一、暗纹东方鲀实用养殖技术（论文文献综述）
毕宜慧,张鑫宇,李杰,孙亦如,王浩哲,付东勇,尹绍武[1]（2021）在《暗纹东方鲀雌雄个体形态差异及其判别分析》文中认为为比较暗纹东方鲀（Takifugu fasciatus）雌雄个体之间的主要形态指标及形态差异,对296尾暗纹东方鲀的11项计量性状及11项比例性状进行了统计和分析。主成分分析结果显示,暗纹东方鲀22项形态指标可以划分为整体轮廓、整体及尾部的浑圆程度、头部特征、尾部长度比例4个方面,累积贡献率达72.31%。逐步判别分析最终筛选出眼径、肥满度、头长/体长、尾柄高/体长和体宽/体长5个相关变量,并建立了该鱼的性别判别函数。通过数据回代方程检验可得出暗纹东方鲀雌雄判别的综合正确率为81.1%。同时对筛选出用于建立判别函数的5个变量进行t检验,结果显示,尾柄高/体长、体宽/体长两个比例性状在雌雄个体间差异显着（P<0.05）,表明雌性个体较雄性个体尾柄处较厚,体型较宽。上述差异性状和雌雄判别函数可为暗纹东方鲀性别的鉴定提供参考方法和理论依据。
徐杰杰[2]（2021）在《暗纹东方鲀全基因组微卫星标记的开发及应用》文中研究指明暗纹东方鲀（Takifugu fasciatus）俗称河鲀,广泛分布于我国长江中下游、黄海及渤海等水域,是一种具有较高经济价值的水产养殖品种。近年来,随着暗纹东方鲀养殖产业不断扩大,环境污染和近亲交配等问题引起河鲀种质资源衰退严重。因此,亟需开发高效和实用的分子标记,对暗纹东方鲀进行种质改良,而目前鲀科鱼类已开发及可利用的分子标记较少,这已成为制约暗纹东方鲀分子标记辅助选育的主要“瓶颈”之一。本研究首先对暗纹东方鲀全基因组中微卫星（SSR）分布特征进行了分析,然后批量开发出暗纹东方鲀全基因组微卫星引物,最后对暗纹东方鲀生长性状相关的微卫星标记进行了筛选,并对暗纹东方鲀、红鳍东方鲀（Takifugu rubripes）、杂交东方鲀（暗纹东方鲀♀×红鳍东方鲀♂）三种鱼的鉴定和群体遗传多样性展开研究,该研究为后续暗纹东方鲀等鲀科鱼类杂交育种和分子标记辅助育种工作提供了参考资料。主要研究结果如下:1.暗纹东方鲀全基因组微卫星分布特征本研究利用暗纹东方鲀第二代基因组测序数据,使用MISA软件对暗纹东方鲀全基因组中的微卫星进行了筛选并分析。结果如下:在暗纹东方鲀约365 Mb的基因组序列中,共筛选出137293个完整型微卫星。微卫星总长度为2868151 bp,占基因组序列总长度的0.78%,相对丰度为375个/Mb。在1～6碱基类型微卫星中,单碱基类型数目最多,占完整型微卫星总数的47.72%。然后依次是二碱基（38.64%）、三碱基（7.45%）、四碱基（4.25%）、五碱基（1.44%）和六碱基类型（0.51%）。不同重复拷贝类型微卫星变化趋势总体是一致的,均随着核心序列拷贝数的增加,其微卫星数目递减。除了6种类型微卫星数量分布差异明显外,同种碱基类型不同类别的微卫星分布也有很大差别。暗纹东方鲀基因组中重复数目最多的10种微卫星类别依次为:AC、A、C、AG、GAG、AT、AAT、AGAGG、GGC和AAC,共125617个,占完整型微卫星总数的91.50%。2.暗纹东方鲀生长性状相关的微卫星标记筛选首先利用引物设计软件Primer 5.0,从暗纹东方鲀全基因组中批量开发微卫星引物,然后从中随机挑选100对引物进行质量检验,筛选出具有多态性的42对微卫星引物。最后运用卡方检验分析42个微卫星位点在该鱼极大群体和极小群体中的基因型分布差异,选择差异显着的7个微卫星位点对暗纹东方鲀随机群体进行基因型与多个生长性状的关联分析。结果表明,有5个微卫星位点不同基因型与暗纹东方鲀多个生长性状有显着关联。其中XH11位点AC为劣势基因型;XH63位点AB为优势基因型,BB为劣势基因型;XH94位点CC为优势基因型;XH96位点BC、CD两个为优势基因型,AB、CC和BG三个为劣势基因型。本研究筛选得到的与暗纹东方鲀生长性状相关的微卫星标记,可有效辅助优良亲本的选育。3.暗纹东方鲀、红鳍东方鲀及杂交东方鲀（暗纹东方鲀♀×红鳍东方鲀♂）的鉴定及群体遗传多样性的比较利用从暗纹东方鲀全基因组中开发并随机挑选的100对微卫星引物在暗纹东方鲀、红鳍东方鲀及杂交东方鲀中进行PCR扩增,成功筛选出微卫星标记XH77。经检验该标记扩增产物可在3种东方鲀中产生明显差别条带（暗纹东方鲀扩增出3个条带,位置分别处于150 bp、800 bp和1500 bp左右;红鳍东方鲀扩增出3个条带,位置分别处于150 bp、1000 bp和1800 bp左右;杂交东方鲀扩增出5个条带,位置分别处于150 bp、800 bp、1000 bp、1500 bp和1800 bp左右）,鉴定准确率为100%。利用21对微卫星引物在3种东方鲀群体中进行遗传多样性和亲缘关系分析。结果表明:暗纹东方鲀、红鳍东方鲀和杂交东方鲀群体的平均等位基因数分别为7、6和7,平均有效等位基因数分别为4.271、3.000和3.979,平均观测杂合度分别为0.691、0.596和0.673,平均期望杂合度分别为0.720、0.595和0.719,平均多态信息含量分别为0.668、0.542和0.672。杂交东方鲀群体遗传信息丰富度与暗纹东方鲀较为相似,其中杂交东方鲀群体遗传信息多态性更高。红鳍东方鲀群体遗传多样性程度最低。暗纹东方鲀和杂交东方鲀间的遗传距离（1.135）小于红鳍东方鲀和杂交东方鲀间的遗传距离（1.185）,暗纹东方鲀和红鳍东方鲀间的遗传距离（1.843）最大。进化树聚类结果表明杂交东方鲀和暗纹东方鲀先聚为一支,然后二者与红鳍东方鲀聚为一支。以上遗传信息均表明,杂交东方鲀与母本暗纹东方鲀的亲缘关系更近,偏母系遗传。
姚静婷[3]（2020）在《菜粕及水解单宁对暗纹东方鲀及草鱼健康及营养代谢的影响》文中提出1.水解单宁对暗纹东方鲀摄食偏好、消化代谢和抗氧化能力的效应研究为了解菜粕替代鱼粉时单宁发挥的作用,配制四组等氮等能饲料饲喂初重（39.84±3.09）g的暗纹东方鲀（Takifugu fasciatus）56天。以含43%鱼粉的实用基础饲料OT0为对照;另设置三个不同的鱼粉用量组,用酪蛋白平衡蛋白质含量,并添加0.25%（OT1）,0.75%（OT2）和1.25%（OT3）的水解单宁,使酪蛋白:水解单宁≈菜粕中蛋白含量:菜粕中单宁含量=16.8:1。结果显示,随饲料单宁含量增加,增重率提高（P>0.05）,饲料系数显着下降（P<0.05）。肌肉粗脂肪含量OT2组显着高于OT0及OT1组（P<0.05）,对照组中肌肉氨基酸水平显着高于其他组（P<0.05）。肝脏抗氧化指标中,OT3组丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性显着高于其他组（P<0.05）,总抗氧化能力（T-AOC）对照组显着高于其他组（P<0.05）。血清抗氧化指标中,三个单宁组MDA含量均显着高于对照组,过氧化氢酶（CAT）活力显着下降（P<0.05）;血清谷丙转氨酶（GPT）活性先升后降,与肝脏趋势一致,OT2与OT3组血清总蛋白（TP）含量均显着低于其他组（P<0.05）。肠道淀粉酶活性先升后降,胃和肠道中的蛋白酶活显着上升（P<0.05）,胃脂肪酶活性显着下降（P<0.05）。OT3组苦味受体T2R1表达量在舌尖和肠道均显着高于对照组（P<0.01）;肝脏热休克蛋白HSP70表达量OT0组显着高于OT3（P<0.05）;驯化前暗纹东方鲀摄食偏好随单宁含量增加显着下降（P<0.05）,驯化8周后,四组实验鱼对OT2饲料的偏好程度均显着高于OT0,OT0饲料高于OT1,OT3组最低（P<0.05）。结果表明,在该实验水平下,1.25%及以下水解单宁对暗纹东方鲀生长无负面影响,一定程度上对饲料有节约作用;单宁含量在1.25%时会损伤蛋白质消化及代谢能力,损伤肝脏健康及抗氧化能力;用含有单宁的饲料驯化暗纹东方鲀可显着提高其对单宁含量为0.75%的饲料的偏好程度并提高对苦味的接受能力。2.饲料中菜粕对暗纹东方鲀抗氧化及肠道健康的影响为了评价饲料中菜粕（RM）对暗纹东方鲀的影响,配制四组等氮等能饲料,分别含有0、10%、20%及30%的菜粕（OR0、OR10、OR20、0R30,单宁含量与实验1相当）,饲喂初重37.93±2.41的暗纹东方鲀56天。结果表明,OR0和OR10的增重率明显高于OR30（P<0.05）,饲料系数则呈相反趋势。肝脏中,OR20和OR30的MDA含量和CAT活性显着高于OR0,OR10最低（P<0.05）,OR0和OR10的SOD活性显着低于其他组（P<0.05）,T-AOC和谷胱甘肽（GSH）含量随菜粕水平升高,谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性则显着降低（P<0.05）。血清中CAT、SOD活性及ALB含量随菜粕水平升高而下降（P<0.05）,MDA含量和GPT活性升高（P<0.05）,OR0及OR10组总蛋白（TP）含量显着高于其他组（P<0.05）,OR20和OR30组谷丙转氨酶（GPT）及谷草转氨酶（GOT）活性显着高于其他组（P<0.05）。肠道中,MDA含量随菜粕水平升高而增加（P<0.05）,SOD活性先升高,后于OR20组下降（P<0.05）。OR0组和OR10组CAT活性显着高于其他各组（P<0.05）。后肠OR0组肠皱褶高度高于OR10和OR30组（P<0.05）,OR30组组织形态明显受损。肠道中TGFβ1的相对表达水平随菜粕增加显着上调（P<0.05）,OR30组IL-1表达量显着高于OR0组（P<0.05）,OR20组IL-8表达水平显着高于OR10,OR0及OR30最低（P<0.05）,肝脏HSP70则显着下调（P<0.05）,OR30组TNFα在肠道中的相对表达高于其他组（P<0.05）。因此,在该实验水平下,20%及以上的菜粕可诱导河豚的氧化应激,破坏后肠结构,引起肠道炎症。3.饲料中菜粕对暗纹东方鲀营养代谢的影响及代谢组学初步研究为探究菜粕对暗纹东方鲀营养代谢的影响,就第二章中的实验鱼进行进一步检测。结果表明,暗纹东方鲀肌肉脂质含量随RM水平的增加而显着降低（P<0.05）,灰分则呈相反趋势（P<0.05）,OR30组蛋白含量显着低于其他组（P<0.05）。OR30组肌肉必需氨基酸、非必需氨基酸和总氨基酸的百分比明显低于其他组（P<0.05）。OR0组肌肉饱和脂肪酸（SFA）比例显着高于其他组（P<0.05）。肝脏中,GPT活性随RM水平增高而下降（P<0.05）,OR0组的GOT活性显着高于其他各组（P<0.05）,MDA含量先下降后上升（P<0.05）。血清中OR0及OR10组的总蛋白、白蛋白、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量均显着高于OR20及OR30组（P<0.05）。