较,DKD精亏组患者既往患有高血压病史人数更多,差异有统计学意义（P<0.05）,两组在性别、年龄、BMI、家族史等其余一般资料比较中未见统计学差异（P>0.05）;与DKD非精亏组相比,DKD精亏组患者的红细胞计数、血红蛋白水平、估算肾小球滤过率显着降低（P<0.01）,糖化血红蛋白水平下降（P<0.05）,差异有统计学意义;血清尿素氮、24小时尿蛋白总量水平显着升高（P<0.01）,DKD精亏组患者的血肌酐水平升高（P<0.05）,差异有统计学意义。4.与DKD非精亏组相比,DKD精亏组患者兼夹痰浊证的证素积分升高（P<0.05）,差异有统计学意义。5.与DKD非精亏组相比,DKD精亏组患者血清TGF-β1水平显着升高（P<0.01）,TIMP-1水平升高（P<0.05）,差异有统计学意义;DKD精亏组患者Klotho水平较DKD非精亏组患者显着下降（P<0.01）,两组间MMP-9及MMP-9/TIMP-1水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。6.血清TGF-β1、Klotho与肾精亏虚证明显相关,TGF-β1水平与肾精亏虚证积分呈正相关（r=0.426,P<0.01）,Klotho 水平与其呈负相关（r=-0.375,P<0.01）。结论:DKD肾精亏虚证积分与TGF-β1呈正相关,与Klotho呈负相关;TGF-β1、Klotho可能参与了 DKD肾精亏虚证的发病过程。
彭婕[4]（2021）在《NOX4在肝纤维化模型小鼠中的表达及与肝纤维化的关系》文中进行了进一步梳理目的:肝纤维化（HF）是多种慢性肝损伤的修复反应,也是肝硬化、肝癌等恶性病变的必经阶段。肝星状细胞（HSC）活化是HF发生的中心环节,可引发细胞外基质（ECM）沉积。NADPH氧化酶4（NOX4）产生的活性氧簇（ROS）可调控HSCs中的多种信号通路及相关因子从而影响肝纤维化过程。本次以肝纤维化模型小鼠为研究对象,探究NOX4在肝纤维化组织中的表达水平及作用机制,为肝纤维化的防治提供新的思路。方法:选择C57BL/6J小鼠n只（n=30只）分为对照组（n1=10）、模型组（n2=10）、敲除组（n3=10）,各10只。模型组（n2）小鼠腹腔按1.6mL.kg-1注射四氯化碳（CC14）诱导肝纤维化模型,每周2次;敲除组（n3）先利用CRISPR/Cas9技术敲除NOX4基因（敲除后采用Western blot证明肝组织中ASPH蛋白明显缺失,提示敲除成功）,然后腹腔注射2 ul/g四氯化碳（CC1 4）诱导肝纤维化模型,每周2次;对照组（n1）小鼠腹腔注射等量玉米油,每周2次。观察记录各组小鼠生活状态,于建模后第3周,取小鼠股动脉血后处死小鼠取其肝脏,称重比较其肝脏指数变化,采用自动生化仪检测血清ALT、AST含量,采用放射免疫法检测血清透明质酸酶（HA）、层黏连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原蛋白（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）含量。采用Western blot检测三组小鼠肝组织中NOX4、PI3k、Akt蛋白表达水平。采用RT-PCR检测三组小鼠肝组织中NOX4、TGF-β1、SmadmRNA表达水平,采用免疫组化法（S-P）观察NOX4、TGF-β1、Smad在肝组织中的定位表达,采用HE染色和Masson染色观察三组小鼠肝组织病理变化,对三组小鼠纤维化严重程度进行评分,采用RT-PCR检测三组小鼠肝组织中纤维化相关分子α-SMA、Collagen α Ⅰ、TIMP-1、MMP-2、TGF-β1mRNA 相对表达量。结果:血清学检测及放射免疫法检测结果显示,模型组小鼠肝脏指数、ALT、AST及HA、LN、IV-C、PCⅢ水平均高于对照组和敲除组,差异具有统计学意义（P<0.05）;HE染色结果显示,对照组小鼠肝脏组织结构正常,而模型组小鼠肝小叶明显被破坏,显微镜下可见细胞出现水肿、肝索排列紊乱,肿胀变性、坏死和浆细胞浸润,而敲除组小鼠肝脏损伤程度较模型组减轻,肝索排列较整齐,肝小叶被破坏程度也较低,浸润程度降低,水肿情况未见明显变化;Masson染色结果显示,模型组小鼠肝组织中胶原纤维集中在汇管区,且面积较大,数量明显多于敲除组和对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）;免疫组化结果显示,NOX4、TGF-β1、Smad阳性表达均呈棕褐色,且主要在肝细胞的胞浆中表达;Ishak肝纤维化评分显示,模型组小鼠肝纤维化评分明显高于敲除组和对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）;Western blot结果显示,模型组小鼠的NOX4、TGF-β1、Smad蛋白表达水平均高于敲除组、对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）;RT-PCR 结果显示,模型组小鼠的 NOX4、TGF-β1、Smad mRNA及纤维化相关因子α-SMA、Collagen α Ⅰ、TIMP-1、MMP-2mRNA表达水平均高于对照组和敲除组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:NOX4在小鼠肝组织中高表达并具有促纤维化作用,作用机制可能与其能影响生成ROS介导的TGF-β/Smad信号通路及纤维化相关分子α-SMA、CollagenαI、TIMP-1、MMP-2表达水平有关,而在缺失NOX4基因的肝纤维化小鼠中肝纤维化程度降低,提示抑制NOX4表达对抗肝纤维化药物研究具有重要意义。
刘菲[5]（2021）在《吲哚丙酸（IPA）对四氯化碳（CCl4）诱导的小鼠肝纤维的作用及机制研究》文中指出研究背景及目的:肝纤维化是大多数慢性肝病（CLD）进展为肝硬化甚至肝癌的关键步骤,也是是制约临床预后的关键性因素。目前认为肝纤维化形成的关键是肝星状细胞（HSCs）的持续激活,引起细胞外基质（ECM）的过度沉积。炎症反应、氧化应激损伤、细胞凋亡等均是激活HSCs的重要因素,这标志着通过抗炎、抗氧化,使肝纤维化形成过程中的HSCs减少或失活是抗纤维化的主要目标。转化生长因子（TGF-β）是促进组织修复的正反馈回路的关键激活剂之一,主要通过调节下游的Smads蛋白发挥作用,Smad2/Smad3被认为是促纤维化蛋白,Smad7则是具有抗纤维化作用的蛋白。因此,TGF-β/Smads信号通路的调节对纤维化的发生发展至关重要。肠-肝轴在CLD中也发挥着重要作用。肝脏不仅从肠道获得营养,同时也是肠道微生物攻击的第一目标。肠道屏障被破坏后,大量细菌及其代谢产物进入肝脏,激活免疫系统诱导炎性及氧化应激损伤,进一步增加肠道屏障通透性,形成恶性循环。已有大量文献证实CLD患者肠漏的发生。因此,肠道-微生物群-肝轴也是预防和治疗CLD进展的一个潜在靶点。吲哚丙酸（IPA）是肠道共生菌群（如孢子梭状芽胞杆菌）产生的一种色氨酸代谢衍生物,被发现具有抗炎、抗癌、抗氧化、维持肠道稳态的作用。最新研究表明,IPA可通过下调肝纤维化相关基因的表达,有效缓解非酒精性脂肪肝病（NAFLD）的肝纤维进展。理论上,IPA似乎是一种理想的天然抗纤维化化合物,但目前尚未在其他肝纤维化模型上研究IPA对肝纤维化的作用及潜在机制。四氯化碳（CCl4）诱导的小鼠肝纤维化模型是国际上应用最广的肝纤维化动物模型。本研究首次在该模型上探讨IPA对肝纤维化的作用及机制。方法:以雄性C57BL/6小鼠为研究对象（每组3-4只）,通过腹腔注射CCl4构建肝纤维化模型,IPA溶液每日灌胃干预。通过检测血清ALT、AST、总胆红素（TBIL）、总胆汁酸（TBA）水平评估肝损伤,采用苏木精-尹红（H&E）和Masson染色评估肝组织病理改变和纤维化程度。采用酶联免疫吸附检测（ELISA）和实时定量聚合酶链反应（qPCR）测定肝组织中肿瘤坏死因子（TNF-α）、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10的表达水平,评估肝脏中的炎性反应。采用试剂盒法测定肝组织中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化酶（GSH-PX）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）水平来评估肝脏中的氧化应激水平。TUNEL法分析肝组织中细胞凋亡情况。qPCR检测肝组织α-平滑肌肌蛋白（α-SMA）、I型胶原蛋白（Collagen I）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）、TGF-β1、Smad3的m RNA相对表达量。蛋白质印迹（WB）和免疫组化染色检测肝组织中TIMP1、MMP2、TGF-β1、P-Smad2/3的蛋白表达水平。采用16s RNA测序分析肠道菌群结构。用SPSS25.0软件对数据进行统计分析,统计方法采用t检验和方差分析。结果:1.每日IPA灌胃能明显升高小鼠血清中的IPA浓度。2.IPA干预明显增加CCl4诱导的小鼠血清中的ALT、AST、TBIL和TBA水平,仅予以IPA灌胃对肝功能无影响,这说明IPA溶液无肝毒性,但会加重CCl4诱导的小鼠肝损伤。3.IPA+CCl4组肝组织中的肝细胞坏死、炎性细胞浸润和ECM沉积比CCl4模型组更加严重,说明IPA加重了CCl4诱导的小鼠肝纤维化形成。4.IPA干预可改善CCl4诱导的高甘油三酯血症。5.与CCl4模型组相比,IPA+CCl4组中的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的表达水平升高更加明显,而IL-10的表达受到抑制。说明IPA干预会加重CCl4诱导的炎症反应。6.与CCl4模型组比,IPA干预增加了肝脏中的CAT活性,但降低了肝脏中GSH含量和GSH-PX活性,且不影响SOD活性和MDA含量。上述结果提示该研究中,IPA干预不能缓解CCl4导致的肝脏氧化应激损伤。7.IPA+CCl4组肝脏中的α-SMA、Collagen-I、TIMP-1、MMP-2的m RNA相对表达量和蛋白表达水平显着升高,这提示IPA加重CCl4诱导的小鼠肝纤维化与激活HSCs有关。8.IPA+CCl4组小鼠肝脏中TGF-β1、P-Smad2/3、Smad2/3的蛋白表达水平比CCl4模型组的升高更加明显,而Smad7 m RNA的相对表达量和蛋白的表达水平均受到抑制,这说明IPA加重CCl4诱导的小鼠肝纤维化与TGF-β1/Smads信号通路的激活相关。9.IPA干预可部分恢复肠道微生物多样性,逆转厚壁菌/拟杆菌比率,但同时也会增加致病菌的丰度。这说明IPA干预可影响小鼠肠道内的微生物结构。结论:IPA可能通过TGF-β1/Smads信号通路过度激活HSCs加剧了CCl4诱导的肝纤维化。IPA加重了CCl4诱导的小鼠肝脏炎症和细胞凋亡,但不能缓解CCl4引起的肝脏脂质过氧化损伤。IPA干预会影响肠道菌群的结构。
王洁[6]（2021）在《痰湿壅盛型与阴阳两虚型高血压患者理化指标的差异性分析》文中研究指明目的:通过研究痰湿壅盛型与阴阳两虚型高血压患者理化指标的差异性,探讨各种影响因素与痰湿壅盛型高血压患者的相关性,为高血压病的中医鉴别辨证提供参考指标。方法:选取2019年01月至2019年12月收治于甘肃中医药大学附属医院心血管中心符合纳入标准的患者88例,分为痰湿壅盛组47例和阴阳两虚组41例;收集患者身高、体重,计算BMI,研究两组患者BMI的差异;收集患者年龄、性别、病程、吸烟、饮酒史等危险因素,分别研究两组患者危险因素的差异;收集患者采用彩色超声诊断仪测量的LVDd、IVST及PWT的数据,根据Devervux校正公式计算LVMI,比较两组患者LVMI的差异;采用全自动生化仪测定患者血清TC、HDL-C、LDL-C、TG、UA、Hcy的水平,研究以上生化指标在两组证型之间的差异;ELISA法检测患者血清MMP-1、MMP-2、MMP-3、TIMP-1、TIMP-2含量,将收集的数据运用SPSS 25.0软件进行统计学分析,研究其在痰湿壅盛型与阴阳两虚型高血压患者之间的差异性,将以上指标中的阳性结果纳入研究其与痰湿壅盛型高血压患者的相关性。结果:1.性别构成、年龄、病程在痰湿雍盛组与阴阳两虚组之间均无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;2.痰湿壅盛组患者中饮酒者所占的比列明显高于阴阳两虚证型组（P<0.05）;吸烟者所占比例在两组患者中比较差异无统计学意义（P>0.05）;3.