OR30的尿素氮含量显着高于OR0（P<0.05）,OR10和OR20最低。血清中甘油三酸酯（TG）和总胆固醇（TC）含量随RM显着升高（P<0.05）。OR30组的低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量明显高于OR20（P<0.05）,OR20组高于OR0,OR10组最低。肠道淀粉酶、蛋白酶及脂肪酶活性显着下降（P<0.05）。胃中OR20的淀粉酶活性显着高于OR10和OR30（P<0.05）,OR0最低,脂肪酶活性下降（P<0.05）,蛋白酶活性呈相反趋势（P<0.05）。肝脏中,OR20中脂肪酸合成酶（FAS）的相对表达量明显高于OR0（P<0.05）,OR30及OR10最低。OR10中脂蛋白脂酶（LPL）的相对表达低于OR0（P>0.05）,OR30显着高于OR20（P<0.05）,OR20高于OR10（P<0.05）。肉碱转移酶（CTP1β）的相对表达量OR10显着高于OR30（P<0.05）,OR0和OR20最低。肠道中,GDH1的相对表达量显着上调（P<0.05）。在代谢组学分析结果表明,河豚肝脏中,OR0和OR10组间共鉴定出29个差异代谢物,与OR0组相比,OR10中有22个代谢物下调,7个代谢物上调。OR0与OR30组间有57个SDMs,与OR0组相比,OR30中有41个代谢产物下调,16个代谢产物上调。OR10与OR30组间有31个SDMs,与OR10组相比,OR30中有26个代谢产物下调,5个代谢产物上调。这些差异代谢物中,部分标志性代谢物与蛋白质及脂质代谢相关。说明在该实验水平下,20%及以上含量的菜粕抑制了蛋白质的吸收和生物合成,对脂质吸收也产生了不利影响,营养物质代谢的改变可能与这几条代谢通路有关:柠檬酸循环、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、酪氨酸代谢、烟酸和烟酰胺代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸的代谢,丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代谢。4.饲料中水解单宁及菜粕对草鱼抗氧化能力及肠道、肝胰脏健康的影响为了评价饲料中菜粕对草鱼抗氧化能力和机体健康的影响,及该过程中单宁发挥的作用,配制八组等氮等能饲料,其中四组为半纯化饲料,以酪蛋白及明胶为主要蛋白源,添加0%（GT0）,0.75%（GT1）,1.25%（GT2）和1.75%（GT3）的水解单宁;另外四组为实用饲料,分别含有0（GR0）、30（GR30）、50（GR50）及70（GR70）的菜粕,且单宁的含量与半纯化饲料组相当。使用八组饲料饲喂草鱼56天后。半纯化组中,各组草鱼之间的存活率和增重率无显着差异（P>0.05）,GT2组草鱼的摄食率及饲料系数显着高于GT0组（P<0.05）。肝胰脏中,随菜粕含量增加,MDA含量明显升高,后于GT3组下降（P<0.05）,GT0和GT1组SOD活性显着低于其他组（P<0.05）,GT3组CAT活性显着高于GT0组（P<0.05）,GT1组T-AOC高于GT0,GT0组高于GT2和GT3组（P<0.05）。血清中SOD活性先升高后于GT3组降低（P<0.05）,GOT活性与SOD趋势相反（P<0.05）,GT2的GPT活性明显高于GT1（P<0.05）,GT0组总抗氧化能力显着高于GT1及GT3,GT2最低（P<0.05）。头肾溶菌酶活性、肠内MDA含量及SOD活性随单宁含量增加显着升高（P<0.05）,而肠道及肝胰脏中GPx活性、GSH含量与单宁呈负相关（P<0.05）。添加单宁组后肠皱褶高度明显降低,组织形态学受损。GT0组肠道中IL-8m RNA和Nrf2m RNA的相对表达明显低于其他各组（P<0.05）,IL-10m RNA的表达随单宁含量增加而上调（P<0.05）。Keap1在GT2组中的相对表达明显高于GT1,GT0最低（P<0.05）。实用组中,存活率和增重率无显着变化（P>0.05）,GR70组草鱼的饲料系数显着高于其他组（P<0.05）。肝胰脏中,GR50组MDA显着高于其他组（P<0.05）。GR70组SOD活性显着高于其他组（P<0.05）,GR50组CAT活性显着高于GR70,GR0及GR30最低（P<0.05）。总抗氧化能力GR50组显着高于GR30,GR0及GR70最低（P<0.05）。GSH含量随RM水平显着降低（P<0.05）,GR30组GPx活性显着高于GR0,GR0组高于GR50组,GR70组最低（P<0.05）。血清中SOD活性随菜粕含量增加而升高（P<0.05）,T-AOC显着降低（P<0.05）,GR70组GPT活性显着低于其他组（P<0.05）,GR70组GOT活性显着高于GR30组,GR0组最低。在肠道中,草鱼MDA含量和SOD活性随菜粕含量增加显着升高（P>0.05）,GPx活性和GSH含量则明显降低（P<0.05）。在头肾中,GR50和GR70溶菌酶活性明显高于GR0和GR30（P<0.05）,ACP活性下降（P<0.05）。GR50及GR70组后肠组织形态受损。GR70组IL-8m RNA在肠道的表达量显着高于其他组,IL-10m RNA表达量随饲料中菜粕含量增加显着上调（P<0.05）,GR0组Nrf2RNA的表达量显着高于GR30及GR50（P<0.05）。Keap1在GR30组中的相对表达明显高于GR50,GR50高于GR70,GR0最低（P<0.05）。本研究发现在该实验条件下,50%的菜粕和0.75%的水解单宁可诱导草鱼产生氧化应激,损伤抗氧化能力,破坏后肠结构,引起肠道炎症。5.水解单宁对草鱼营养代谢的影响为探究饲料中可水解单宁对草鱼营养代谢的影响,对第四章中用含有0、0.75、1.25、1.75%单宁的半纯化饲料（GT0、GT1、GT2、GT3）饲喂56d的草鱼检测营养指标及各项生理生化指标。结果表明,GT0和GT3组的肌肉蛋白含量显着高于GT2,GT1组最低（P<0.05）,而GT0组的脂质含量显着高于其他各组（P<0.05）。GT0组肌糖原及肝糖原含量显着低于其他组（P<0.05）。GT3组肌肉饱和脂肪酸的比例显着高于GT0,GT1及GT2组最低（P<0.05）,GT3组单不饱和脂肪酸比例显着高于其他组（P<0.05）,GT1和GT2组多不饱和脂肪酸比例显着高于GT0,GT3最低（P<0.05）。随着饲料中单宁水平的升高,肠道中蛋白酶和淀粉酶活性显着升高（P<0.05）,GT0和GT1组的脂肪酶活性显着高于GT2和GT3组（P<0.05）。肝脏GPT活性随单宁水平升高而降低（P<0.05）,GT2与GT3组GOT活性显着低于其他组（P<0.05）。GT2血清TP明显高于GT0和GT1,GT3最低（P<0.05）,GT2球蛋白明显高于GT0和GT3,GT1最低（P<0.05）,而GT1的白蛋白显着高于其他组（P<0.05）。GT0组尿素氮显着高于其他各组（P<0.05）,甘油三酯、总胆固醇含量随单宁水平显着升高,于GT3组降低（P<0.05）,LDL-C含量先升后降（P<0.05）,HDL-C显着降低（P<0.05）。随着饲料中单宁含量的增加,肠道TOR m RNA表达显着上调（P<0.05）。在肝脏中,葡萄糖激酶在GT1中的表达明显高于GT2,GT2高于GT0,GT3中的表达最低（P<0.05）,而丙酮酸激酶在GT2中的表达明显高于GT0和GT1,在GT3中最低（P<0.05）。GT3中脂蛋白脂肪酶表达随单宁水平升高而上调,于GT3组下调（P<0.05）,脂肪酸合成酶表达随单宁含量增加而下调（P<0.05）。综上所述,在不影响生长的情况下,该实验水平的草鱼能耐受1.75%的单宁。然而,1.25%的水解单宁影响了蛋白质的消化和代谢,减少脂质沉积,促进了糖类的利用。6.饲料中菜粕对草鱼营养代谢的影响为探究饲料中可菜粕对草鱼营养代谢的影响,对第四章中用含有0、30、50、70%菜粕的饲料（GR0、GR30、GR50、GR70）饲喂56d的草鱼检测营养指标及各项生理生化指标。结果表明,草鱼肌肉灰分及肌糖原含量随菜粕水平增加而增加（P<0.05）,蛋白及脂肪水平则显着降低（P<0.05）。肌肉必需氨基酸、非必需氨基酸和总氨基酸的比例在各组间无显着差异（P>0.05）。GR50组饱和脂肪酸比例低于GR70和RG30组,GR0组最高（P>0.05）,GR0组单不饱和脂肪酸比例显着低于其他组（P<0.05）,GR50组多不饱和脂肪酸比例高于GR0组,GR0组高于GR30和GR70（P>0.05）。草鱼肠道蛋白酶活性随菜粕水平显着升高（P<0.05）,GR50组淀粉酶活性显着高于GR70,GR0及GR30最低（P<0.05）,而脂肪酶活性显着降低（P<0.05）。肝胰脏中,GOT活性随单宁含量降低,GPT活性显着降低,于GR70组上升（P<0.05）,GR0组的肝糖原含量显着低于其他组（P<0.05）。血清中,GR50组总蛋白含量显着高于其他组（P<0.05）,GR50及GR70组白蛋白含量显着低于GR0及GR30组（P<0.05）,球蛋白水平则相反（P<0.05）。尿素氮含量随菜粕水平显着降低（P<0.05）。甘油三酯含量随菜粕水平的增加而降低,于GR70组升高（P<0.05）,GR30组总胆固醇含量显着高于GR0及GR50,GR70组最低（P<0.05）。GR30的LDL-C含量显着高于GR50,GR0及GR70最低（P<0.05）,GR70组HDL-C含量显着低于其他组（P<0.05）。肠道中GR0组TOR m RNA表达量显着高于GR70,GR30及GR50最低（P<0.05）。肝胰脏中,GR50组葡萄糖激酶表达量显着高于GR0及GR30组,GR70最低（P<0.05）,GR30组丙酮酸激酶表达量显着高于其他组（P<0.05）。脂蛋白脂酶相对表达随着菜粕含量的增加显着上调,于GR70组降低（P<0.05）。GR50及GR0组脂肪酸合成酶表达量显着高于GR30及GR70（P<0.05）。综上所述,30%的菜粕水平对草鱼糖类利用可能有一定的促进作用。但30%以上的菜粕会影响该规格草鱼对蛋白质的消化和代谢,而50%以下的菜粕对脂肪的利用及减少脂肪沉积有着一定的促进作用。7.饲料中单宁及菜粕对草鱼肠道菌群和营养代谢的影响及代谢组学初步研究为探究菜粕对草鱼营养代谢的影响及单宁在此过程中发挥的作用,使用四组饲料饲喂草鱼56天。其中两组为实用饲料:GR0饲料含有10%鱼粉,GR50饲料含50%菜粕而无鱼粉;另外两组为半纯化饲料,分别添加了0（GT0）和1.25%（GT2）的水解单宁。GR50饲料中的单宁含量与GT2接近。结果表明,GR50组草鱼的增重率显着低于GR0（P<0.05）,而GT2组的饲料系数显着高于GT0（P<0.05）。与相应处理组相比,GR50和GT2的肌肉脂质和蛋白质含量明显低于GR0及GT0组（P<0.05）,而肌糖原含量则相反（P<0.05）。GT2组肌肉PUFAs比例明显高于GT0组（P<0.05）,GR50组SFAs比例显着低于GR0组（P<0.05）。肠道中,GR50及GT2组蛋白酶及淀粉酶活性显着高于相应的对照组（P<0.05）,而脂肪酶活性则相反（P<0.05）。与相应对照组相比,GT2和GR50组肝胰脏中的GOT和GPT的活性显着低于相应对照组（P<0.05）,而肝糖原和丙二醛含量则相反（P<0.05）。血清中,总蛋白、球蛋白和甘油三酯含量在GT2和GR50组均显着高于GT0及GR0组（P<0.05）。代谢组学分析结果表明,肝胰脏中,GT0和GT2组间共鉴定出29个差异代谢物,与GT0相比,GT2组中有23个代谢物下调,6个代谢物上调。GR0与GR50组间鉴定出92个差异代谢物,与GR0相比,GR50中有31个代谢物下调,61个代谢物上调。单宁添加组和菜粕添加组的肠道菌群多样性均高于相应对照组,说明肠道环境受到干扰,部分产生消化酶的细菌的丰度增加,可能参与营养物质的消化。综上所述,1.25%的单宁含量不是GR50组草鱼生长不良的主要原因,菜粕可能改善了饲料中油脂的利用,但抑制了蛋白质的代谢;菜粕中的单宁可能是引起蛋白质和脂质代谢异常的部分原因,水解单宁对糖代谢有一定的促进,但菜粕中所含的单宁似乎比外源性水解单宁添加物具有更复杂的作用。这些营养物质代谢的改变可能与下列代谢通路有关:β-丙氨酸代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、谷胱甘肽代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、不饱和脂肪酸合成、缬氨酸,亮氨酸和异亮氨酸生物合成,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸的代谢此外,单宁和菜粕可调节肠道菌群,可能通过发酵饲料中的营养、产生消化酶、调节益生菌等来调节肠道功能。
张鑫宇[4]（2020）在《暗纹东方鲀HTR4、TGF-β1和CIRP基因的克隆、表达分析及SNP位点开发》文中研究指明暗纹东方鲀（Takifugu fasciatus）是一种北温带暖水洄游性经济鱼类,目前该鱼主要依靠人工繁育种群来填补市场需求。但由于长时间驯养,其人工繁育种群出现近亲繁殖,生长速度减缓;此外,冬季寒潮侵袭也会给暗纹东方鲀养殖业造成严重损失。本文从分子辅助育种角度出发,克隆了暗纹东方鲀与生长和耐寒性能3个相关基因,血清素受体4（HTR4）、转化生长因子β1（TGF-β1）和冷诱导结合蛋白（CIRP）,并分别分析了其结构功能与表达特征,在此基础上开发出生长和耐寒性相关的SNP位点。这些结果有望为暗纹东方鲀分子辅助育种提供一定的理论依据,也为该鱼良种选育提供基础资料。主要研究结果如下:1.暗纹东方鲀HTR4、TGF-β1和CIRP基因的克隆与分子特征分析以RACE技术克隆了暗纹东方鲀HTR4、TGF-β1和CIRP 3个基因,其中暗纹东方鲀HTR4 c DNA全长序列共2302 bp,其中5’UTR 662 bp,3’UTR 470bp,开放阅读框（ORF）1170 bp,产物分子量为43392.36,理论等电点为9.31,理论分子式为C1957H3087N527O517S35;TGF-β1 c DNA全长序列共2217 bp,包含5’UTR 51 bp,3’UTR 1014 bp,ORF 1152 bp,产物分子量为44233.70,理论等电点为8.34,理论分子式为C1957H3089N531O588S24;CIRP c DNA全长序列共775 bp,包含5’UTR 106 bp,3’UTR 144 bp,ORF 525 bp,产物分子量为18926.32,理论等电点为9.00,理论分子式为C801H1226N254O274S4。HTR4 ORF中端有一段约288 AA（氨基酸,amino acid）的类视紫红质受体蛋白结构域,末端371～385 AA部分存在低复杂度区（LCR）;TGF-β1 ORF前端有一段约237 AA的TGF-β1前肽结构域,序列末端有一段97 AA的TGF-β1结构域;CIRP ORF前端有一段约74 AA的古老保守RNA识别基序,93～122 AA和126～152 AA之间存在着两段LCR。多序列比对发现3个基因序列均与同属鱼类红鳍东方鲀的最为相似。2.暗纹东方鲀HTR4、TGF-β1和CIRP基因的组织表达特征分析暗纹东方鲀发育周期可根据性腺发育状态被划分为5个发育时期（I期、II期、III期、IV期和V期）。应用q RT-PCR技术分别检测了暗纹东方鲀5个发育时期的8种不同组织（心脏、肝脏、脑、脾脏、肾脏、肌肉、中肠、鳃）3个基因的相对表达量。结果显示HTR4基因在8种不同组织均有表达,在脑与中肠的表达量显着高于其它组织的表达量,且具有在各组织“I期相对表达量高,II期稍有下降,下降趋势至III期时停止,IV期相对表达量回升,V期降至全时期最低”的时序分布特征;TGF-β1基因在暗纹东方鲀8种不同组织都有表达,肾脏表达量最高,心脏表达量次之,在各组织具有“先下降后上升”的时序分布特征;CIRP基因在暗纹东方鲀8种不同组织都有表达,5个时期中,脑CIRP相对表达量显着高于其它所有组织,于第V期达到最高,并在II、III期时降至最低,在第III期肾脏的CIRP相对表达量为全时期各组织最低,其余各时期各组织间差异不显着。3.暗纹东方鲀HTR4、TGF-β1和CIRP的SNP位点开发通过直接PCR扩增法对HTR4、TGF-β1和CIRP进行多片段比对,在3个基因上各发现一个有效SNP位点。结果显示:HTR4上的SNP c.1202 C>G位点与暗纹东方鲀肥满度显着相关,CC型个体肥满度优于同时期其它基因型个体;TGF-β1上的SNP g.3908 C>A位点与暗纹东方鲀多项生长性状有关,CC型个体体宽、肥满度较高,体高、头长、体长较短;CIRP上的SNP g.567 A>T位点呈AA型的个体比同时期其它基因型个体耐低温性能提升了6.67%。
高莹莹,刘新富,胡鹏,刘滨,郭正龙[5]（2019）在《暗纹东方鲀sox9基因的克隆和组织表达分析》文中进行了进一步梳理为初步探究暗纹东方鲀sox9基因在性腺发育和性别分化过程中的作用,通过设计兼并引物、RACE及荧光定量PCR技术,成功克隆出暗纹东方鲀sox9基因的cDNA全长序列,并分析其相应的生物信息学特征及其在雌雄个体的组织表达水平。结果表明:sox9a基因cDNA全长为1 248 bp（NCBI登录号:MH218818）,包括684 bp的ORF,编码227个氨基酸,297 bp的5′UTR和267 bp的3′UTR。sox9b基因全长为1 941 bp（NCBI登录号:MH218819）,包括1 470 bp的ORF,编码489个氨基酸,306 bp的5′UTR和165 bp的3′UTR。同源性和系统发育分析结果表明暗纹东方鲀sox9基因与红鳍东方鲀同源性最高,亲缘关系最近。氨基酸多重序列比对结果显示两个Sox9氨基酸序列的HMG box结构域在哺乳动物和鱼类中均高度保守。荧光定量PCR分析显示两个sox9基因普遍存在于雌鱼和雄鱼的各个组织中,且均在雌鱼下丘脑中表达量最高,在精巢中有少量表达,卵巢中几乎不表达。总体来说,除少数组织外,两个sox9基因在雌鱼组织中的表达量普遍高于雄鱼。本研究为了解暗纹东方鲀sox9的遗传特性及相关的生理功能,探索性别分化与性腺发育的分子调控机制提供理论依据。
谢晓霞[6]（2019）在《文蛤与蓝蛤鲜味肽的呈味特性及其与鲜味受体T1R1/T1R3的分子作用研究》文中认为文蛤（Meretrix meretrix（Linnaeus））和蓝蛤（Aloididae aloidi）是我国北方常见经济贝类,含有较多呈味物质,味道鲜美,但对其鲜味肽的研究尚不多见。本文以文蛤和蓝蛤为研究对象,采用传统水煮和酶解处理,制备富含呈味肽的呈味基料,对其中的挥发性风味物质和滋味物质进行分析,探讨不同风味物质对呈味基料鲜味的影响;利用多种分离纯化手段,结合感官评价和电子舌分析筛选鲜味组分,采用基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱（MALDI-TOF/TOF MS）鉴定鲜味肽的一级序列,采用固相合成法合成小分子肽,并采用感官分析结合电子舌验证和分析合成肽的呈味特性;采用同源建模构建鲜味受体T1R1/T1R3的三维结构,并利用分子对接手段研究鲜味肽（配体）与鲜味受体T1R1/T1R3间的分子作用,以期揭示其呈鲜机制。1.采用传统水煮和酶解处理,制备得到文蛤水煮液、蓝蛤水煮液、文蛤酶解液和蓝蛤酶解液四种呈味基料,对其中的滋味物质和挥发性风味物质进行分析。结果显示,四种呈味基料中的呈味物质和挥发性物质具有一定差异,主要表现在:水煮液中甜鲜味物质（甜味氨基酸、呈味核苷酸、琥珀酸）含量高于其贝肉酶解液中的含量,其中丙氨酸、琥珀酸和氯离子对滋味起重要作用。水煮液中可溶性肽的含量显着低于酶解液,其余滋味物质(如鲜味氨基酸、PO43-)的含量并无显着性差异。此外,文蛤水煮液中鲜味物质含量总体比蓝蛤水煮液偏高,这解释了水煮文蛤比蓝蛤味道更鲜的原因。四种呈味基料中鉴定出的挥发性成分的种数分别为37种、37种、36种、44种,主要包括醛类、醇类、酮类、烃类、酯类、酚类和含N/O/S化合物,其中相对含量较高的为醛类和含N/O/S化合物,四种呈味基料气味的差异主要体现在氮氧化合物上。电子舌结果显示,四种呈味基料的整体滋味轮廓相似,除咸味和丰富度有略微差异外,其他滋味无明显差异。2.将四种呈味基料经超滤、凝胶层析色谱分离后,依次获得具有鲜味活性的组分WS-5、LS-3、WM-4和LM-3。将鲜味组分进一步通过反相高效液相色谱（RP-HPLC）纯化,并采用MALDI-TOF/TOF MS对鲜味组分中的主成分WS-5-Ⅰ、LS-3-Ⅱ、WM-4-Ⅱ和LM-3-Ⅱ进行结构鉴定,其中从WS-5-Ⅰ中成功鉴定出了GLLPDGTPR（WS-5-I-a）、RPNPFENR（WS-5-I-b）、STMLLESER（WS-5-I-c）、ANPGPVRDLR（WS-5-I-d）、QVAIAHRDAK（WS-5-I-e）、VLPTDQNFILR（WS-5-I-f）、VTADESQQDVLK（WS-5-I-g）七种肽段,其它组分中未能鉴定到肽段。3.根据鉴定序列采用固相合成法合成小分子肽,并采用感官分析结合电子舌验证和分析合成肽的呈味特性。结果显示,合成的七种肽段均具有鲜味,经验证为鲜味肽,其呈鲜阈值均为0.125 mg/mL;将其加到模拟肉汤后,均具有提升鲜味和咸味的效果,并且鲜味的提升效果优于咸味。利用SWISS-MODEL server构建鲜味受体T1R1/T1R3的三维模型,并采用Discovery Studio软件对模型进行优化,通过拉氏图对优化后的模型进行评估,允许区的氨基酸残基占94.29%,不允许区的氨基酸残基占5.71%,受体的同源建模结果可信,可以作为对接受体。采用Discovery Studio软件进行鲜味肽与鲜味受体T1R1/T1R3的分子对接,结果显示,七种鲜味肽均通过嵌插到T1R3亚基的“捕蝇夹域”中与鲜味受体T1R1/T1R3结合;七种鲜味肽与鲜味受体T1R1/T1R3间的作用力主要为氢键作用、疏水相互作用、静电相互作用和范德华力;鲜味肽与鲜味受体T1R1/T1R3结合的对接总能量与其长度无相关性;鲜味肽与鲜味受体T1R1/T1R3结合的关键氨基酸残基是Asp196、Glu128、His125、His368、Glu281和Arg34。