痰湿壅盛组患者BMI高于阴阳两虚组,差异有统计学意义（P<0.05）;4.LVMI在痰湿雍盛组与阴阳两虚组之间比较差异均无统计学意义（P>0.05）;5.痰湿壅盛组患者Hcy、TC、TG、LDL-C均高于阴阳两虚组患者（P<0.05）,痰湿壅盛证型组患者HDL-C低于阴阳两虚证型组患者（P<0.05）;两组患者UA比较差异均无统计学意义（P>0.05）;6.痰湿壅盛组患者MMP-1和MMP-2水平均高于阴阳两虚组（P<0.05）,痰湿壅盛组患者TIMP-1低于阴阳两虚组（P<0.05）,两组患者MMP-3、TIMP-2水平比较差异无统计学意义（P>0.05）;7.饮酒（OR=2.388）、TG（OR=2.304）、HDL-C（OR=0.196）、BMI（OR=1.177）与痰湿壅盛型高血压有一定的相关性。结论:痰湿壅盛型与阴阳两虚型高血压患者的理化指标存在差异,饮酒、BMI、T G、HDL-C与高血压痰湿壅盛型明显相关,可能作为高血压辨证为痰湿壅盛型的客观指标。
马欢[7]（2021）在《阴虚阳亢型与阴阳两虚型高血压患者理化指标的差异性分析》文中提出目的:观察阴虚阳亢型与阴阳两虚型高血压患者理化指标的差异性,探讨理化指标与阴虚阳亢型高血压患者的相关性,为高血压中医辨证分型提供客观依据。方法:收集甘肃中医药大学附属医院心血管中心于2019年01月至2019年12月收治的高血压住院患者86例患者,分为阴虚阳亢组45例,阴阳两虚组41例。收集患者年龄、性别、病程、吸烟史、饮酒史等资料;收集患者身高、体重,计算BMI;收集患者心脏彩超相关指标LVDd、IVST及PWT的数据,根据Devervux校正公式计算LVMI;收集采用全自动生化仪测定患者血清TC、HDL-C、LDL-C、TG、UA、Hcy水平的数据;收集采用ELISA法检测患者血清MMP-1、MMP-2、MMP-3、TIMP-I、TIMP-2含量的数据;分别录入数据。运用SPSS 25.0统计软件分析阴虚阳亢型和阴阳两虚型高血压患者理化指标的差异性,及理化指标与阴虚阳亢型高血压患者的相关性。结果:1.阴虚阳亢组和阴阳两虚组患者基线资料比较,性别构成与病程分布差异均无统计学意义（P>0.05）,具有可比性。2.阴阳两虚组平均年龄水平高于阴虚阳亢组,差异具有统计学意义（P<0.05）,年龄与阴虚阳亢型正相关,相关系数为0.914;两组患者吸烟、饮酒、LVMI、BMI比较差异均无统计学意义（P>0.05）。3.阴阳两虚组UA、TC、TG、LDL-C均高于阴虚阳亢组,差异有统计学意义（P<0.05）;两组患者HDL-C、Hcy水平比较差异无统计学意义。TC、TG、LDL-C与阴虚阳亢型正相关,相关系数分别为0.493、0.136、0.459。4.阴阳两虚组MMP-1、MMP-2水平均高于阴虚阳亢组,差异有统计学意义（P<0.05）;阴阳两虚组TIMP-1水平低于阴虚阳亢组,差异有统计学意义（P<0.05）;两组患者MMP-3、TIMP-2水平比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论:阴虚阳亢型与阴阳两虚型高血压患者的年龄、UA、LDL-C、TC、TG、MMP-1、MMP-2、TIMP-1存在差异,对高血压鉴别辨证阴虚阳亢型或阴阳两虚型有一定的指导意义,且年龄、TC、TG、LDL-C与阴虚阳亢型明显相关,可能作为高血压中医辨证为阴虚阳亢型的客观依据。
陈鑫[8]（2021）在《重组腺相关病毒载体介导的环状RNA circFBXW4在肝纤维化中的功能及机制研究》文中指出肝纤维化（hepatic fibrosis,HF）是由各种感染、免疫反应、理化因素等长时间的刺激下,肝脏中各类细胞外基质（extracellular matrix,ECM）代谢失衡,造成纤维结缔组织异常增生和肝脏结构紊乱。临床上肝纤维化的早期症状并不典型,目前尚缺乏灵敏的早期诊断指标。研究发现,肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）激活并分化为肌成纤维细胞,是细胞外基质分泌的主要细胞来源。因此,肝星状细胞的活化被认为是肝纤维化启动和持续阶段的中心环节。肝星状细胞的活化过程受各种非编码RNA（noncoding RNA,nc RNA）的联合调控,深入研究肝纤维化发生的分子机制将为研发新型治疗手段提供一定的研究基础。非编码RNA在肝纤维化发生、发展的过程中具有重要的调控作用。其中,微小RNA（micro RNA,miRNA）和长链非编码RNA（long noncoding RNA,lnc RNA）在肝纤维化相关的机制探究和临床意义已有大量的研究报道。近年来,环状RNA（circular RNA,circRNA）作为一类新兴的非编码RNA分子被发现,其与各类疾病的生理过程密切相关。内源性circRNAs是通过反向剪切以共价键形成的环状RNA分子,其稳定性高可耐受核酸酶的降解,在不同的物种间具有保守性,在组织和细胞不同的发育阶段和生理状态呈现特异性表达。circRNAs的分子结构特性使其作为新型的临床诊断标记物在开发上具有明显的优势,现已发展成生物医学的热点研究领域之一。circRNAs在各类疾病中的功能及作用机制逐渐引起研究者们的广泛关注,然而,有关circRNAs在肝纤维化中的表达谱分析和具体机制尚有待阐明。在本研究中,构建了小鼠肝纤维化进展和逆转模型,采用肝脏原位灌流技术,分离提取小鼠肝脏的原代肝星状细胞。运用高通量测序技术,分析肝纤维化小鼠原代肝星状细胞中的circRNAs表达谱,鉴定发现大量的circRNAs分子存在差异性表达。其中,circFBXW4的表达水平在肝纤维化进展期显着降低,并随肝纤维化的逆转过程表达恢复,提示circFBXW4可能与肝纤维化发生、发展的病理过程密切相关,引起了我们的重点关注并对其展开了功能学探究。研究中采用重组腺相关病毒为载体,介导circFBXW4靶向肝脏的基因治疗,实验发现提高circFBXW4的水平可抑制肝纤维化过程中的肝损伤,减少肝组织中的纤维增生和胶原沉积,一定程度上修复了肝脏结构紊乱的现象。同时,运用慢病毒生物载体构建了circFBXW4过表达的稳转肝星状细胞株,发现过表达circFBXW4抑制肝星状细胞由静息态向激活态的转化,阻滞其细胞周期,减少活化态肝星状细胞的恶性增殖。此外,利用非病毒载体系统中的阳离子脂质体介导法,发现干扰circFBXW4的生物信号对肝星状细胞具有反向调控功能。