文鑫[7]（2019）在《暗纹东方鲀（Takifugu fasciatus）应对低温胁迫的生理响应和分子机制研究》文中认为本论文以暗纹东方鲀为研究对象,首先运用转录组学、蛋白质组学、代谢组学等高通量测序的方法对低温胁迫下暗纹东方鲀的应答机制进行研究;随后在此基础上,进一步探讨盐度对暗纹东方鲀在低温环境下的肝功能、免疫、氧化应激、脂代谢、p38MAPK、凋亡、存活等方面的影响。以期在分子水平上系统阐明暗纹东方鲀应对低温胁迫的分子调控机制,同时为暗纹东方鲀的安全越冬提供一定的理论依据。本论文的主要研究结果如下:1.多组学联合分析暗纹东方应对低温胁迫的分子机制在转录水平,总共有5166个差异基因被发现,其中包含2544个上调和2622个下调基因。对这些差异基因进行GO富集分析发现,暗纹东方鲀应对低温胁迫所调控的基因主要聚集在binding,ion binding,intracellular,intracellular part,cellular response to DNA damage stimulus,macromolecule catabolic process等生物学GO簇。此外,通过KEGG的分析,暗纹东方鲀肝脏的一些重要的通路参与了低温胁迫的调控,例如ibosome biogenesis in eukaryotes,glyoxylate and dicarboxylate metabolism,RNA transport,PPAR signaling pathway,fatty acid biosynthesis。在翻译水平,基于iTRAQ蛋白质组学技术鉴定了3741个蛋白,包含160个差异蛋白,其中53个上调和107个下调的蛋白。随后,通过qRT-PCR验证HSP90、CIRB、GST、RAP1A、ERBB2、FLNB、RPS6KA、DAAO、COX5A、A2ML1、CAB 39等11个基因;PRM验证HSP90、CIRB、GST、FLNB、A2ML1等蛋白的丰度,证实了数据的可靠性和可重复性。通过分析,KEGG富集到了MAPK和Wnt两个信号转导相关的通路。根据分析的结果,将这些蛋白聚焦到三个主要的小组,分别是造成损伤的氧化应激（9个蛋白HSP90、CIRP、CSDE1、DAAO、GST、ZIP7、RDH12、TFRC1、QSOX1）、与运输相关的线粒体酶（11个蛋白:PRODH、TOMM20、OAT、Ucp1、C8G、COX5A、ATP5J、GATA、MPC1、PNPT1、THRS）、以及信号转导（13个蛋白:RAP1A、ERBB2、FLNB、RAC1、RPS6KA、CAB39、CSNK1A、IMPA1、MTM14、PIK3、G protein、PLCB、CACYBP）。在代谢水平,基于HILIC UHPLC-Q-TOF MS技术的代谢组学方法进行代谢轮廓的变化分析。QC样本谱图比对、主成分（PCA）、正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）的实验表明,本次实验的仪器分析系统稳定性较好,试验数据稳定可靠,在实验中获得的代谢谱差异能反映样本间自身的生物学差异。总共有4085个阳离子峰和5379个阴离子峰被鉴定。经进一步鉴定,共筛选到40个差异代谢物,其中9个下调和31个上调。将差异代谢物所参与的调控通路整合分析发现,脂类代谢类别的通路以及参与这些通路的差异代谢物最多,这说明脂类代谢在暗纹东方鲀应对低温胁迫时发挥了关键作用。联合转录-蛋白-代谢的多组学分析发现,暗纹东方鲀低温耐受机制聚焦到20条通路,其中有14个上调和3个下调的差异代谢物,8个上调和3个下调以及3个相反趋势的基因参与了这些通路。将这些差异代谢物和差异共表达基因进行相关性整合发现,它们的互作关系主要分为了两支,一支主要以胆汁盐（bile salts）的跨膜运输为主,而另一只主要以不饱和脂肪酸（unsaturated fatty acids）,维生素（vitamins）、腺苷（adenosine）为主。说明暗纹东方鲀主要通过增强不饱和脂肪酸的代谢,胆汁盐的运输,维生素摄取和抗氧化能力来实现低温耐受调控。此外,对多组学联合分析得到具有一致趋势的11个差异基因进行SNP预测,总共有23个潜在的SNPs位点被检测到。通过对50尾个体暗纹东方鲀的DNA进行SNP位点验证,总共有13个SNP位点呈现阳性,预期可作为暗纹东方鲀耐寒性状的分子标记。2.低温下盐度对暗纹东方鲀生理生化的影响多组学联合分析的研究发现,低温会影响信号转导、氧化应激、线粒体酶等相关基因和蛋白的表达,进而阻碍肝脏的正常代谢,改变氧化应激水平、脂质代谢水平、免疫系统。进一步研究发现,添加适宜的盐度后,能够有效缓解低温带来的压力。具体表现在:（1）降低氧化应激水平。在13℃和17℃下,添加10ppt的盐能够显着降低Cortisol、GSH-PX、MDA的浓度以及HSP90基因和蛋白的表达。（2）缓解脂质代谢程度。10ppt盐度的刺激能使T-CHO在13℃和17℃都显着上调。相反的,GLU和TG则呈现上调的趋势,并且在13或17℃时,添加10ppt盐后都使得它们含量下调。（3）改变相关免疫系统,如ALT、AST、IgM、LZM的活性,Gran、RBC、LYMPH的数量,以及IFN、IFNR、IL-4、IL-4R的表达在低温和盐度的综合作用下,都发生了显着的改变。（4）改变p38MAPK及其磷酸化蛋白的表达,以及p38MAPK下游转录因子ATF2、ElK-1、MEF2、P53基因的表达。这些基因和蛋白的变化相应的改变了不同处理下的暗纹东方鲀存活率以及肝脏细胞的凋亡指数。13℃和17℃时,盐度10ppt处理组出现死亡的时间均比0ppt和20ppt延迟。在13℃下,10盐度相对于0盐度处理能够明显减少死亡率,且随着处理时间的增加更为显着。相似的,0ppt和10ppt的盐度下,凋亡水平都会随着温度的下降而升高。并且盐度10ppt在13℃和17℃条件下,相对于盐度0ppt和20ppt,能够显着降低凋亡水平。21℃时三种盐度都无法显着改变凋亡水平。2025（20ppt,25℃）的处理则呈现高凋亡水平。这些结果表明,盐度与低温之间存在调节暗纹东方鲀生理平衡的机制。
张迪[8]（2019）在《食品安全规制对海水鱼养殖产业发展的影响研究 ——以大菱鲆和河鲀养殖产业为例》文中研究说明中国海水养殖产业自养殖产量超过捕捞量以来,取得了一系列令人瞩目的成就,但是随着国际性的食品安全问题的出现,我国海水养殖产品的安全问题也同样需要重视,特别是海水鱼养殖产业在发展过程中存在的,如大菱鲆养殖产业出现的两次“多宝鱼事件”等恶性问题更需要养殖生产者及政府规制者的关注。为解决我国海水鱼养殖产品的食用安全问题,促进海水鱼养殖产业的健康可持续发展,需要加强政府规制者对海水鱼养殖产业的规制,而其所依据的理论基础是由于食品市场中普遍存在的外部性和信息不对称等引发的市场失灵。然而,食品安全规制对海水鱼养殖产业发展存在什么样的影响尚待研究。本文的研究目的在于从食品安全规制的角度分析如何促进中国海水鱼养殖产业的可持续发展。现实意义在于通过分析食品安全规制对海水鱼养殖产业经济效益、养殖生产者行为等产业发展的影响,为如何合理健康规制海水鱼养殖产业,促进中国海水鱼养殖产业的可持续发展提供一定的借鉴;学术意义在于选取海水鱼养殖供求关系及经济效益为指标,对比分析大菱鲆养殖和河鲀养殖在不同规制条件下的产量及经济效益变动情况,同时利用博弈论模型对政府规制者与养殖生产者行为进行博弈分析,分析如何优化政府为促进养殖生产者守法生产的规制路径,进而依据规制效果和规制力度对海水鱼养殖产业的发展提供政策建议。本文首先用文献分析法对已有文献进行梳理分析,综述已有的研究方向、学者的观点,以及本研究方向所涉及到已有的研究和尚且缺乏的研究等,总结出目前有关食品安全规制的研究主要着眼于理论研究及其他行业的运用,而食品安全规制作用于水产品特别是海水鱼养殖产业的研究较少;此外,对于海水鱼养殖产业的研究主要关注如何高效养殖,特别是关于河鲀养殖产业的研究主要关注于河鲀毒素等各项理化性质分析,因此,本文分析食品安全规制对海水鱼养殖产业的影响有关键的作用。其次,用数据跟踪法,分别从《中国渔业统计年鉴》及国家海水鱼产业技术体系产业经济数据库中整理出不同海水鱼历年来的供求变动情况,结合政府规制者在不同年份实施的规制不同,分析变动原因。再次,用问卷调查法,首先设计问卷,对海水鱼养殖产业进行实地预调研后,修改完善问卷,然后大范围进行正式调研,与养殖生产者面对面交流,实地参观考察养殖基地,有针对性地了解不同海水鱼养殖产业的发展情况,获得调研数据。再次,用描述性统计分析法对调研数据进行描述性统计分析,在确保数据的真实性基础上,选择统计学模型,分析不同海水鱼养殖产业的成本收益情况,然后比较不同海水鱼特别是大菱鲆和河鲀（1）养殖产业,同一经济效益评估项目之间的差别,分析其影响因素,总结出两者在不同规制条件下的发展情况等;随后依据规制在不同产业地区的扩散效应,具体分析食品安全规制如何影响养殖生产者的经济效益水平;最后运用博弈论模型对政府的规制行为和养殖生产者的生产行为进行博弈分析,结果表明政府规制者的规制概率和养殖生产者违法生产的概率分别随养殖生产者违法生产被处罚金的增加而降低,根据最新食品安全法,正是通过加大处罚力度的方法来避免出现海水鱼养殖产品的安全问题。本文的主要研究结论是:食品安全规制政策可以提高海水鱼养殖产业的进入壁垒,维持产业成本利润率的稳定;规制者可以通过增加罚金等途径来对养殖生产者的行为进行约束,从而生产合格健康的海水鱼产品。基于此,建议:严格实施海水鱼养殖产业的安全进入规制;强化食品安全质量标准法律法规的惩罚力度;完善海水鱼产品突发事件的应急法律部门与制度;基于产业集聚,强化规制对产业可持续发展的引领作用;巩固海水鱼养殖产业的制度文化,创造海水鱼产品的需求。