以上结果提示,circFBXW4可能是一种抗肝纤维化的RNA分子。在机制探究方面,大部分外显子来源且定位在细胞质中的circRNAs,常通过竞争性内源RNA（competitive endogenous RNA,ce RNA）参与调控目的基因的表达,进而影响生物学功能。因此,本研究进一步运用micro RNAs芯片技术,分析原代肝星状细胞中micro RNAs的差异表达,并通过生物信息学预测circFBXW4可能结合的micro RNAs分子,经验证发现circFBXW4可靶向结合miR-18b-3p,并调控其表达水平。micro RNAs芯片分析及实验检测均发现,miR-18b-3p在肝纤维化的过程中表达上调,其具有促进肝星状细胞中纤维介质表达的功能,并且circFBXW4与miR-18b-3p的表达呈负相关关系。抑癌基因F框/WD-40域蛋白7（F box and WD 40 domain containing protein 7,FBXW7）是miR-18b-3p的靶基因之一,本研究发现circFBXW4通过靶向结合miR-18b-3p进而调控FBXW7信号通路。此课题在动物、组织、细胞、分子等多个维度,进行了关于circFBXW4表型及机制的初步探究。发现circFBXW4是调节肝星状细胞活化和肝纤维化发展的关键生物分子,其可能作为一种预测肝纤维化进展和逆转病理过程的潜在生物标志物。
邹亮[9]（2021）在《基质金属蛋白酶对脑动脉瘤的影响及其相互关系研究》文中研究指明第一部分基质金属蛋白酶在脑动脉瘤形成和发展中的作用目的:通过人群研究分析MMP-2、MMP-9和TIMP-2在动脉瘤患者血清中表达的临床意义,并在动物实验中分析MMPs在动脉瘤形成中的意义。方法:1.人群实验:收集2016年3月至2019年3月本院动脉瘤患者156例为病例组。同期在医院健康体检中心收集健康体检者120例为对照组。病例组入组后采集静脉血5ml于抗凝管中,1000rpm离心10min,取上清液。收集对照组每位研究对象初诊或体检时的静脉血5ml于抗凝管中,采用同样的方法,1000rpm离心10min,取上清液。采用ELISA试剂盒检测患者血清中的MMP-2、MMP-9和TIMP-2表达水平。2.家兔实验:成年新西兰兔32只购自北京维通利华实验动物技术有限公司。分为4组,分别是正常对照组、1周组、2周组和3周组,每组8只。弹性蛋白酶诱导家兔形成颈动脉分叉部动脉瘤。1周组、2周组和3周组分别诱导1周、2周和3周。干预结束后,给予兔全身麻醉,沿颈部切口暴露右侧颈总动脉,用游标卡尺测量颈动脉瘤的大小。Western Blot方法检测动脉瘤组织中MMP-2、MMP-9和TIMP-2蛋白的表达水平。RT-PCR方法检测动脉瘤组织中MMP-2、MMP-9和TIMP-2 m RNA的表达水平。HE染色做病理切片。3.大鼠实验:SPF级雄性Wistar大鼠30只和TIMP-2缺陷Wistar大鼠10只购自北京维通利华实验动物技术有限公司。30只大鼠随机分成3组,即正常对照组、模型组、强力霉素组,TIMP-2缺陷Wistar大鼠为TIMP-2缺陷组。在模型组、强力霉素组和TIMP-2缺陷组中,肾动脉高压法诱导大鼠模型,正常对照组行假手术对照。手术后,强力霉素组大鼠皮下注射浓度为25mg/ml的强力霉素0.5ml,每天2次。其余三组注射生理盐水对照,连续干预1周。诱导4周后处死大鼠,取血,开颅取脑,显微镜下仔细观察颅内动脉瘤,并测量其动脉瘤大小。取出动脉瘤组织,HE染色做病理切片。采用ELISA试剂盒检测血清中MMP-2、MMP-9、TIMP-2表达水平。结果:1.人群实验:（1）动脉瘤患者血清MMP-2、MMP-9和TIMP-2蛋白表达水平显着高于正常对照组;动脉瘤患者血清中MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-2比值显着高于正常对照组。（2）血清MMP-2蛋白在Hunt-Hess分级Ⅳ-Ⅴ、动脉瘤直径>2.5cm的患者中表达水平显着增加;血清TIMP-2蛋白在Hunt-Hess分级Ⅳ-Ⅴ的患者中表达水平显着增加;MMP-9蛋白水平、MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-2比值在Hunt-Hess分级Ⅳ-Ⅴ、动脉瘤多发、动脉瘤直径1.2-2.5cm和>2.5cm的患者中显着升高。（3）多因素logistic回归分析表明,高水平的MMP-2、MMP-9、MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-2是患者死亡的独立影响因素。2.家兔实验:（1）MMP-2、MMP-9和TIMP-2 m RNA在各组动脉瘤组织中相对表达顺序是6周组>3周组>1周组>对照组;MMP-2和MMP-9在对照组、1周组、3周组和6周组的两两比较中均存在显着性差异;TIMP-2在3周组和6周组间无显着差异,其余组别见均存在显着差异。（2）1周组、3周组和6周组的MMP-2、MMP-9、TIMP-2蛋白均显着高于对照组,且在1周组、3周组和6周组中逐渐增加。（3）1周组、3周组和6周组动脉瘤宽度（mm,均值）分别是2.31、4.37和5.46,三组宽度均存在显着性差异;1周组、3周组和6周组动脉瘤高度（mm,均值）分别是3.15、6.08和6.98,三组高度存在显着性差异（F=7.54,P=0.010）,但是3周组和6周组高度差异无统计学意义。（4）1周组、3周组和6周组均有动脉瘤壁弹性纤维断裂,平滑肌细胞数量减少和内皮细胞受损的病理表现,6周组受损最严重。3.大鼠实验:（1）各组大鼠血清的MMP-2、MMP-9、TIMP-2蛋白水平差异有统计学意义。模型组、强力霉素组和TIMP-2缺陷组的MMP-2和MMP-9蛋白水平较对照组升高,强力霉素组的MMP-2和MMP-9蛋白水平显着低于模型组,TIMP-2缺陷组的MMP-2和MMP-9蛋白水平显着高于模型组。模型组的TIMP-2蛋白水平显着高于对照组;强力霉素组的血清TIMP-2蛋白水平显着低于模型组;TIMP-2缺陷组的血清TIMP-2蛋白水平显着低于其余三组。（2）模型组、强力霉素组和TIMP-2缺陷组的成瘤率分别为90%、60%和100%,强力霉素组的成瘤率显着低于模型组和TIMP-2缺陷组。