高莹莹[9]（2019）在《性别相关基因（Sex-Related Gene）在暗纹东方鲀生殖发育过程中的调控机理研究》文中提出暗纹东方鲀是我国南方重要的淡水养殖种类之一。暗纹东方鲀精巢营养价值很高,规模化养殖全雄暗纹东方鲀,能够显着提高我国养殖暗纹东方鲀的经济效益。本研究采用转录组学、生物信息学和分子生物学的方法,初步探究了暗纹东方鲀性别相关基因在早期发育过程中的分子调控机制。主要研究结果如下:1.暗纹东方鲀幼鱼遗传性别的鉴定采用ARMS-PCR技术快速检测暗纹东方鲀的遗传性别。根据暗纹东方鲀amhr2激酶结构域内存在一个与性别连锁的错义突变SNP位点,设计特异等位基因引物,即在下游PCR引物3’末端不同碱基位点设计不同种类的错配碱基,进行特异性引物的筛选,并通过优化PCR反应体系与反应条件,建立暗纹东方鲀幼鱼遗传性别差异鉴定的ARMS-PCR方法。此外,为了判断ARMS-PCR方法鉴定暗纹东方鲀幼鱼遗传性别的可行性,我们同时利用直接测序法和组织切片法分别鉴定样品的遗传性别和表型性别。结果表明,利用ARMS-PCR方法可以快速区分暗纹东方鲀的遗传性别,并且ARMS-PCR方法的鉴定结果与直接测序结果相同,同时也与组织切片鉴定的表型性别一致。2.暗纹东方鲀早期发育阶段性腺组织的转录组分析对孵化后60150日龄的暗纹东方鲀进行性腺差异的转录组测序和分析。结果显示,卵巢和精巢分别获得clean reads 54229278条和52089726条,其中分别有43588138和43837845条定位到参考基因组中,经过拼接组装后获得33247条unigenes,包含9890个新基因。差异表达基因分析结果显示,相邻发育时期卵巢中的差异表达基因数目普遍高于精巢,且性别间差异表达基因的数量远远高于性别内差异表达基因的个数。进一步对其显着性富集的Pathway进行筛选,共获得24条参与性别分化与性腺发育的代谢通路,其中神经活性配体-受体相互作用、MAPK信号通路和细胞周期等代谢通路中差异表达基因富集较多。从代谢通路差异表达的基因中筛选出cyp19a、cyp19b和hsd17b1等8个卵巢高表达基因以及dmrt1、cyp11a1和hsd3b等15个精巢高表达基因。上述候选基因为暗纹东方鲀性别决定和性别分化的分子调控机制的研究以及性别标记基因的开发提供重要的信息。3.暗纹东方鲀性别相关基因的克隆及结构分析根据转录组数据和已知河豚属鱼类的保守序列,分别设计了amhr2、cyp19a、dmrt1、sox9a和sox9b基因的简并引物,克隆了这5个基因的cDNA全长序列,分析了暗纹东方鲀性别相关基因的序列结构及相关生物信息学特征。暗纹东方鲀amhr2全长cDNA为1868bp（NCBI登录号:MH218814）,编码513个氨基酸。cyp19a全长cDNA为1786bp（NCBI登录号:MH218815）,编码514个氨基酸。dmrt1全长cDNA为1620bp（NCBI登录号:MH218816）,编码294个氨基酸。Sox9a全长cDNA为1274bp（NCBI登录号:MH218818）,编码227个氨基酸,Sox9b全长cDNA为1943bp（NCBI登录号:MH218819）,编码489个氨基酸。基本理化性质结果显示,Amhr2、Dmrt1、Sox9a和Sox9b均属于不稳定的亲水性蛋白,仅Cyp19a属于稳定的亲水性蛋白。同源性和系统发育结果显示,Cyp19a和Dmrt1均与红鳍东方鲀和星点东方鲀同源性最高,亲缘关系最近;而Amhr2和两个Sox9均与红鳍东方鲀同源性最高,亲缘关系最近。4.暗纹东方鲀性别相关基因的表达研究对在暗纹东方鲀Ⅰ龄鱼不同组织和孵化后60150日龄幼鱼性腺组织中amhr2、cyp19a、dmrt1、sox9a和sox9b的表达情况进行相对定量分析。组织表达结果显示,amhr2仅在性腺中表达,且卵巢中的表达量明显高于精巢;cyp19a主要在肌肉和卵巢中表达,其次在其他组织中也有少量表达;dmrt1主要在雄鱼中表达,且其表达模式具有精巢特异性;sox9a和sox9b均在雌鱼下丘脑中表达量最高,在脑、垂体、肝和眼等其他组织中也有较高水平的表达。早期发育阶段性腺组织的表达结果显示,在90日龄雄鱼精巢中sox9a和sox9b表达量均显着升高;在120日龄雌鱼卵巢中cyp19a表达量显着升高,而在120日龄雄鱼精巢中dmrt1表达量显着升高;在150日龄雌鱼卵巢和雄鱼精巢中amhr2表达量均显着升高。以上定量结果说明,这5个基因均参与暗纹东方鲀的性腺发育过程,其中cyp19a与卵巢发育相关,dmrt1与精巢发育相关,sox9a和sox9b与神经调控有关。
梁田田,卢玉平,潘迎捷,方国锋,林昕,黄天娇,卢瑛[10]（2018）在《免疫磁珠层析试纸法快速检测野生横纹东方鲀毒性》文中认为调查并比较了野生横纹东方鲀（Takifugu oblongus）与养殖的菊黄东方鲀（Takifugu flavidus）、暗纹东方鲀（Takifugu obscurus）的毒性。随机选取17尾野生横纹东方鲀并用2%乙酸两次煮沸法提取各组织中河鲀毒素TTX,超滤离心去除杂蛋白,之后采用本实验室制备的免疫磁珠层析试纸条做定性检测,并对筛选出来的典型样本用国标小鼠生物法定量检测毒素含量与定性检测作对照,分析对比各组织TTX含量。野生横纹东方鲀肌肉和精巢TTX含量在0～7μg/g组织,由于个体差异处于无毒或弱毒水平;肝脏和卵巢TTX含量在4～400μg/g组织范围内,属于强毒水平;养殖菊黄东方鲀和暗纹东方鲀各组织均处于无毒水平。
二、暗纹东方鲀实用养殖技术（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、暗纹东方鲀实用养殖技术（论文提纲范文）
（1）暗纹东方鲀雌雄个体形态差异及其判别分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 数据测量 |
| 1.3 数据处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 暗纹东方鲀主成分分析 |
| 2.2 暗纹东方鲀雌雄判别分析 |
| 3 讨论 |
（2）暗纹东方鲀全基因组微卫星标记的开发及应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 河鲀遗传育种研究进展 |
| 1.1.1 选择育种 |
| 1.1.2 杂交育种 |
| 1.1.3 分子标记辅助育种 |
| 1.2 微卫星标记在鱼类遗传育种中的研究进展 |
| 1.2.1 鱼类全基因组微卫星开发研究进展 |
| 1.2.2 微卫星标记在鱼类遗传育种中的应用 |
| 1.3 研究意义和主要内容 |
| 1.3.1 研究意义 |
| 1.3.2 研究内容 |
| 1.3.3 技术路线 |
| 第2章 暗纹东方鲀全基因组微卫星分布特征研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 微卫星统计和分析方法 |
| 2.2.1 基因组序列 |
| 2.2.2 微卫星序列统计术语定义 |
| 2.2.3 数据统计与分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 暗纹东方鲀全基因组微卫星总体分布特征 |
| 2.3.2 暗纹东方鲀不同重复拷贝类型微卫星分布 |
| 2.3.3 暗纹东方鲀微卫星各重复碱基类别特征 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 暗纹东方鲀全基因组中的微卫星含量分析 |
| 2.4.2 暗纹东方鲀不同重复拷贝类型微卫星特征分析 |
| 2.4.3 暗纹东方鲀各碱基类型微卫星特征分析 |
| 第3章 暗纹东方鲀生长性状相关的微卫星标记分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验材料采集 |
| 3.2.2 实验使用仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 暗纹东方鲀全基因组微卫星引物的批量开发及合成 |
| 3.3.2 暗纹东方鲀基因组DNA的提取 |
| 3.3.3 引物质量检测、微卫星PCR产物分析 |
| 3.4 数据分析 |
| 3.4.1 两个生长差异群体差异微卫星位点分析 |
| 3.4.2 差异微卫星位点与生长性状间的关联分析 |
| 3.5 结果与分析 |
| 3.5.1 微卫星扩增结果 |
| 3.5.2 不同群体差异位点分析结果 |
| 3.5.3 差异位点与生长性状间的关联分析结果 |
| 3.6 讨论 |
| 第4章 暗纹东方鲀、红鳍东方鲀及杂交东方鲀(暗纹东方鲀♀×红鳍东方鲀♂)的鉴定及遗传多样性的微卫星分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验用鱼 |
| 4.2.2 实验仪器设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 基因组DNA的提取 |
| 4.3.2 微卫星引物筛选 |
| 4.3.3 3种东方鲀鉴定 |
| 4.3.4 遗传多样性分析 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 3种东方鲀鉴定结果 |
| 4.4.2 3个群体遗传多样性比较 |
| 4.4.3 群体亲缘关系分析 |
| 4.5 讨论 |
| 第5章 小结 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 创新点及展望 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 |
| 致谢 |
（3）菜粕及水解单宁对暗纹东方鲀及草鱼健康及营养代谢的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 1.菜粕对鱼类生长的影响 |
| 1.1 菜粕对鱼类摄食量的影响 |
| 1.2 菜粕对鱼类消化吸收的影响 |
| 1.3 菜粕对鱼类器官健康的影响 |
| 2.菜粕质量改良技术 |
| 3.植物蛋白开发利用的研究方法 |
| 4.菜粕应用的研究展望 |
| 第一章 水解单宁对暗纹东方鲀摄食偏好、消化代谢和抗氧化能力的效应研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物与饲养管理 |
| 1.2 实验设计与饲料 |
| 1.3 样品采集与测定 |
| 1.3.1 样品采集 |
| 1.3.2 肌肉常规营养测定 |
| 1.3.3 抗氧化指标测定 |
| 1.3.4 肝脏和血清生化分析指标测定 |
| 1.3.5 消化酶活性分析 |
| 1.3.6 肝脏HSP70、舌尖及肠道苦味受体T2R1的转录表达 |
| 1.3.7 摄食偏好 |
| 1.4 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 饲料中单宁对暗纹东方鲀生长的影响 |
| 2.2 饲料中单宁对暗纹东方鲀肌肉组成的影响 |
| 2.3 饲料中单宁对暗纹东方鲀抗氧化能力的影响 |
| 2.4 饲料中单宁对暗纹东方鲀肝脏和血清生化的影响 |
| 2.5 饲料中单宁对暗纹东方鲀消化酶活性的影响 |
| 2.6 饲料中单宁对暗纹东方鲀抗应激能力和苦味受体表达的影响 |
| 2.7 饲料中单宁对暗纹东方鲀摄食偏好的影响 |
| 3.讨论 |
| 3.1 水解单宁对暗纹东方鲀生长性能的影响 |
| 3.2 水解单宁对暗纹东方鲀摄食的影响 |
| 3.3 水解单宁对暗纹东方鲀消化及代谢的影响 |
| 3.4 水解单宁对暗纹东方鲀肝脏健康及抗氧化的影响 |
| 第二章 饲料中菜粕对暗纹东方鲀抗氧化及肠道健康的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物与饲养管理 |
| 1.2 实验设计与饲料 |
| 1.3 样品采集与测定 |
| 1.3.1 样品采集 |
| 1.3.2 生化指标测定 |
| 1.3.3 石蜡切片制作 |
| 1.3.4 总RNA提取 |
| 1.3.5 实时荧光定量PCR分析基因表达 |
| 1.4 数据分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 饲料中菜粕对暗纹东方鲀生长性能的影响 |
| 2.2 饲料中菜粕对暗纹东方鲀抗氧化指标的影响 |
| 2.3 饲料中菜粕对暗纹东方鲀后肠组织形态及肠道基因表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 饲料中菜粕对河豚抗氧化能力的影响 |
| 3.2 饲料中菜粕对河豚肠道健康的影响 |
| 第三章 饲料中菜粕对暗纹东方鲀营养代谢的影响及代谢组学初步研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物与饲养管理 |
| 1.2 实验设计与饲料 |
| 1.3 样品采集与测定 |
| 1.3.1 样品采集 |
| 1.3.2 肌肉营养组成测定 |
| 1.3.3 肝脏和血清生化分析指标及消化酶测定 |
| 1.3.4 总RNA提取 |
| 1.3.5 实时荧光定量PCR分析基因表达 |
| 1.4 肝脏代谢组学分析 |
| 1.4.1 化学试剂及样品前处理 |
| 1.4.2 气相色谱-质谱分析条件 |
| 1.5 数据处理 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 饲料中菜粕对暗纹东方鲀肌肉组成的影响 |
| 2.2 饲料中菜粕对暗纹东方鲀肝脏和血清生化指标及消化酶活性的影响 |
| 2.3 饲料中菜粕对暗纹东方鲀肠道及肝代谢相关基因相对表达的影响 |
| 2.4 肝胰脏差异代谢物比较 |
| 2.5 差异代谢物和代谢途径分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 菜粕对暗纹东方鲀蛋白质代谢的影响 |
| 3.2 菜粕对暗纹东方鲀脂质代谢的影响 |
| 第四章 饲料中水解单宁及菜粕对草鱼抗氧化能力及肠道、肝胰脏健康的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物与饲养管理 |
| 1.2 实验设计与饲料 |
| 1.3 样品采集与测定 |
| 1.3.1 样品采集 |
| 1.3.2 抗氧化指标测定 |
| 1.3.3 石蜡切片制作及染色 |
| 1.3.4 肠道各基因的转录表达 |
| 1.4 数据处理 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 饲料中菜粕及单宁对草鱼存活率和生长性能的影响 |
| 2.2 饲料中菜粕及单宁对草鱼生化指标的影响 |
| 2.3 饲料中菜粕与单宁对草鱼肠道的健康的影响:后肠组织形态学及免疫相关基因表达 |
| 3 讨论 |
| 3.1 饲料中菜粕和单宁对草鱼生长的影响 |
| 3.2 饲料中菜粕和单宁对草鱼肝胰脏健康的影响 |
| 3.3 饲料中菜粕和单宁对草鱼肠道健康的影响 |
| 第五章 水解单宁对草鱼营养代谢的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物与饲养管理 |
| 1.2 实验设计与饲料 |
| 1.3 样品采集与测定 |
| 1.3.1 样品采集 |
| 1.3.2 肌肉营养组成测定 |
| 1.3.3 肝脏和血清生化分析指标及消化酶测定 |
| 1.3.4 总RNA提取 |
| 1.3.5 实时荧光定量PCR分析基因表达 |
| 1.5 数据处理 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 饲料中水解单宁对草鱼肌肉组成的影响 |
| 2.2 饲料中水解单宁对草鱼肝脏和血清生化指标及消化酶活性的影响 |
| 2.3 饲料中水解单宁对草鱼肝脏和肠道中代谢相关基因的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 单宁对草鱼蛋白代谢的影响 |
| 3.2 单宁对草鱼脂质代谢的影响 |
| 3.3 单宁对草鱼糖类代谢的影响 |
| 第六章 饲料中菜粕对草鱼营养代谢的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物与饲养管理 |
| 1.2 实验设计与饲料 |
| 1.3 样品采集与测定 |
| 1.3.1 样品采集 |
| 1.3.2 肌肉营养组成测定 |
| 1.3.3 肝脏和血清生化分析指标及消化酶测定 |
| 1.3.4 总RNA提取 |
| 1.3.5 实时荧光定量PCR分析基因表达 |
| 1.4 数据处理 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 饲料中菜粕对草鱼肌肉组成的影响 |
| 2.2 饲料中菜粕对草鱼肝脏和血清生化指标及消化酶活性的影响 |
| 2.3 饲料中菜粕对草鱼肝脏和肠道中代谢相关基因的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 菜粕对草鱼蛋白代谢的影响 |
| 3.2 菜粕对草鱼脂质代谢的影响 |
| 3.3 菜粕对草鱼糖类代谢的影响 |
| 第七章 饲料中水解单宁及菜粕对草鱼肠道菌群和营养代谢的影响及代谢组学初步研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物与饲养管理 |
| 1.2 实验设计与饲料 |
| 1.3 样品采集与测定 |
| 1.3.1 样品采集 |
| 1.3.2 肌肉营养组成测定 |
| 1.3.3 肝脏和血清生化分析指标及消化酶测定 |
| 1.4 肝脏代谢组学分析 |
| 1.5 肠道菌群检测分析 |
| 1.5.1 DNA抽提 |
| 1.5.2 PCR扩增 |
| 1.5.3 高通量测序 |
| 1.5.4 测序数据的生物信息学分析 |
| 1.6 数据处理 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 单宁及菜粕对草鱼生长的影响 |
| 2.2 单宁及菜粕对草鱼肌肉组成的影响 |
| 2.3 单宁及菜粕对草鱼血清、肠道及肝胰脏生化指标的影响 |
| 2.4 单宁及菜粕对草鱼肝胰脏代谢物的影响 |
| 2.5 差异代谢物和代谢途径分析 |
| 2.6 高通量测序结果和菌群多样性分析 |
| 2.7 肠道菌群的组成、丰度及差异 |
| 2.8 肠道菌群与饲料的关系 |
| 3 讨论 |
| 3.1 单宁及菜粕对草鱼生长及肠道菌群的影响 |
| 3.2 单宁及菜粕对草鱼蛋白质代谢的影响 |
| 3.3 单宁及菜粕对草鱼脂质代谢的影响 |
| 3.4 单宁及菜粕对草鱼糖类代谢的影响 |
| 3.5 单宁及菜粕对草鱼健康的影响 |
| 3.6 单宁及菜粕对草鱼代谢通路的影响 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（4）暗纹东方鲀HTR4、TGF-β1和CIRP基因的克隆、表达分析及SNP位点开发（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1.暗纹东方鲀研究概况 |
| 1.1.1 暗纹东方鲀物种特性与简介 |
| 1.1.2 暗纹东方鲀研究现状 |
| 1.2.HTR4、TGF-β1和CIRP研究概况 |
| 1.2.1 HTR4的研究进展 |
| 1.2.2 TGF-β1的研究进展 |
| 1.2.3 CIRP的研究进展 |
| 1.3.第三代分子标记的发展与功能应用 |
| 1.3.1 分子标记的发展 |
| 1.3.2 第三代分子标记的功能与发展 |
| 1.3.3 第三代分子在动物辅助育种上的应用 |
| 1.4.研究目的意义及主要研究内容 |
| 1.4.1 本研究的目的和意义 |
| 1.4.2 本研究的主要内容及技术路线 |
| 第2章 暗纹东方鲀HTR4、TGF-β1和CIRP基因cDNA序列克隆和生物信息学分析 |
| 2.1 实验材料、试剂与仪器 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 总RNA提取与质量检测 |
| 2.2.2 cDNA合成 |
| 2.2.3 5’RACE实验 |
| 2.2.4 3’RACE实验 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 暗纹东方鲀HTR4、TGF-β1和CIRP基因全长和氨基酸序列分析 |
| 2.3.2 暗纹东方鲀HTR4、TGF-β1和CIRP相似性及多重比对分析 |
| 2.3.3 暗纹东方鲀HTR4、TGF-β1和CIRP系统进化树的构建分析 |