强力霉素组动脉瘤的宽度和高度显着低于模型组,TIMP-2缺陷组动脉瘤的宽度和高度显着高于模型组。（3）正常对照组动脉内膜、中膜和外膜结构完整,无异常细胞浸润。模型组和强力霉素组内膜变薄,弹性纤维断裂,结构紊乱,但是强力霉素组的动脉内膜较模型组厚。TIMP-2缺陷组内膜结构破坏或消失,结构紊乱,纤维断裂。结论:MMP-2、MMP-9和TIMP-2在动脉瘤的形成、进展和患者预后方面均具相关第二部分血管内介入栓塞术和开颅夹闭术对MMPs、炎症因子、氧化应激因子和Caspase3的影响目的:血管内介入栓塞术和开颅夹闭术对MMP-2、MMP-9、炎症因子、氧化应激因子和Caspase-3表达的影响,以探究其治疗效果的机制。方法:1.人群研究:研究对象纳入和手术方式同第一部分,手术后1d、3d、5d和7d取患者静脉血5ml于抗凝管中,1000rpm离心10min,取上清液。酶联免疫法检测血清中MMP-2和MMP-9表达水平。2.家兔实验:新西兰兔32只购自北京维通利华实验动物技术有限公司。分为4组,分别是对照组、模型组、血管介入组和开颅夹闭组,每组8只。对模型组、血管介入组和开颅夹闭组诱导模型,诱导方法同第二部分。对血管介入组和开颅夹闭组分别采用血管介入栓塞术和开颅夹闭术治疗家兔,手术方式同第一部分,血管介入栓塞术只采用单弹簧圈治疗。术后7天,沿颈部切口给予兔全身麻醉,暴露右侧颈总动脉,取动脉瘤组织或周围动脉血管壁组织,做相应处理检测组织中各指标水平。RT-PCR检测组织中MMP-2、MMP-9、IL-6和TNF-αm RNA相对表达水平。采用羟胺法检测组织中的SOD活力。采用比色法检测组织中总一氧化氮合成酶活性,分光光度法检测组织中Caspase-3活性。结果:1.人群结果:（1）介入组和夹闭组血清中中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平在手术后逐渐下降。在手术后5天和7天,夹闭组患者血清中MMP-2蛋白表达水平显着高于介入组。在手术后3天、5天和7天,夹闭组患者血清中MMP-9蛋白表达水平显着高于介入组。（2）手术时间越长,术中出血量越多,手术后患者血清中MMP-2和MMP-9表达水平越高。（3）多因素Logistic回归分析结果表明,血管介入栓塞术是术后低水平MMP-2和MMP-9的独立影响因素。（4）单纯弹簧圈组、支架辅助组和球囊辅助组的血清MMP-2和MMP-9表示水平差异无统计学意义。2.家兔实验:（1）模型组、介入组和夹闭组的MMP-2和MMP-9 m RNA的相对表达水平显着高于对照组,介入组和夹闭组显着低于模型组,介入组显着低于夹闭组。（2）模型组、介入组和夹闭组的IL-6和TNF-αm RNA的相对表达水平显着高于对照组,介入组和模型组显着低于夹闭组,介入组和模型组差异无显着性意义。（3）模型组、介入组和夹闭组的SOD活性显着低于对照组,介入组显着高于夹闭组和模型组,夹闭组和模型组差异无显着性意义。模型组、介入组和夹闭组的i NOS活性显着高于对照组,介入组和夹闭组显着低于模型组,介入组显着低于夹闭组。（4）模型组、介入组和夹闭组的Caspase-3活性显着高于对照组,介入组显着低于夹闭组和模型组,夹闭组和模型组差异无显着性意义。结论:相对于开颅夹闭术,血管介入栓塞术能显着降低患者血清中的MMP-2和MMP-9,降低促炎症因子、氧化应激水平和促凋亡因子水平
王立蓉,俞谦,孟桂霞,殷国庆,王庆强,臧桂珍[10]（2020）在《老年病毒性肝炎病人继发肝硬化危险因素分析》文中研究表明目的探究老年病毒性肝炎继发肝硬化病人血清基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP-1）、血清胱抑素C（Cys-C）以及肝纤维化指标的变化,分析肝硬化的危险因素。方法选择2017～2018年我院和中大医院收治的老年病毒性肝炎病人80例,其中40例继发肝硬化病人为观察组;未继发肝硬化病人40例为对照组。采用ELISA法检测血清MMP-2、TIMP-1、透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）和层黏连蛋白（LN）的水平,采用免疫比浊法检测Cys-C水平,比较2组上述指标的差异,并对老年病人病毒性肝炎继发肝硬化相关危险因素进行分析。结果与对照组相比,观察组血清MMP-2、TIMP-1和Cys-C以及肝纤维化相关因子HA、PCⅢ和LN的表达均显着升高（P <0. 05）;多因素Logistic回归分析显示,进行抗病毒治疗和保肝治疗是病毒性肝炎继发肝硬化的保护性因素（P <0. 05）,饮酒和晚睡是病毒性肝炎继发肝硬化的独立危险因素（P <0. 05）。结论病毒性肝炎继发肝硬化的老年病人血清MMP-2、TIMP-1、Cys-C、HA、PCⅢ和LN水平都显着升高;抗病毒治疗和保肝治疗能有效降低继发肝硬化的风险,而饮酒和晚睡则会加重肝硬化进程,应加强对上述因素的重点干预。
二、肝硬化患者血清MMP-2和TIMP-1的测定及临床意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肝硬化患者血清MMP-2和TIMP-1的测定及临床意义（论文提纲范文）
（1）活血软坚扶正方干预乙肝后肝纤维化的临床疗效研究及机制探索（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语 |
| 文献综述 TGF-β1相关通路在乙肝后肝纤维化方面研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 网络药理学研究 |
| 第一节 资料与方法 |
| 1 活血软坚扶正方活性化学成分与作用靶点的获取和筛选 |
| 2 乙肝后肝纤维化相关作用靶点的筛选 |
| 3 药物-活性成分-疾病相关靶点网络的构建 |
| 4 蛋白相互作用网络的构建与核心靶标筛选 |
| 5 生物过程与信号通路富集分析 |
| 第二节 活血软坚扶正方网络药理学研究结果 |
| 1 活血软坚扶正方活性成分的筛选 |
| 2 疾病相关靶点预测 |
| 3 药物-活性成分-疾病相关靶点网络构建 |
| 4 蛋白相互作用网络的构建与核心靶标筛选 |
| 5 GO基因功能富集分析 |
| 6 KEGG通路富集分析 |
| 第三节 小结与讨论 |
| 1 活血软坚扶正方有效活性成分讨论 |