| 2.4 讨论 |
| 第3章 暗纹东方鲀HTR4、TGF-β1和CIRP基因表达特征分析 |
| 3.1 实验材料、试剂与仪器 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 暗纹东方鲀各发育时期各组织RNA的提取以及cDNA的合成 |
| 3.2.2 荧光定量PCR检测HTR4、TGF-β1和CIRP mRNA表达量 |
| 3.2.3 数据处理与分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 暗纹东方鲀HTR4基因的不同发育时期组织分布情况 |
| 3.3.2 暗纹东方鲀TGF-β1基因的不同发育时期组织分布情况 |
| 3.3.3 暗纹东方鲀CIRP基因的不同发育时期组织分布情况 |
| 3.4 讨论 |
| 第4章 暗纹东方鲀HTR4、TGF-β1和CIRP基因的SNP位点开发及与生长、耐寒性状关联性分析 |
| 4.1 实验材料、仪器和试剂 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验试剂 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 暗纹东方鲀江阴群体生长数据的获取 |
| 4.2.2 暗纹东方鲀“中洋1号”个体低温耐受性数据获取 |
| 4.2.3 基因组DNA提取 |
| 4.2.4 引物设计 |
| 4.2.5 PCR扩增及测序 |
| 4.2.6 SNPs筛查及基因型的判定 |
| 4.2.7 数据分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 HTR4、TGF-β1、CIRP基因的SNP位点 |
| 4.3.2 暗纹东方鲀HTR4、TGF-β1、CIRP基因SNPs位点群体遗传结构分析 |
| 4.3.3 HTR4、TGF-β1 对应SNP位点不同基因型与个体生长性状的相关性分析 |
| 4.3.4 SNPs位点不同基因型个体与耐寒性能的相关性分析 |
| 4.4 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 5.1 暗纹东方鲀HTR4、TGF-β1和CIRP基因的cDNA结构与进化分析 |
| 5.2 暗纹东方鲀HTR4、TGF-β1和CIRP基因的时空表达特征 |
| 5.3 暗纹东方鲀SNP位点的筛查以及与对应性状关联性分析 |
| 5.4 展望 |
| 附表一:引物列表(Primers used in this Research) |
| 参考文献 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 |
| 致谢 |
（5）暗纹东方鲀sox9基因的克隆和组织表达分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 sox9a和sox9b基因全长序列的克隆 |
| 1.3 sox9a和sox9b基因的表达分析 |
| 1.4 生物信息学分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 暗纹东方鲀sox9a和sox9b基因克隆与序列特征 |
| 2.2 暗纹东方鲀sox9a和sox9b基因同源性分析及氨基酸序列比对 |
| 2.3 暗纹东方鲀Sox9a和Sox9b系统进化树构建 |
| 2.4 暗纹东方鲀雌雄个体sox9a和sox9b基因的组织表达分析 |
| 2.4.1 sox9a基因在雌雄个体各组织中的表达分析 |
| 2.4.2 sox9b基因在雌雄个体组织中的表达分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 sox9基因的转录形式 |
| 3.2 暗纹东方鲀Sox9蛋白功能域分析 |
| 3.3 暗纹东方鲀sox9a和sox9b基因的组织表达分析 |
| 4 结论 |
（6）文蛤与蓝蛤鲜味肽的呈味特性及其与鲜味受体T1R1/T1R3的分子作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 鲜味的研究现状 |
| 1.2 鲜味物质的研究现状 |
| 1.2.1 氨基酸类 |
| 1.2.2 核苷酸类 |
| 1.2.3 有机酸类 |
| 1.2.4 复合鲜味剂 |
| 1.2.5 鲜味肽 |
| 1.3 鲜味肽的研究现状 |
| 1.3.1 鲜味肽的来源 |
| 1.3.2 鲜味肽的特点 |
| 1.3.3 鲜味肽的构效关系与呈鲜机制 |
| 1.3.4 鲜味肽与其他鲜味物质的协同作用 |
| 1.3.5 鲜味肽的制备和鉴定方法 |
| 1.4 研究内容、目的及意义 |
| 1.4.1 研究内容 |
| 1.4.2 研究目的 |
| 1.4.3 研究意义 |
| 第二章 文蛤与蓝蛤呈味基料的风味特性研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与设备 |
| 2.2.1 试验材料 |
| 2.2.2 试验试剂 |
| 2.2.3 仪器设备 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 呈味基料的制备 |
| 2.3.2 游离氨基酸含量的测定 |
| 2.3.3 核苷酸含量的测定 |
| 2.3.4 无机离子的测定 |
| 2.3.5 琥珀酸的测定 |
| 2.3.6 可溶性肽含量测定 |
| 2.3.7 电子舌测定 |
| 2.3.8 挥发性化合物的测定 |
| 2.3.9 电子鼻测定 |
| 2.3.10 数据处理 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 游离氨基酸含量 |
| 2.4.2 呈味核苷酸含量 |
| 2.4.3 琥珀酸、可溶性肽和无机离子含量 |
| 2.4.4 电子舌测定结果 |
| 2.4.5 GC-MS挥发性物质分析 |
| 2.4.6 电子鼻测定结果 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 文蛤与蓝蛤鲜味肽的分离鉴定 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与设备 |
| 3.2.1 试验材料 |
| 3.2.2 试验试剂 |
| 3.2.3 仪器设备 |
| 3.3 试验方法 |
| 3.3.1 鲜味肽的制备 |
| 3.3.2 鲜味肽的超滤分离和凝胶层析分离 |
| 3.3.3 鲜味肽的反相高效液相色谱分离 |
| 3.3.4 MALDI-TOF/TOF MS鉴定鲜味肽的序列 |
| 3.3.5 感官评定 |
| 3.3.6 电子舌测定 |
| 3.3.7 鲜味肽活性预测 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 超滤和凝胶层析分离结果 |
| 3.4.2 RP-HPLC分离结果 |
| 3.4.3 MALDI-TOF/TOF MS鉴定鲜味肽序列 |
| 3.4.4 鲜味肽活性预测 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 合成肽的呈味特性及其与鲜味受体T1R1/T1R3 分子作用研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与设备 |
| 4.2.1 试验材料 |
| 4.2.2 试验试剂 |
| 4.2.3 仪器设备 |
| 4.3 试验方法 |
| 4.3.1 感官评价测定滋味轮廓 |
| 4.3.2 电子舌测定 |
| 4.3.3 描述性鉴评试验 |
| 4.3.4 同源模拟 |
| 4.3.5 鲜味肽与鲜味受体T1R1/T1R3 的分子对接 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 合成肽的滋味轮廓 |
| 4.4.2 合成肽的描述性鉴评 |
| 4.4.3 鲜味受体T1R1/T1R3 的同源模拟 |
| 4.4.4 鲜味肽与鲜味受体T1R1/T1R3 的分子对接 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 结论、创新点和展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 展望 |
| 参考文献 |
| 硕士期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（7）暗纹东方鲀（Takifugu fasciatus）应对低温胁迫的生理响应和分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 鱼类应对低温胁迫的研究进展 |
| 1.2 暗纹东方鲀的生物学特性与研究现状 |
| 1.3 高通量测序技术在鱼类研究上的应用 |
| 1.4 低温和盐度对鱼类生理生化的影响 |
| 1.5 本研究的目的和意义 |
| 1.6 研究内容 |
| 1.7 技术路线 |
| 第二章 低温胁迫下暗纹东方鲀肝脏的转录组学分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 低温胁迫下暗纹东方鲀肝脏的蛋白质组学分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 低温胁迫下暗纹东方鲀肝脏的代谢组学分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 低温胁迫下暗纹东方鲀肝脏的多组学联合分析 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 多组学联合分析流程及关键基因SNPs的预测 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 小结与讨论 |
| 第六章 低温下盐度对暗纹东方鲀生理生化的影响 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料和方法 |
| 6.3 结果 |
| 6.4 小结与讨论 |
| 第七章 全文总结 |
| 本研究的主要创新点及展望 |
| 全文缩列表 |
| 参考文献 |
| 在读期间的科研成果目录 |
| 致谢 |
（8）食品安全规制对海水鱼养殖产业发展的影响研究 ——以大菱鲆和河鲀养殖产业为例（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 引言 |
| 1.1 选题背景与意义 |
| 1.1.1 选题背景 |
| 1.1.2 研究意义 |
| 1.2 研究方法与思路 |
| 1.2.1 研究方法 |
| 1.2.2 研究思路及内容 |
| 1.3 技术路线与概念界定 |
| 1.3.1 技术路线 |
| 1.3.2 概念及研究范围界定 |
| 1.4 创新与不足之处 |
| 1.4.1 创新之处 |
| 1.4.2 不足之处 |
| 第二章 文献述评与理论综述 |
| 2.1 食品安全规制及海水鱼养殖产业研究热点及关注度 |
| 2.2 关于食品安全规制的研究进展 |
| 2.2.1 关于食品安全规制政策的研究 |
| 2.2.2 关于食品安全问题的研究 |
| 2.2.3 关于规制效果测度方法的研究进展 |
| 2.3 关于海水鱼养殖产业中食品安全规制的研究进展 |
| 2.3.1 关于水产品中食品安全规制的研究进展 |
| 2.3.2 关于大菱鲆养殖产业中食品安全规制的研究进展 |
| 2.3.3 关于河鲀养殖产业中食品安全规制的研究进展 |
| 2.4 文献述评 |
| 2.5 理论综述 |
| 2.5.1 社会性规制理论 |
| 2.5.2 供给与需求理论 |
| 第三章 食品安全规制对海水鱼养殖产业经济效益影响分析-以大菱鲆和河鲀养殖产业为例 |
| 3.1 海水鱼养殖产业发展现状 |
| 3.1.1 海水鱼养殖产业发展总体现状 |
| 3.1.2 大菱鲆养殖产业与河鲀养殖产业现状 |
| 3.1.3 讨论:产业集聚发展条件下规制对产业发展的影响 |
| 3.2 食品安全规制对海水鱼养殖供求关系的影响 |
| 3.2.1 对大菱鲆养殖供求变动的影响 |
| 3.2.2 对河鲀养殖供求变动的影响 |
| 3.2.3 小结 |
| 3.3 食品安全规制对海水鱼养殖成本收益的影响分析 |
| 3.3.1 数据来源 |
| 3.3.2 成本分析 |
| 3.3.3 收益分析 |
| 3.3.4 讨论:食品安全规制如何影响成本收益 |
| 3.4 食品安全规制对海水鱼养殖成本利润率的影响分析 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 规范海水鱼养殖生产者行为的优化规制分析 |
| 4.1 前提假设 |
| 4.2 构建模型 |
| 4.3 政府规制者与养殖生产者的行为分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 优化食品安全规制,促进海水鱼养殖产业可持续发展的对策建议 |
| 5.1 严格实施海水鱼养殖产业的安全进入规制 |
| 5.2 强化食品安全质量标准法律法规的惩罚力度 |
| 5.3 完善海水鱼产品突发事件的应急法律部门与制度 |
| 5.4 基于产业集聚,强化规制对产业可持续发展的引领作用 |
| 5.5 巩固海水鱼养殖产业制度文化,创造海水鱼产品的需求 |
| 第六章 总结及进一步展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（9）性别相关基因（Sex-Related Gene）在暗纹东方鲀生殖发育过程中的调控机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 暗纹东方鲀 |
| 1.2 性别决定与性别分化 |
| 1.2.1 性腺的分化 |
| 1.2.2 性染色类型 |
| 1.2.3 性别决定机制 |
| 1.3 性别分化相关基因的研究进展 |
| 1.3.1 雄性分化相关基因 |
| 1.3.2 雌性分化相关基因 |
| 1.4 本研究的目的及意义 |
| 第二章 暗纹东方鲀幼鱼遗传性别的鉴定 |
| 2.1 实验材料与仪器 |
| 2.1.1 实验用鱼 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 表型性别鉴定 |
| 2.2.2 引物设计 |
| 2.2.3 等位基因片段的PCR反应 |
| 2.2.4 ARMS-PCR 引物特异性鉴定及反应条件优化 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 表型性别的鉴定 |
| 2.3.2 性别差异等位基因序列片段的PCR扩增 |
| 2.3.3 ARMS-PCR引物特异性的鉴定及反应条件的优化 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 暗纹东方鲀早期发育阶段的性腺转录组分析 |
| 3.1 实验材料与仪器 |
| 3.1.1 样品采集 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 cDNA文库构建和上机测序 |
| 3.2.2 测序数据处理 |
| 3.2.3 转录组数据生物信息学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 转录组测序质量评估 |
| 3.3.2 测序序列与参考基因组序列的比对分析 |
| 3.3.3 unigene功能注释 |
| 3.3.4 新转录本预测 |
| 3.3.5 差异基因表达分析 |
| 3.3.6 差异表达基因的富集分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 转录组数据分析 |
| 3.4.2 与性腺发育相关的通路 |
| 3.4.3 性腺差异表达基因的分析 |
| 第四章 暗纹东方鲀性别相关基因的克隆及分析 |
| 4.1 实验材料与仪器 |
| 4.1.1 实验用鱼 |
| 4.1.2 实验试剂 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 cDNA的合成 |
| 4.2.2 cDNA保守片段扩增 |
| 4.2.3 5 ˊ-RACE和3ˊ-RACE cDNA的克隆 |
| 4.2.4 序列分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 amhr2的c DNA克隆和氨基酸序列特征分析 |
| 4.3.2 cyp19a的 c DNA克隆和氨基酸序列特征分析 |
| 4.3.3 dmrt1的c DNA克隆和氨基酸序列特征分析 |
| 4.3.4 sox9a和 sox9b的 c DNA克隆和氨基酸序列特征分析 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 暗纹东方鲀Amhr2 蛋白的功能域分析 |
| 4.4.2 暗纹东方鲀Cyp19a蛋白信号肽的结构预测及功能分析 |
| 4.4.3 暗纹东方鲀DM结构域的特征及功能分析 |
| 4.4.4 暗纹东方鲀Sox9 蛋白的功能域分析 |
| 第五章 暗纹东方鲀性别相关基因的表达研究 |
| 5.1 实验材料与仪器 |
| 5.1.1 样品采集 |
| 5.1.2 实验试剂 |
| 5.1.3 实验仪器 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 引物设计 |
| 5.2.2 cDNA合成 |
| 5.2.3 Real-Time PCR扩增 |
| 5.2.4 数据处理 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 暗纹东方鲀amhr2 基因的表达特征 |
| 5.3.2 暗纹东方鲀cyp19a基因的表达特征 |
| 5.3.3 暗纹东方鲀dmrt1 基因的表达特征 |
| 5.3.4 暗纹东方鲀sox9a基因的表达特征 |
| 5.3.5 暗纹东方鲀sox9b基因的表达特征 |
| 5.4 讨论 |
| 5.4.1 暗纹东方鲀amhr2 基因的表达分析 |
| 5.4.2 暗纹东方鲀cyp19a基因的表达模式 |
| 5.4.3 暗纹东方鲀dmrt1 基因的表达分析 |
| 5.4.4 暗纹东方鲀sox9a和 sox9b的组织表达分析 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 科研成果 |
（10）免疫磁珠层析试纸法快速检测野生横纹东方鲀毒性（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 仪器与试剂 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 样品制备 |
| 1.2.2 试纸条制备 |
| 1.2.3 试纸条的定性结果判定 |
| 1.2.4 小鼠生物法 |
| 2 结果与讨论 |
| 2.1 免疫磁珠层析试纸条检测结果 |
| 2.2 小鼠生物法定量检测结果 |
| 3 结论 |
四、暗纹东方鲀实用养殖技术（论文参考文献）
- [1]暗纹东方鲀雌雄个体形态差异及其判别分析[J]. 毕宜慧,张鑫宇,李杰,孙亦如,王浩哲,付东勇,尹绍武. 海洋渔业, 2021(05)
- [2]暗纹东方鲀全基因组微卫星标记的开发及应用[D]. 徐杰杰. 南京师范大学, 2021
- [3]菜粕及水解单宁对暗纹东方鲀及草鱼健康及营养代谢的影响[D]. 姚静婷. 上海海洋大学, 2020(03)
- [4]暗纹东方鲀HTR4、TGF-β1和CIRP基因的克隆、表达分析及SNP位点开发[D]. 张鑫宇. 南京师范大学, 2020(03)
- [5]暗纹东方鲀sox9基因的克隆和组织表达分析[J]. 高莹莹,刘新富,胡鹏,刘滨,郭正龙. 上海海洋大学学报, 2019(06)
- [6]文蛤与蓝蛤鲜味肽的呈味特性及其与鲜味受体T1R1/T1R3的分子作用研究[D]. 谢晓霞. 渤海大学, 2019(01)
- [7]暗纹东方鲀（Takifugu fasciatus）应对低温胁迫的生理响应和分子机制研究[D]. 文鑫. 南京师范大学, 2019(02)
- [8]食品安全规制对海水鱼养殖产业发展的影响研究 ——以大菱鲆和河鲀养殖产业为例[D]. 张迪. 上海海洋大学, 2019(03)
- [9]性别相关基因（Sex-Related Gene）在暗纹东方鲀生殖发育过程中的调控机理研究[D]. 高莹莹. 上海海洋大学, 2019(03)
- [10]免疫磁珠层析试纸法快速检测野生横纹东方鲀毒性[J]. 梁田田,卢玉平,潘迎捷,方国锋,林昕,黄天娇,卢瑛. 上海海洋大学学报, 2018(06)