| 2 活血软坚扶正方抗乙肝后肝纤维化相关靶标蛋白讨论 |
| 3 活血软坚扶正方抗乙肝后肝纤维化相关信号通路讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 临床研究 |
| 第一节 资料与方法 |
| 1 一般资料 |
| 2 诊断标准 |
| 3 纳入标准 |
| 4 排除标准 |
| 5 退出标准 |
| 6 剔除标准 |
| 7 中止标准 |
| 8 治疗方法 |
| 9 观察指标 |
| 10 统计学方法 |
| 第二节 研究结果 |
| 1 基线情况 |
| 2 疗效比较 |
| 3 安全性指标检测 |
| 4 脱落病例分析 |
| 第三节 小结与讨论 |
| 1 讨论 |
| 2 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（2）基于弹性蛋白合成及降解探讨益肝消积方干预早期肝硬化的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中医药防治肝硬化的研究现状 |
| 1 肝硬化病名渊源 |
| 2 中医对肝硬化病因病机的认识 |
| 3 中医治疗肝硬化思路 |
| 4 导师论治肝硬化的经验 |
| 5 中医药防治肝硬化的机制探讨 |
| 6 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 弹性蛋白及其调控因子在早期肝硬化中的作用 |
| 1 流行病学 |
| 2 肝硬化现代研究进展 |
| 3 弹性蛋白在肝硬化发生中的作用 |
| 4 调控弹性蛋白合成的细胞因子 |
| 5 调控弹性蛋白降解的细胞因子 |
| 6 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 研究一 益肝消积方对早期肝硬化的干预作用 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 研究二 益肝消积方调控弹性蛋白合成干预早期肝硬化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 研究三 益肝消积方调控弹性蛋白降解干预早期肝硬化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（3）基于“精损络痹”理论探讨DKD肾精亏虚证与纤维化因子的关联性（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 糖尿病肾脏病现代医学研究进展 |
| 1. DKD流行病学及机制 |
| 2. 纤维化相关常见指标 |
| 3. 纤维化因子与DKD的关系 |
| 4. 临床干预 |
| 5. 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 糖尿病肾脏病与纤维化关系的中医研究进展 |
| 1. DKD本虚标实的病机理论研究 |
| 2. 纤维化因子与中医证型相关性的研究现状 |
| 3. DKD与纤维化因子的中医临证研究 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 临床研究 |
| 资料和方法 |
| 1. 病例来源 |
| 2. 诊断标准 |
| 3. 纳排标准 |
| 4. 研究内容和方法 |
| 结果 |
| 1. DKD肾精亏虚证患者的一般情况 |
| 2. DKD肾精亏虚证的中医证候、兼夹证素分析 |
| 3. DKD肾精亏虚证患者的实验室指标特点 |
| 4. DKD肾精亏虚证与纤维化因子的关联性 |
| 讨论 |
| 1. 肾精亏虚证的中医证候、兼夹证素特点分析 |
| 2. 肾精亏虚证的临床资料分析 |
| 3. 肾精亏虚证与纤维化因子的关系分析 |
| 4. “精损络痹”理论的科学内涵 |
| 结语 |
| 结论 |
| 创新点与特点 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 中医证素评定表 |
| 在学期间主要研究成果 |
（4）NOX4在肝纤维化模型小鼠中的表达及与肝纤维化的关系（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英缩略词表 |
| 第1章 前言 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验仪器与设备 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 构建NOX4基因敲除小鼠模型 |
| 2.4.2 构建肝纤维化小鼠模型 |
| 2.4.3 血清学检测 |
| 2.4.4 石蜡切片的制作 |
| 2.4.5 HE染色 |
| 2.4.6 Masson 染色 |
| 2.4.7 免疫组化检测目标蛋白在肝组织的定位表达 |
| 2.4.8 Western blot检测NOX4表达水平 |
| 2.4.9 荧光定量PCR法 |
| 2.4.10 肝纤维严重程度分析 |
| 2.5 统计学分析 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 小鼠肝脏情况比较 |
| 3.2 各组小鼠血清 HA、LN、PCⅢ、IV-C 指标比较 |
| 3.3 HE染色情况比较 |
| 3.4 Masson染色情况比较 |
| 3.5 各组小鼠肝纤维化发展程度比较 |
| 3.6 各组NOX4、TGF-β1、Smad在肝脏中的定位表达 |
| 3.7 各组NOX4、TGF-β1、Smad mRNA在肝组织中表达的比较 |
| 3.8 各组NOX4、TGF-β1、Smad蛋白在肝组织中相对表达量的比较 |
| 3.9 各组促纤维化因子表达比较 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 HF损伤模型的选择和建立 |
| 4.2 NOX4对HF模型小鼠组织病理的影响 |
| 4.3 NOX4在肝纤维化组织中表达水平及与HF发展程度的关系 |
| 4.4 NOX4对TGF-β/Smad信号通路的影响 |
| 4.5 NOX4对促HF因子表达的影响 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 肝纤维化的研究进展 |
| 参考文献 |
（5）吲哚丙酸（IPA）对四氯化碳（CCl4）诱导的小鼠肝纤维的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 色氨酸代谢物与慢性肝病的关系研究(综述) |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（6）痰湿壅盛型与阴阳两虚型高血压患者理化指标的差异性分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 临床研究 |
| 1 研究对象 |
| 1.1 样本量的估算 |
| 1.2 病例来源 |
| 1.3 诊断标准 |
| 1.3.1 西医诊断标准 |
| 1.3.2 中医辨证标准 |
| 1.4 纳入标准 |
| 1.5 排除标准 |
| 1.6 签署伦理审查知情同意书 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 基本参数的测量 |
| 2.2 生化指标的测定 |
| 2.3 心脏彩超检查 |
| 2.4 基质金属蛋白酶及其抑制剂的测定 |
| 2.4.1 主要仪器及试剂盒 |
| 2.4.2 血清采集及保存 |
| 2.5 统计学方法 |
| 2.6 技术路线图 |
| 第二章 研究结果及讨论 |
| 1 结果 |
| 1.1 两组患者性别构成比较 |
| 1.2 两组患者年龄比较 |
| 1.3 两组患者病程分布比较 |
| 1.4 两组患者吸烟情况比较 |
| 1.5 两组患者饮酒情况比较 |
| 1.6 两组患者BMI比较 |
| 1.7 两组患者LVMI比较 |
| 1.8 两组患者生化指标比较 |
| 1.9 两组患者血清MMPs水平比较 |
| 1.10 两组患者血清TIMPs水平比较 |
| 1.11 证型与影响因素的二元Logistic回归分析 |
| 2 讨论 |
| 2.1 高血压证型与性别、年龄、病程的关系 |
| 2.2 高血压证型与其他观察指标的关系 |
| 2.2.1 吸烟饮酒 |
| 2.2.2 肥胖 |
| 2.2.3 左室重量指数 |
| 2.2.4 尿酸 |
| 2.2.5 同型半胱氨酸 |
| 2.2.6 血脂 |
| 2.3 高血压证型与基质金属蛋白酶及其抑制剂的关系 |
| 2.4 证型与危险因素的Logistic回归分析 |
| 3 结语 |
| 3.1 结论 |
| 3.2 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 第三章 文献研究 |
| 1 现代医学对高血压的认识 |
| 1.1 原发性高血压的发病机制 |
| 1.1.1 遗传因素 |
| 1.1.2 肾素-血管紧张素-醛固酮系统 |
| 1.1.3 血管活性物质 |
| 1.1.4 炎性因子 |
| 1.1.5 巨噬细胞极化 |
| 1.1.6 肠道菌群 |
| 1.2 基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶抑制因子的研究进展 |
| 2 祖国医学对本病的认识 |
| 2.1 中医病因病机 |
| 2.2 辨证分型 |
| 2.3 祖国医学对理化指标的认识 |
| 2.3.1 对肥胖的认识 |
| 2.3.2 对高血压左心室肥厚的认识 |
| 2.3.3 对高同型半胱氨酸血症的认识 |
| 2.3.4 对血脂代谢异常的认识 |
| 2.3.5 祖国医学对高尿酸血症的认识 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在校期间主要研究成果 |
| 附录 |
（7）阴虚阳亢型与阴阳两虚型高血压患者理化指标的差异性分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 临床调查 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 样本量的估算 |
| 1.2 病例来源 |
| 1.3 诊断标准 |
| 1.4 纳入标准 |
| 1.5 排除标准 |
| 1.6 签署伦理审查知情同意书 |
| 1.7 临床资料 |
| 1.8 调查方法 |
| 1.9 统计学分析 |
| 1.10 技术路线图 |
| 2 结果 |
| 2.1 两组患者性别比较 |
| 2.2 两组患者病程分布比较 |
| 2.3 两组患者年龄比较 |
| 2.4 两组患者吸烟情况比较 |
| 2.5 两组患者饮酒情况比较 |
| 2.6 两组患者LVMI比较 |
| 2.7 两组患者BMI比较 |
| 2.8 两组患者生化指标比较 |
| 2.9 两组患者MMPs比较 |
| 2.10 两组患者TIMPs比较 |
| 2.11 阴虚阳亢型与影响因素的二元Logistic回归分析 |
| 3 分析与讨论 |
| 3.1 基本资料的分析与讨论 |
| 3.2 生化指标的分析与讨论 |
| 3.3 基质金属蛋白酶与基质金属蛋白酶抑制剂 |
| 4 结语 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 综述 中医药治疗高血压病 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在校期间主要研究成果 |
| 1 发表论文 |
| 2 科研课题 |
| 3 在校获奖情况 |
| 附录 |
（8）重组腺相关病毒载体介导的环状RNA circFBXW4在肝纤维化中的功能及机制研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验细胞 |
| 2.3 实验物品 |
| 2.4 仪器与设备 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 小鼠肝纤维化形成和逆转模型的建立 |
| 3.2 原位灌流小鼠原代细胞 |
| 3.3 circFBXW4 腺相关病毒载体的构建与鉴定 |
| 3.4 circFBXW4 腺相关病毒的包装 |
| 3.5 小鼠尾静脉注射腺相关病毒 |
| 3.6 血清谷丙转氨酶的测定 |
| 3.7 血清谷草转氨酶的测定 |
| 3.8 肝组织羟脯氨酸的测定 |
| 3.9 肝组织苏木精-依红染色(hematoxylin eosin,HE)染色 |
| 3.10 肝组织Masson染色 |
| 3.11 免疫荧光染色 |
| 3.12 免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色 |
| 3.13 肝星状细胞培养 |
| 3.14 脂质体介导细胞转染小干扰 RNA(small interfering RNA,siRNA) |
| 3.15 质粒大提和细胞转染 |
| 3.16 流式分析细胞周期 |
| 3.17 流式分析细胞凋亡 |
| 3.18 CCK8 细胞增殖试验 |
| 3.19 EDU-555 细胞增殖检测 |
| 3.20 DNA提取 |
| 3.21 双萤光素报告基因检测 |
| 3.22 RNA提取 |
| 3.23 细胞质、细胞核RNA分离提取 |
| 3.24 Real-time qPCR |
| 3.25 microRNA qPCR |
| 3.26 冰冻切片RNA荧光原位杂交 |
| 3.27 蛋白提取和变性 |
| 3.28 Western blot |
| 3.29 数据处理方法 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 小鼠肝纤维化模型的构建及鉴定 |
| 4.2 肝脏原代肝星状细胞中circRNAs高通量测序及分析 |
| 4.3 circFBXW4 在肝纤维化进展及逆转过程中的表达变化 |
| 4.4 环状RNA circFBXW4 的分子组成、稳定性及亚细胞定位 |
| 4.5 重组腺相关病毒载体介导的circFBXW4 过表达对小鼠肝纤维化的影响 |
| 4.6 慢病毒载体介导的circFBXW4 过表达对肝星状细胞活化,增殖及凋亡的影响 |
| 4.7 阳离子脂质体介导的circFBXW4 沉默对肝星状细胞活化及增殖的影响 |
| 4.8 原代肝星状细胞中micro RNA芯片检测及circFBXW4 ceRNA机制分析 |
| 4.9 miR-18b-3p对小鼠肝星状细胞活化的影响 |
| 4.10 原代肝星状细胞中circRNAs-microRNAs-mRNAs分子调控机制的研究 |
| 4.11 阳离子脂质体介导的FBXW7 过表达/沉默对肝星状细胞的影响 |
| 4.12 circFBXW4 靶向miR-18b-3p调控FBXW7 信号通路 |
| 5 讨论 |
| 5.1 第一部分:肝纤维化小鼠的原代肝星状细胞中差异表达的circRNAs高通量测序及分析 |
| 5.2 第二部分:重组腺相关病毒载体、慢病毒载体、阳离子脂质体介导circFBXW4 在体内、体外对肝纤维化和肝星状细胞活化的影响 |
| 5.3 第三部分:circFBXW4 通 过靶向miR-18b-3p调控FBXW7信号通 路的ceRNA机制研究 |
| 6 结论 |
| 7 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 环状RNA在肝脏相关疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
（9）基质金属蛋白酶对脑动脉瘤的影响及其相互关系研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 基质金属蛋白酶在脑动脉瘤形成和发展中的作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 血管内介入栓塞术和开颅夹闭术对MMPS、炎症因子、氧化应激因子和CASPASE3的影响 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 基质金属蛋白酶在脑动脉瘤形成发展中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词表 |
| 攻读学位期间以第一作者公开发表的论文 |
| 致谢 |
（10）老年病毒性肝炎病人继发肝硬化危险因素分析（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 检测方法 |
| 1.3 危险因素分析 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 2组血清MMP-2、TIMP-1、Cys-C和肝纤维化指标比较 |
| 2.3 病毒性肝炎继发肝硬化的单因素分析 |
| 2.4 病毒性肝炎继发肝硬化的多因素分析 |
| 3 讨论 |
四、肝硬化患者血清MMP-2和TIMP-1的测定及临床意义（论文参考文献）
- [1]活血软坚扶正方干预乙肝后肝纤维化的临床疗效研究及机制探索[D]. 田园硕. 北京中医药大学, 2021(08)
- [2]基于弹性蛋白合成及降解探讨益肝消积方干预早期肝硬化的机制研究[D]. 张嘉鑫. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]基于“精损络痹”理论探讨DKD肾精亏虚证与纤维化因子的关联性[D]. 史扬. 北京中医药大学, 2021(08)
- [4]NOX4在肝纤维化模型小鼠中的表达及与肝纤维化的关系[D]. 彭婕. 南昌大学, 2021(01)
- [5]吲哚丙酸（IPA）对四氯化碳（CCl4）诱导的小鼠肝纤维的作用及机制研究[D]. 刘菲. 西南医科大学, 2021(01)
- [6]痰湿壅盛型与阴阳两虚型高血压患者理化指标的差异性分析[D]. 王洁. 甘肃中医药大学, 2021(01)
- [7]阴虚阳亢型与阴阳两虚型高血压患者理化指标的差异性分析[D]. 马欢. 甘肃中医药大学, 2021(01)
- [8]重组腺相关病毒载体介导的环状RNA circFBXW4在肝纤维化中的功能及机制研究[D]. 陈鑫. 安徽医科大学, 2021(01)
- [9]基质金属蛋白酶对脑动脉瘤的影响及其相互关系研究[D]. 邹亮. 苏州大学, 2021(06)
- [10]老年病毒性肝炎病人继发肝硬化危险因素分析[J]. 王立蓉,俞谦,孟桂霞,殷国庆,王庆强,臧桂珍. 实用老年医学, 2020(06)
标签：阴阳两虚论文; 肝纤维化指标检查论文; 血清蛋白论文; 肝硬化论文; 健康论文;